细菌的接种及分离培养

有鞭毛细菌： 有鞭毛细菌：在 培养基中沿穿刺 线并向外扩散生 长，穿刺线边缘 模糊。 模糊。 无鞭毛细菌： 无鞭毛细菌：只 沿穿刺线生长， 沿穿刺线生长， 穿刺线边缘清晰。 穿刺线边缘清晰。
1、琼脂斜面接种法 、
菌种：葡萄球菌、 菌种：葡萄球菌、 大肠埃希菌等普通 琼脂培养物； 琼脂培养物； 培养基： 培养基：斜面固体 培养基； 培养基； 用途：扩增细菌、 用途：扩增细菌、 保存菌种； 保存菌种；或用于 观察其某些生化特 性。
琼脂斜面培养基接种法
2、液体接种法 、
菌种：葡萄球菌或大肠埃 菌种： 希菌、 希菌、枯草杆菌等普通琼 脂培养物； 脂培养物； 培养基：液体培养基； 培养基：液体培养基； 接种方法：液体接种法。 接种方法：液体接种法。 从斜面菌种接入液体 培养液； 培养液；从液体培养液接 入液体培养液； 入液体培养液； 用途：扩增细菌， 用途：扩增细菌，用于观 察细菌的生长特性或测定 其生化特性。 其生化特性。
菌落与菌苔
菌落（ 型 菌落（R型）
菌落（ 型 菌落（S型）
菌苔
菌落的形态特征有助于细菌的鉴别
细菌在液体培养基 细菌在液体培养基中的生长现象 液体培养基中的生长现象
混浊：大多数细菌 混浊： 沉淀： 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜： 菌膜：多见于需氧菌
细菌在半固体培养基 细菌在半固体培养基中的生长现象 半固体培养基中的生长现象
细菌的分离— 细菌的分离—平板划线法
1.分区划线法： 1.分区划线法： 分区划线法 2.连续划线法 2.连续划线法： 连续划线法：
1.分区划线法 1.分区划线法
第一区划线 灭菌接种环
第二区划线
灭菌接种环
第三区划线
Baidu Nhomakorabea
灭菌接种环
2.连续划线法 2.连续划线法
（三）细菌的纯种接种法
当细菌分离成纯种后，常需要接种到相关 细菌分离成纯种后 的培养基中， 测试其各种生物学性状。 的培养基中，以测试其各种生物学性状。 一般可用斜面、半固体、 一般可用斜面、半固体、液体培养基来 检验细菌的培养特性， 检验细菌的培养特性，相应培养基的接 种方法有三种。 种方法有三种。 琼脂斜面接种法 液体接种法 半固体接种法
图－6
三、细菌的接种法
细菌接种的基本程序
灭菌接种环
杀灭接种环沾染的细菌， 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本
沾取标本
接种
灭菌接种环
杀灭接种环沾染的细菌， 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境
（二）细菌的琼脂平板分离划线接种法
菌种：葡萄球菌、 菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂 培养物； 培养物； 培养基：固体平板培养基； 培养基：固体平板培养基； 用途 ：该法主要是借助划线而将混杂的细 菌在琼脂表面分散开， 菌在琼脂表面分散开，使单个细菌能固定 在某一点，生长繁殖后形成单个菌落， 在某一点，生长繁殖后形成单个菌落，以 达到分离纯种的目的。 达到分离纯种的目的。
实 验 6 细菌培养法
一、目的要求
1、掌握细菌的一般培养法； 掌握细菌的一般培养法； 2、掌握细菌培养的接种方法，进一步 掌握细菌培养的接种方法， 熟悉无菌操作技术。 熟悉无菌操作技术
二、实验材料
菌种：葡萄球菌培养物、 菌种：葡萄球菌培养物、大肠杆菌培养 枯草杆菌培养物、变形杆菌培养物； 物、枯草杆菌培养物、变形杆菌培养物； 实验器材：接种环、接种针、酒精灯； 实验器材：接种环、接种针、酒精灯； 培养基：普通琼脂平板、试管斜面、 培养基：普通琼脂平板、试管斜面、液 体培养基、半固体培养基； 体培养基、半固体培养基；
细菌接种的要求
无菌操作 细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台 内进行。 内进行。 无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。 无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。 细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌 标本的采集 无菌试管、 无菌试管、烧瓶的使用
接种工具
常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、 常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种 接种针 玻璃涂棒等。 锄、玻璃涂棒等。
细菌在固体培养基 细菌在固体培养基中的生长现象 固体培养基中的生长现象
菌落： 菌落： 定义：指单个细菌在平板培养基上37 1837℃ 定义：指单个细菌在平板培养基上37℃1824h的生长繁殖 的生长繁殖， 24h的生长繁殖，形成单一的肉眼可见的细菌 集团。 集团。 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、 透明度、湿润度、黏度、 透明度、湿润度、黏度、溶血性 菌落类型：光滑型（ ）、粗糙型 粗糙型（ ）、黏 菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏 液型（M） 液型（ 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。
3、半固体穿种接种法 、
菌种：葡萄球菌、 菌种：葡萄球菌、大肠埃 希菌等普通琼脂培养物； 希菌等普通琼脂培养物； 培养基： 培养基：半固体培养基 接种方法：穿刺接种法。 接种方法：穿刺接种法。 接种针垂直地穿入培养 用接种针垂直地穿入培养 基中心至底部； 基中心至底部；然后沿着 将针拔出。 原接种线将针拔出 原接种线将针拔出。 用途： 用途：检验细菌的运动性 或观察细菌的生化反应。 或观察细菌的生化反应。
四、细菌培养法
一般培养（需氧培养）： 一般培养（需氧培养）：
★培养温度：35℃（采用恒温培养箱） 培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h 培养时间：18～
二氧化碳培养法：烛缸法、 二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培 养箱 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌 氧罐、疱肉培养法、 氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等