蛋白的固定方法

蛋白的固定方法

实验在3 mL或5 mL离心管中的进行，反应体系是1.5 mL。以下实验步骤针对1.5 mL反应体系可以等比例放大。

活化剂：1-（3-二甲基丙基）-3-乙基碳二亚，简称EDC。

1.配置20 mM，25℃下的pH为5.0的MES缓冲液，配置20 mM，25℃

下的pH为7.5的pBS缓冲液，备用；

2.使用MES缓冲液配置400 μg/mL的抗体溶液备用，使用pBS缓冲液

配置400 μg/mL的BSA溶液备用;

3.在1.5 mL反应体系中，将粒径为90-100 nm，浓度为6 mg/mL的纳米

载体分散在MES缓冲液中，加入5 nM EDC粉末，迅速震荡，放置

在恒温摇床上，25 ℃，120 rpm，反应15 min；

4.16000 rpm离心30 min,弃上清，收集离心沉淀；

5.向沉淀中加入1 mL的MES缓冲液，用超声破碎机超20 s，混匀后分

成2管标记A和B（分别500uL），待用；

6.把A管B管分别滴加在400 ug/mL的抗体中（500uL），

7.探头超声10 S；

8.水浴超声30 min；

9.把混匀好的A ，B两管分别滴加在400 mg/mL的BSA溶液中（500 L）；

10.放置在恒温摇床上，25℃，120 rpm，反应2 hr；

11.16000 rpm离心28 min,弃上清，收集离心沉淀；

12.在沉淀中加入1 mL pBS，用超声破碎机超15s,混匀；

13.16000rpm离心24 min,弃上清，收集离心沉淀；

14.在沉淀中加入1mL pBS，用超声破碎机超45s,混匀；

15.测粒径，电位。