葛根生津止渴黄酮类药效组分分析-程京艳,张贵君,黄睿

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第17卷 第3期 2015 年 3 月
辽宁中医药大学学报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 17 No. 3 Mar .，2015
中药的质量体现着中药治疗疾病的本质，建立
完善的质量标准评价体系，是中药研发的核心问题。

药效组分理论的提出纠正了现行中药质量标准存在的问题，填补了传统中药标准与现代中药标准融合的空白。

中药的药效组分具有配伍稳定、组成固定，各组分的含量、比例恒定的特征，正是这种比例关系决定着中药的疗效。

药效组分的确是以传统中药的功能与主治作为基本验证的指标[1-2]。

本次实验
是在中药药效组分理论指导下，分析配伍对葛根中生津止渴黄酮类药效组分3'-羟基葛根素-葛根素-大豆苷-大豆苷元的影响，探讨中药药效组分与药效的相关性，为建立与临床疗效相对应的质量标准提供科学数据。

1 仪器与材料1.1 仪器
Agilent1100 高效液相色谱仪（HP 真空脱气泵，
葛根生津止渴黄酮类药效组分分析
程京艳1，2
，张贵君2，黄睿3
（1.北京积水潭医院，北京 100035；2.北京中医药大学中药学院，北京 100102；3.北京医药集团职工大学，北京 100079）摘 要：目的：研究葛根四组药对生津止渴黄酮类药效组分的含量变化规律，探讨配伍、药效组分与饮片性味
功能的相关性，为建立与临床疗效相对应的质量标准提供科学依据。

方法：采用HPLC 法梯度洗脱测定葛根生津止渴功效的四组药对中黄酮类药效组分3'-羟基葛根素-葛根素-大豆苷-大豆苷元。

结果：葛根-天花粉，葛根-黄芪，葛根-知母，葛根-玄参药对中葛根的黄酮类药效组分含量比例依次为2.05∶4.27∶1.12∶1，2.43∶5.15∶1.15∶1，2.08∶4.53∶1.00∶1，1.50∶4.12∶1.01∶1。

结论：葛根生津止渴的黄酮类药效组分3'-羟基葛根素-葛根素-大豆苷-大豆苷元比例范围为1.50~2.43∶4.12~5.15∶1.01~1.15∶1，可作为其质量控制的指标。

关键词：葛根；药对；生津止渴；药效组分；与临床疗效对应
中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2015) 03- 0051- 03
收稿日期：2014-07-28
作者简介：程京艳（1972-），女，北京人，副主任药师，硕士，研究方向：临床中药学、中药鉴定方法学。

通讯作者：张贵君（1954-），男，黑龙江安达人，教授，博士研究生导师，研究方向：中药鉴定方法学研究，中药药效组分及药效组分质量评 价体系研究，中药基原与药效组分资原研究。

E-mail：guijunzhang@。

Analysis of Flavonoids Active Components Alignment in Radix Puerariae Lobatae Stimulating Saliva and Reducing Thirst
CHENG Jingyan 1，2
，ZHANG Guijun 2，HUANG Rui 3
（1. Beijing Jishuitan Hospital，Beijing 100035，China；2. School of Traditional Chinese
Materia Medica，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China；
3. Beijing Medicine Group Workers University，Beijing 100079，China）
Abstract：Objective ：To study the determination variation of flavonoids active components alignment in four groups of Radix Puerariae Lobatae compatibilities. To investigate the correlation among compatibility，active components alignment and tastes of herbs function. To provide the scientific basis for establishing quality standard corresponding to clinic curative effect. Methods ：The flavonoids active components alignment 3'-hydroxy puerarin-puerarin-daidzin-daidzein in four groups of Radix Puerariae Lobatae compatibilities which can stimulate saliva and reduce thirst were analyzed by HPLC with gradient elution.
Results ：The proportion of determination of flavonoids active components alignment in Radix Puerariae Lobatae-Radix Trichosanthisk，Radix Puerariae Lobatae-Radix Astragali，Radix Puerariae Lobatae-Rhizoma Anemarrhenae，Radix Puerariae Lobatae-Radix Scrophulariae was 2.05∶4.27∶1.12∶1，2.43∶5.15∶1.15∶1，2.08∶4.53∶1.00∶1，1.50∶4.12∶1.01∶1 respectively. Conclusion ：The variation range of the flavonoids active components alignment in Radix Puerariae Lobatae which can stimulate saliva and reduce thirst in which 3'-hydroxy puerarin-puerarin-daidzin-daidzein was 1.50-2.43∶4.12-5.15∶1.01-1.15∶1，which can be scientific indicators for quality control.
Key words：Radix Puerariae Lobatae；drug pair；stimulating saliva and reducing thirst；active components alignment；correspondence with clinical efficacy DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2015.03.017
辽宁中医药大学学报 17卷
HP四元泵，HP自动进样，HP柱温箱，HPDAD检测器）；BP110S电子分析天平；BT25S型电子分析天平。

1.2 标准品
葛根素（批号110752-200511）、大豆苷（批号111738-200501）、大豆苷元（批号1502-200101），均由中国药品生物制品检定所提供；3'-羟基葛根素（批号201005），由四川省维克奇医药公司提供。

1.3 葛根
为豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi.的干燥根。

购于北京同仁堂药店，符合《中华人民共和国药典》一部（2010年版）[3]规定的标准，由张贵君教授鉴定。

1.4 药对
葛根-天花粉为北京中医药大学东直门医院吕仁和教授经验药对，剂量比例1∶2；葛根-黄芪见于《证治汇补》黄芪葛根汤，剂量比例1.5∶1；葛根-知母见于《医学哀中参西录》玉液汤，剂量比例1∶1；葛根-玄参为北京中医药大学东直门医院赵进喜教授经验药对，剂量比例2∶1[4-5]。

2 方法与结果
2.1 色谱条件
Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）-0.2%磷酸水（B）梯度洗脱（表1）；检测波长：250 nm；流速为1.0 mL·min-1；进样量10 μL；柱温25 ℃。

表1　HPLC梯度洗脱条件
时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0~3020→3580→65
30~5035→6065→40
50~6060→7040→30
2.2 供试品溶液的制备
按照配伍比例计算出各药对相应的剂量：葛根9 g，天花粉18 g，知母9 g，黄芪13.5 g，玄参4.5 g。

精密称取各组药对，加10倍量水煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，合并煎液，趁热过滤，滤液浓缩至每毫升相当与原药材0.1 g的药液，分别取各药液1 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，离心，分出上清液，相对浓度为0.01 g·mL-1作为供试品溶液。

2.3 标准溶液的制备
分别精密称取葛根素6.0 mg，3'-羟基葛根素3.9 mg，大豆苷6.4 mg，大豆苷元6.1 mg，置于100 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，标准溶液浓度分别为0.060、0.039、0.064、0.061 mg·ml-1。

2.4 线性关系考察
精密吸取1、5、10、15、20 μL药效组分标准溶液，按表2.1项下的色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，对照品进样量（μg）为横坐标，进行线性回归，得回归方程：
葛根素：y=6926.7x-24.725，R2=0.999 9；线性范围：0.06~1.2 μg。

3'-羟基葛根素：y=2 831.2x+19.34，R2=0.999 9；线性范围：0.039~0.78 μg。

大豆苷：y=5 679.4x-0.487 9，R2=0.999 1；线性范围：0.064~1.28 μg。

大豆苷元：y=1 781.5x-7.223 6，R2=0.999 7；线性范围：0.061~1.22μg。

2.5 精密度试验
精密吸取药效组分标准溶液10 μL（n=5），按上述色谱条件测定，记录峰面积，RSD分别为0.90%、0.14%、0.45%、0.60%，表明精密度良好，符合定量分析要求。

2.6 稳定性试验
精密吸取葛根药对供试品溶液，分别在放置0、2、4、6、8 h后，注入液相色谱仪，测得峰面积，RSD分别为1.10%、0.72%、0.58%、1.66%，表明供试品溶液8 h内性质稳定。

2.7 重现性试验
精密吸取供试品溶液（n=5），按表2项下所列色谱条件测定峰面积，RSD值分别为0.82%、0.32%、0.71%、1.23%，表明本方法重现性良好。

2.8 回收率试验
精密吸取各药液0.5 mL（正常量的1/2），分别精密加入4种对照品，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，摇匀，滤过，分别注入液相色谱仪测定，计算回收率（表2）。

表2 葛根生津止渴黄酮类药效组分回收率测定结果
葛根药对
3'-羟基葛根素（%） 葛根素（%） 大豆苷（%） 大豆苷元（%）
回收率RSD回收率RSD回收率RSD回收率RSD 葛根-天花粉 98.65 1.19101.39 2.99 98.83 1.26101.73 2.15葛根-黄芪 97.700.64100.760.78101.01 2.12 99.35 1.65葛根-知母 99.18 2.01 99.610.96101.67 2.47100.41 2.35葛根-玄参100.25 2.84100.49 2.37100.39 2.90100.55 2.76 2.9 生津止渴药对中葛根黄酮类药效组分含量测定 
每一供试品溶液自动进样3次，按表1项下色谱条件测定峰面积，外标法计算每个药对中4个组分的含量（表3）。

表3 葛根生津止渴功效黄酮类药效
组分的含量及比例（n=3）
药对
化合物（mg·mL-1）
各成分比例
3'-羟基
葛根素
葛根素大豆苷大豆苷元
葛根-天花粉0.15360.32230.08420.0754 2.05∶4.27∶1.12∶1葛根-黄芪0.22820.48310.10800.0938 2.43∶5.15∶1.15∶1葛根-知母0.09310.20290.04480.0447 2.08∶5.53∶1.00∶1葛根-玄参0.03570.09770.02390.0237 1.50∶4.12∶1.01∶1 3 讨论
（1）“药对”，又称“对药”，是中药配伍的一种特殊形式，从古至今被医家广为应用，是中药配伍的最小单位，体现着中药配伍的基本原则[6]。

葛根的功效为解肌退热、生津、透疹、升阳止泻，正是由于葛根通过与不同饮片的配伍而发挥不同的功效主治。

本次实验以葛根具有生津功效的最小配伍单位“药对”为载体，旨为探寻中药配伍与药效组分变化的相关性。

（2）本次实验是在传统中医药理论和中药药效组分理论为基础的指导下进行，以传统中药饮片的药对为载体，运用高效液相色谱法对葛根生津止渴药对的黄酮类药效组分指标进行测定，摒弃了单一化合物含量作为中药质量标准的观点，建立了葛根生津止渴药对的质量标准，这种指标的建立为中药
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痰咳净片收载于卫生部药品标准中药成方制
剂第二十册，是桔梗、咖啡因、远志、冰片、苦杏仁、五倍子和甘草7味药制备而成的复方制剂，具有通窍顺气、消炎镇咳、促进排痰等作用。

用于急慢性支
气管炎、胸闷、咽喉炎、肺气肿等引起的咳嗽痰多、气促、气喘等症。

在其原标准中，只有咖啡因的含量HPLC-ELSD法测定痰咳净片中桔梗皂苷D含量
刘爱明，周文君
（朝阳市食品药品检验所，辽宁 朝阳 122000）
摘 要：目的：建立痰咳净片中桔梗皂苷D的含量测定方法。

方法：采用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器
（HPLC-ELSD），色谱柱为Kromasil C 18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-水（26∶74），流速为1.0 mL/min，ELSD 漂移管温度为80 ℃，气体流速为2.6 SLPM/min。

结果：桔梗皂苷D 进样量在0.499 4~12.485 4 μg 线性范围内峰面积线性关系良好（r =0.999 7），平均回收率98.51%，RSD=0.8%（n =6）。

结论：该方法准确、可靠，重复性好，灵敏度高，可用于痰咳净片的质量控制标准。

关键词：痰咳净片；桔梗皂苷D；高效液相色谱法-蒸发光散射检测器
中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2015) 03- 0053- 03
收稿日期：2014-08-15
作者简介：刘爱明（1982-），女，辽宁朝阳人，主管药师，硕士，研究方向：抗生素药品的化学检验及中药微生物限度、无菌药品的检验。

Determination of Platycodin D in Compound Tankejing
Tablets by HPLC-ELSD Method
LIU Aiming，ZHOU Wenjun
（Chaoyang Institute for Food and Drug Control，Chaoyang 122000，Liaoning，China）
Abstract：Objective ：To establish a method for determination the content of platycodin D in Compound Tankejing Tablets. Method ：High performance liquid chromatography with evaporative light scattering detector（HPLC-ELSD）method was used. The column was Kromasil C 18（4.6 mm×250 mm，5 μ m）and the mobile phase acetonitrile water was 26∶74. The flow rate was 1.0 mL/min and the ELSD drift tube temperature was 80 ℃ and the gas flow rate was 2.6 SLPM/min. Results ：The linear range of Platycodin D was 0.499 4~12.485 4 μg（r =0.999 9）. The average recovery was 98.51%，RSD=0.8%（n =6）. Conclusion ：The method is accurate and reliable with good reproducibility and high sensitivity and can be used for the quality control of Compound Tankejing Tablets.
Key words：Tankejing tablet；platycodin D；HPLC-ELSD
质量标准评价体系提出了新的思路和新的方向，对于揭示中药的本质及现代中药的研究方向具有重大意义。

（3）实验表明，在葛根治疗糖尿病的这四组药对中，黄酮类药效组分（3'-羟基葛根素-葛根素-大豆苷-大豆苷元）均以葛根素的含量最高，大豆苷元的含量最低。

使用单因素方差分析，P >0.05，说明葛根-天花粉、葛根-黄芪、葛根-知母、葛根-玄参四组药对中各药效组分的含量与比例相近，没有显著性差异，从而确定了葛根生津功效的药效组分比例与临床的关系。

而在葛根-玄参药对中虽然葛根的用量为玄参的两倍，但各药效组分的含量和比例均为最低，因此说明中药在与不同饮片配伍发挥不同的治疗目的时，其所含的药效组分的含量和溶出量并不是一成不变的，伴随着不同的配伍，都
有相应的药效组分与之相对应。

通过此次实验论证了药效组分理论，说明了药效组分理论与临床密切的结合性，充分体现了中药治疗疾病的本质，药效组分理论是中药研究的新思路、中药质量标准的新指标。

◆
参考文献[ 1 ] 崔向微，张贵君.组分中药与中药现代化[ J ] .时珍国医国药，
2009，20 ( 5 )：1290-1291.[ 2 ] 张贵君，杨晶凡.中药标准物质的科学内涵及其研究思路[ J ] . 现代药物与临床，2009，24 ( 2 )：71-72.[ 3 ] 《中华人民共和国药典》委员会.中华人民共和国药典（一部） [ S ] .北京：化学工业出版社，2005：233-234.[ 4 ] 王立群.中医临床常用药对手册[ M ] .北京：学苑出版社，
2001：5.
[ 5 ] 胥庆华.中药药对大全[ M ] .北京：中国中医药出版社，1996：
3.
[ 6 ] 周霈，黄亦琦.药对配伍对方剂复方研究的意义探讨[ J ] .现
代中医药，2013，33 ( 5 )：20.
DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2015.03.018。