手足口病检测与样本采集指南

★填写《手足口病病例标本送检登记表》
实验室诊断
• RT-PCR检测病毒核酸 • 检测项目： PE EV71 CA16
核酸检测基本操作程序
核酸提取---------去掉蛋白质、脂类和盐， 得到纯的核酸 核酸扩增---------使核酸的量达到可以检测 的水平 核酸检测---------根据核酸片段有无和大小 判断是否为目标DNA
HFMD病例检测与样本采集
xx市疾病预防控制中心
实验室诊断与样本采集
• 病毒分离/病毒核酸检测 –诊断肠道病毒感染的最主要手段。
– 柯萨奇B组病毒和埃可病毒可以很容易地在细胞培养上生长。适合的 标本有咽拭子、粪便标本，鼻拭子等，也可以从脑脊液中分离到病 毒。 – 一些柯萨奇A组病毒不容易通过细胞培养进行分离，可以通过乳鼠进 行分离，但是操作比较复杂，一般实验室不常规使用这种方法。分 子生物学的方法更适合这种病毒的诊断。
• 静脉采集2～3ml全血，置于真空无菌采
血管中，自凝后，分离血清，将血清置
于－20℃以下冰箱中冷冻保存
标本保存与运送
☆病原学检测样本： 12小时内检测：4℃储存 超过12小时检测：-20 ℃储存，-70 ℃长期储存 运送：带冰送检 ◇血清学检测样本： 血清、脑脊液：-20 ℃储存 运送：带冰送检
咽拭子标本的采集
• 采集病人发病3日内的咽拭子标本，用于病 原检测。
• 用专用采样棉签，适度用力拭抹咽后壁和 两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速 将棉签放入装有3～5ml保存液（维持液或 生理盐水，推荐使用维持液）的采样管中， 在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密 封，以防干燥
血清标本的采集
• 要求采集双相血 • 用于HFMD病例病原确定和病例诊断 • 采集急性期(发病0~3d)和恢复期(发病 14~30d)双份配对血清用于抗体检测。
• 血清学方法
– 自从细胞培养已经可以用做病毒分离后，血清学方法已经不经常使用了。 – 中和实验可以使用，但是非常繁琐，因此，一般也不做这方面的实验。
– 自身中和实验，鉴定所分离的病毒为引起HFMD的病原 – 恢复期中和抗体是急性期的4倍，或阴性变为阳性
HFMD病例实验室诊断标准
---手足口病预防控制指南（2008年版）
实验室诊断病例 临床诊断病例符合下列条件之一，即为实验室诊断病例 1．病毒分离：自咽拭子或咽喉洗液、粪便或肛拭子、脑脊液或疱疹
液、以及脑、肺、脾、淋巴结等组织标本中分离到肠道病毒。
2．血清学检验：病人血清中特异性IgM抗体阳性，或急性期与恢复 期血清IgG抗体有4倍以上的升高。
3．核酸检验：自病人血清、脑脊液、咽拭子或咽喉洗液、粪便或肛
肛拭子标本
• 把采集后的棉签放入装有3~5ml保存液 （PBS维持液）的采样管中，在靠近顶端 处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干 燥。 • 无PBS,可以使用流感的采样液。
疱疹液样本的采集
• 在HFMD的实验室诊断中，从疱疹液或脑脊液中 分离病毒具有很高的诊断价值。
• 可同时采集多个疱疹作为一份标本，用消毒针将 疱疹挑破用棉签蘸取疱疹液，迅速将棉签放入内 装有3~5ml保存液（维持液或生理盐水，推荐使 用维持液）的采样管中，在靠近顶端处折断棉签 杆，旋紧管盖并密封。
拭子、脑脊液或疱疹液以及脑、肺、脾、淋巴结等组织标本等标 本中检测到病原核酸
粪便标本的采集
• 最重要的样本---必采
• 最经济、Biblioteka Baidu人最容易接受、检测效率最高的样
本
• 采集病人发病7日内的粪便标本，用于病原检
测。粪便标本采集量5～8g/份(大拇指大小) ，
采集后立即放入无菌采便管（AFP病例采样管）