医学生化检测原理专题课件

校准报告CHO
校准报警
Std1,2双波长 检测吸光度差
Std1,2主波长 检测吸光度
校准结果
K= (CFAS -0)/ (5848-1973) x 10000=1120 K = (CN – Cb) ⁄ (AN – Ab)
SD Limit(标准差限制):常见校准校准失败 的原因
1. 校准的放置顺序可能有误（多个 校准品）
Utility > Application screen
SD Limit(标准差限制) :实测吸光度和理论计算吸光度的差异 Duplicate limit (重复性限制):重复性限制,相对范围%和绝对范围 Sensitivity limit(灵敏度限制) :空白浓度和 c.f.a.s之间的单位浓度吸光度变化差异 的最大值和最小值 S1 Absorbance Limit(空白限制) :试剂空白就是待测物浓度为0时的吸光度.
1个或多个反应试剂 通过最小二乘法计算反应曲线，得到待测物的量或活性
Rate A反应图：
检测方法 1点终点法 2点终点法
速率A法
2点速率法
检测物质 底物类 底物类
特定蛋白类 酶类 底物 底物
Examples
校准方法
TG, CHOL
2点线性校准
TP,ALB, Glu ，TB, DB, Ca ,Pho , UA,HDL ,LDL
为什么需要平行单色光？
在非单色光的条件下， 由于待测物质在各个波段下
吸光系数 K 的不同，造成相
关曲线也出现不同程度的偏 离。
实际上，理论上的单色 光是不存在的，我们所做的 只能是让入射光的光谱带宽 尽可能的小，要尽可能的靠 近单色光。
为什么仅适用一定范围内？
Lambert-Beer Law在有解 离、缔合、生成络合物或溶剂 化等会对比尔定律产生偏离。
HSCRP, HbA1c
2点线性校准 多点非线性校准
AST, ALT, GGT, LDH, CK
CREAHale Waihona Puke BaiduJaffe, UREA, Ammonia , TDM
UREA, ACP， Urinary/CSF protin
2点线性校准 2点线性校准 2点线性校准
光度分析校准及报警
Calibration quality criteria校准限制界面
2、一些常见的干扰因素如 轻度溶血，将可以由于在主波长 和副波长具有相同的吸光度而被 间接消除
3、双波长比色测定具有能 排除由微滴板本身、板孔内标本 的非特异吸收、刮痕、灰尘等对 特异显色测定吸光度的影响
在罗氏仪器上，待测物的12个波长的吸光度都被检测，选择设定中的2个波长 进行计算。
分光光度法的分析类型
解离是偏离朗伯-比尔定律 的主要化学因素，当溶液浓度 （大于0.01mmol/L）改变， 解离程度也会发生变化，吸光 度与浓度的比例关系便发生变 化，导致偏离朗伯-比尔定律。
前分光模式
3、单色平行光经过反应杯溶液
1、光源灯发出 全波段光线
2、单色器将全波段光线分 为某一波长的单色平行光
4、光电信号接收器检测光 线强度
2. 旧的或污染的试剂
一，终点法 1-Point End Assay 2-Point End Assay 二，速率法 2-Point Rate Assay Rate Assay
1Point End：仅检测反应终点的吸光度
2-point end assay :检测2个点的吸光度，一点反应启动前样品空 白的吸光度，另一点为反应启动后的吸光度。
2. 单个校准品自动稀释后校准 – 加 样精度问题
3. 比色杯或光源灯老化 4. 污染的或蒸发浓缩的校准品 5. 混匀机构问题
Duplicate limit :重复性限制
•检查同一个校准品的两次吸光度差异 Abs1 - Ab2 •校准的时候,每个校准品会重复做两次进 行计算
原因： 如果是新试剂，检查试剂复溶及混匀情况 检查样品针和试剂针. 样品或试剂上有气泡 光源灯或比色杯老化 混匀不佳
简而言之，光被一定浓度介质吸收的比例与入射光的强度无关；在光程上每等厚层介质吸收相同比例 值的光。
Lambert-Beer Law的适用范围：
• (1) 入射光为平行单色光且垂直照射. • (2) 吸光物质为均匀非散射体系. • (3) 吸光质点之间无相互作用. • (4) 辐射与物质之间的作用仅限于光吸收,无荧光和光化学现象发生. • (5) 待测物在一定溶度范围之内.
2-Point End Assay反应图：
2-Point Rate Assay：检测两个不同时间点之间的吸光度之
差，除以时间差得到的变化率
• 1个或多个反应试剂 • 检测2个点吸光度用于计算 • 通过 Abs/min来计算检测项目的量
2-point Rate assay反应图
Rate A：一定时间连续多次测定反应过程中某一反应产物或底物量随 时间变化的数据，间接计算检测项目的量的方法。
生化检测原理
不同浓度，颜色深浅不一。
所以： 待测物浓度可以由检测其颜色深浅得 到。
没有颜色？
间接： 通过生化反应生成有色物质，间接计算 得到浓度。
双缩脲反应
分光光度法的原理基础：Lambert-Beer Law
，I ——入射光及通过样品后的透射光强度； A——吸光度(absorbance) ； C——样品浓度； d——光程，即盛放溶液的液槽的透光厚度； k——光被吸收的比例系数； T——透射比，即透射光强度与入射光强度之比。
后分光模式
3、平行光经过反应杯溶液
1、光源灯发出 全波段光线
2、光线经凸透镜整理 成为不同波段平行光
4、衍射光栅将出射光线 分为不同波长的单色光
5、光电信号检测各种光线强度
双波长模式
在双波长模式下
A=A（主波长）-A（副波 长）
较单波长的优点：
1、电压不稳定等环境影响 下，由于主副波长都产生了相同 程度的影响而被消除
Sensitivity limit(灵敏度限制)
该数值标识出空白和 c.f.a.s之间的单位浓度吸光度变化差 异的最大值和最小值 . • 在终点法的生化项目校准中，最小吸光度变化是必须检测 的标准 • Sen:
Sensitivity limit(灵敏度限制):常见校准校准 失败的原因
1. 错误的校准品 – 蒸发浓缩或配制错误