益气温阳活血方对心肌梗死模型大鼠骨髓干细胞的动员作用和左室重构的影响

益气温阳活血方对心肌梗死模型大鼠骨髓干细胞的动员作用和左室重构的影响（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）

作者：杨庆有,陆曙,龚少愚,孙慧茹

【摘要】目的对比观察益气温阳活血方和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对心肌梗死模型大鼠骨髓干细胞的动员作用和左室重构的影响。方法结扎冠脉前降支造模,检测模型鼠造模当天、第5天和第10天外周循环血干细胞数,计算治疗第8周大鼠心脏重量指数、室壁变薄率和膨胀指数。结果中药组外周血干细胞数在造模5 d后显著升高(P0.001)；停药5 d后,仍高于西药组(P0.001)。中药组心脏重量指数下降(P0.001),室壁变薄率升高,膨胀指数显著下降(分别为P0.05,P0.001)。结论益气温阳活血方具有良好的动员骨髓干细胞作用,其动员作用较G-CSF持久；在防治心室重构方面有优于G-CSF 的趋势。

【关键词】心肌梗死；骨髓干细胞；左室重构；益气温阳活血方Abstract：Objective To contrast and observe the bone marrow stem mobilization induced by Yiqi Wenyang Huoxuefang and

G-CSF, and the influence to left ventricle reconstruction. Methods Model rat was made by ligate LAD, quantity of circulation stem cells (CSC) at the first, fifth and tenth day was detected. After be treated 8 weeks, the heart index, the expansion index and the thinning ratio were calculated. Results The quantity of CSC of Chinese herbs group increased at the fifth day (P0.001). After withdrawal medicine 5 days, it is higher than medicine group (P0.001). The heart index and the EI decreased remarkable (respectively P0.001 and P0.001), and TR elevated (P0.05). Conclusions Yiqi Wenyang Huoxuefang has a good mobilization effect on bone marrow stem cell, and is better than CSF. It has a better effect in inhibiting the left ventricle reconstruction of heart than CSF.

Key words：marrow stem cell；reconstruction of left ventricle；Yiqi Wenyang Huoxuefang

目前人们认识到：心肌细胞的丢失是心肌梗死后心衰发生的主要因素,心肌细胞数量的减少与病理性的心室重构导致心功能恶化是心衰发生发展的基本机制。如何促进梗死区内心肌细胞再生和减少梗死邻近细胞的凋亡、防止心室重构,成为防治心梗后心力衰竭发生及降低心梗后远期死亡率的关键。本实验对比观察了益气温阳活血方和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对骨髓干细胞的动员作用及其干预左室重构的作用。

1 实验材料

1.1 药物

基因重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)购于山东格兰百克制药有限公司。益气温阳活血方由人参10 g,黄芪15 g,制附子5 g,毛冬青30 g,益母草10 g组成,购自广州中医药大学第一附属医院。上述中药常规煎煮后离心,取上清液,水浴浓缩成1 mL(含原药材1 g),4 ℃保存备用。

1.2 仪器

L-200型电子分析天平(SHZMADZU Corporation KYO to JAPAN Altra),流式细胞仪(Beckman Counter.U.S.A),BI- 2000图像分析系统(成都泰盟科技有限公司),切片机(日本樱花株式会社),HH.W21.Cr42型恒温水浴箱(广东汕头医用设备厂),TDL-5A型飞鸽牌离心机(上海安亭科学仪器厂)等。

2 实验方法

2.1 动物分组和造模

纯种SPF级SD大鼠40只,4周龄,雌雄各半,体重(180±10)g,广州中医药大学实验动物中心提供。40只大鼠先随机分出10只作为正常空白组,余下30只参照文献[1]方法结扎冠脉前降支造模。造模后用卡西欧计算器给出的随机号随机分为3组：模型组、G-CSF 诱导组(西药组)、益气温阳活血方诱导组(中药组),每组10只。

2.2 治疗方法

造模当天开始治疗。正常空白组：正常喂养,不作治疗；模型组：皮下注射生理盐水0.2 mL,生理盐水5 mL灌胃；西药组：生理盐水5 mL灌胃,皮下注射rhG-CSF 10 μg/(kg·d)[约0.2 mL/(鼠·d)]；中药组：皮下注射生理盐水0.2 mL,中药煎剂5 mL灌胃。均为每日1次,连续5 d。

2.3 检测指标

2.3.1 骨髓干细胞动员的观察

造模后24 h、治疗第5天和第10天,眼眶取血,流式细胞仪检测血液中CD34＋细胞数量,按下式计算表达CD34＋的细胞数量[2]。骨髓干细胞数=(测得CD34＋数/测得微球数)×(微球总量/样本体积)。

2.3.2 左室重构的观察

治疗第8周,各组大鼠称重,麻醉后取出心脏,冰盐水冲洗后吸干水分,称取心脏重量,计算心脏重量指数。心脏指数=心脏重量(mg)/体重(g)。

剪除双侧心房及右心室,沿左心室长轴由心尖到心底部切成两半,以10%甲醛固定,乙醇脱水,石蜡包埋。每隔100 μm切取2 μm厚的全心脏长轴面切片1张,共切6片。冲洗后,HE染色,用BI-2000型图像分析系统进行图像分析,逐片测量下列参数：梗死区横断面积(IA)、梗死区室壁厚度(IT)、室间隔厚度(ST)、左室壁横断面积(LVA)、左室腔横断面积(LVCA)和左室腔周长。按下式计算膨胀指数