微生物实验三 细菌芽孢和鞭毛染色法
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实 验 三
细菌的芽孢染色及鞭毛染色
一、实验目的
学习并掌握芽孢染色法、鞭毛染色法。 学习并掌握芽孢染色法、鞭毛染色法。 初步了解芽孢杆菌、 初步了解芽孢杆菌、细菌鞭毛的形态特 征。 巩固无菌操作技术
二、基本wenku.baidu.com理
1. 芽孢染色法： 芽孢染色法： 芽孢是细菌的休眠体。细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、 芽孢是细菌的休眠体。细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽 孢在芽孢囊内的位置、 孢在芽孢囊内的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依 据之一。 据之一。 芽孢壁厚、透性低、不易着色， 芽孢壁厚、透性低、不易着色，用着色力强的染色剂孔雀绿或 石炭酸复红，在加热条件下染色， 石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进 入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色， 入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色 难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后， 难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初 染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色， 染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和 菌体更易于区分。 菌体更易于区分。 2. 鞭毛染色法： 鞭毛染色法： 鞭毛是细菌的运动“器官” 细菌是否具有鞭毛， 鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着 生的位置和数目是细菌的一项重要形态特征。 生的位置和数目是细菌的一项重要形态特征。细菌的鞭毛很纤 其直径通常为0.01~0.02µm，一般细菌的鞭毛均不能用光学 细，其直径通常为 ， 在染色前先用媒染剂处理， 显微镜直接观察到 。在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭 在染色前先用媒染剂处理 毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。 毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。
四、实验步骤 1、鞭毛染色 、 载玻片——一端加一滴水 一端加一滴水——挑菌 挑菌——在水滴中 载玻片 一端加一滴水 挑菌 在水滴中 轻沾几下——将玻片稍倾斜 将玻片稍倾斜——自然干燥 自然干燥 轻沾几下 将玻片稍倾斜 自然干燥——A 液覆盖（ 充分水洗 液覆盖 （ 5-10min） ——充分 水洗 ） 充分 水洗——B液冲去 液冲去 液覆盖——涂面出现明显褐色时——水 涂面出现明显褐色 残水 ，B液覆盖 液覆盖 涂面出现明显褐色时 水 自然干燥——镜检 洗——自然干燥 自然干燥 镜检 2、芽孢染色 、 涂片——干燥 干燥——固定 固定——染色 （ 孔雀绿 ， 加 染色（ 涂片 干燥 固定 染色 孔雀绿， 微冒蒸汽且不干 不干， 水洗（ 热，微冒蒸汽且不干 ，10min）——水洗（玻片 ） 水洗 冷却后） 复染（ 水洗— 冷却后）——复染（番红，5-8min）——水洗 复染 番红， ） 水洗 —干燥 干燥——镜检 干燥 镜检
细菌鞭毛显微镜照片
芽孢（简单）染色
芽孢（特殊）染色
五、实验结果
绘图（油镜下）：芽孢、鞭毛 ）：芽孢 绘图（油镜下）：芽孢、
六、思考题
1. 用简单染色法能否观察到细菌的芽孢？ 用简单染色法能否观察到细菌的芽孢？ 2. 鞭毛染色要注意那些环节？ 鞭毛染色要注意那些环节？
三、实验器材
枯草芽孢杆菌， 菌种 枯草芽孢杆菌，变形杆菌 染色剂 5％孔雀绿水溶液，0.5％番红水溶 ％孔雀绿水溶液， ％ 硝酸银鞭毛染色液（ 液 液，硝酸银鞭毛染色液（ A液，B液） 液 显微镜，酒精灯，双层瓶，载玻片， 其他 显微镜，酒精灯，双层瓶，载玻片， 木夹子，生理盐水， 木夹子，生理盐水，等。
细菌的芽孢染色及鞭毛染色
一、实验目的
学习并掌握芽孢染色法、鞭毛染色法。 学习并掌握芽孢染色法、鞭毛染色法。 初步了解芽孢杆菌、 初步了解芽孢杆菌、细菌鞭毛的形态特 征。 巩固无菌操作技术
二、基本wenku.baidu.com理
1. 芽孢染色法： 芽孢染色法： 芽孢是细菌的休眠体。细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、 芽孢是细菌的休眠体。细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽 孢在芽孢囊内的位置、 孢在芽孢囊内的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依 据之一。 据之一。 芽孢壁厚、透性低、不易着色， 芽孢壁厚、透性低、不易着色，用着色力强的染色剂孔雀绿或 石炭酸复红，在加热条件下染色， 石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进 入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色， 入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色 难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后， 难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初 染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色， 染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和 菌体更易于区分。 菌体更易于区分。 2. 鞭毛染色法： 鞭毛染色法： 鞭毛是细菌的运动“器官” 细菌是否具有鞭毛， 鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着 生的位置和数目是细菌的一项重要形态特征。 生的位置和数目是细菌的一项重要形态特征。细菌的鞭毛很纤 其直径通常为0.01~0.02µm，一般细菌的鞭毛均不能用光学 细，其直径通常为 ， 在染色前先用媒染剂处理， 显微镜直接观察到 。在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭 在染色前先用媒染剂处理 毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。 毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。
四、实验步骤 1、鞭毛染色 、 载玻片——一端加一滴水 一端加一滴水——挑菌 挑菌——在水滴中 载玻片 一端加一滴水 挑菌 在水滴中 轻沾几下——将玻片稍倾斜 将玻片稍倾斜——自然干燥 自然干燥 轻沾几下 将玻片稍倾斜 自然干燥——A 液覆盖（ 充分水洗 液覆盖 （ 5-10min） ——充分 水洗 ） 充分 水洗——B液冲去 液冲去 液覆盖——涂面出现明显褐色时——水 涂面出现明显褐色 残水 ，B液覆盖 液覆盖 涂面出现明显褐色时 水 自然干燥——镜检 洗——自然干燥 自然干燥 镜检 2、芽孢染色 、 涂片——干燥 干燥——固定 固定——染色 （ 孔雀绿 ， 加 染色（ 涂片 干燥 固定 染色 孔雀绿， 微冒蒸汽且不干 不干， 水洗（ 热，微冒蒸汽且不干 ，10min）——水洗（玻片 ） 水洗 冷却后） 复染（ 水洗— 冷却后）——复染（番红，5-8min）——水洗 复染 番红， ） 水洗 —干燥 干燥——镜检 干燥 镜检
细菌鞭毛显微镜照片
芽孢（简单）染色
芽孢（特殊）染色
五、实验结果
绘图（油镜下）：芽孢、鞭毛 ）：芽孢 绘图（油镜下）：芽孢、
六、思考题
1. 用简单染色法能否观察到细菌的芽孢？ 用简单染色法能否观察到细菌的芽孢？ 2. 鞭毛染色要注意那些环节？ 鞭毛染色要注意那些环节？
三、实验器材
枯草芽孢杆菌， 菌种 枯草芽孢杆菌，变形杆菌 染色剂 5％孔雀绿水溶液，0.5％番红水溶 ％孔雀绿水溶液， ％ 硝酸银鞭毛染色液（ 液 液，硝酸银鞭毛染色液（ A液，B液） 液 显微镜，酒精灯，双层瓶，载玻片， 其他 显微镜，酒精灯，双层瓶，载玻片， 木夹子，生理盐水， 木夹子，生理盐水，等。