核酸实验室管理的经验和体会(甘肃)

一区消毒方案 实验结束后，使用喷有75%酒精无纺布擦拭实验桌面，每天使用清水拖地 ，每二天使用500mg/L有效氯拖地，紫外灯杀菌1小时； 二区消毒方案 实验结束后，使用喷有75%酒精无纺布擦拭STAR仪器台面，及TIP头金属挡 板，使用75%酒精喷洒实验台面，喷洒标本载架；及75%喷洒生物安全柜 ，然后使用无纺布擦拭生物安全柜；每天使用500mg/L有效氯拖地，拖地 结束后，使用紫外消毒车紫外消毒1小时； 三区消毒方案 使用喷洒有75%酒精的无纺布擦拭实验台面，然后使用清水拖地，每二天 使用500mg/L有效氯拖地，每一周使用紫外消毒车消毒一次。
位置
数量
二区
三区
STAR1 STAR2
ABI仪 器
仪器内部载架放置区域 仪器内部载架放置区域
仪器旁边，各摆1支
6支 3支
共 3支
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2.过夜后，早上取双蒸水，约30-50ul，在 1.7ml离心管内反复吹吸多次后，取15ul进入扩增 板，作为模板，另加入15ul反应液。每个离心管配制3个复孔。 3.扩增板制备完毕后，放入扩增仪进行检测，最好做三项。 结果：连续检测七天，第四天已经全部为阴性，第八天转为正常试验。
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日常管理的体会
产物分析区 扩增区 标本制备区 试剂准备区
空气流向 空气流向
空气流向
空气流向
缓冲间
缓冲间
缓冲间
专用走廊
工作流向
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日常管理的体会

检测流程管理
1.分离胶EDTA 2K抗凝管。采集后的充分混匀，一般颠倒５--10 次以上。（或按照采血管技术要求进行）， 样品离心：应采用大容量低温离心机，离心要充分，离心条件最 好2000g、20分钟。 2.检测时间：采血后第二天，采集后48小时内完成混检，拆分72 小时内完成。

核酸扩增模块：每周使用无纺布蘸清水润湿后
擦拭仪器表面。
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实验室仪器的消毒

生物安全柜使用完后，用无纺布蘸 75% 乙醇擦 拭安全柜台面及开盖机。2 区实验结束后，打 开生物安全柜内紫外灯消毒30分钟。

移液器：使用完后用无纺布蘸 75% 乙醇擦拭。
实验结束后，紫外灯消毒60分钟。
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实验室台面的消毒
核酸实验室 管理经验和体会
甘肃省血液中心检验科
1
内

容
甘肃省血液中心检验科核酸实验室基本情况 核酸实验室验收 日常管理的体会
2
甘肃省血液中心检验科 核酸实验室基本情况

科华核酸检测系统 试剂

乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒核酸检测 试剂盒（PCR-荧光法）

设施和设备 一个实验室 四个分区 两套样本汇集提取（ HAMILTON STAR系列—磁分离模块: 样

每天工作结束后，台面用含有效氯 0.5%含氯消毒液擦拭 1次、15分钟后用清水再擦拭1次。

1区配制反应液的台面和2区的试剂准备区及样本准备区
用紫外灯照射60分钟。

台面有明显污染或血液溅漏时，应用含有效氯 0.5%含氯 消毒液喷洒于污染表面，并用无纺布蘸消毒液后覆盖污 染表面，保持15分钟以上，再用清水擦拭干净。
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传递窗的消毒

实验结束后，传递窗内用无纺布蘸75% 乙醇擦拭。
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擦拭完后，紫外灯消毒30分钟。
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废液的消毒

实验过程中产生的废液用含有效氯 0.5% 含氯消毒液进行消毒。

24h后方可倒入下水管道。
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空气消毒

实验室台面、仪器、地面清洁消毒之后， 75%乙醇喷雾实验室内空气。

每天试验全部结束后，打开实验区及缓冲区

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核酸实验室被污染的后果

出现大量的假阳性结果。 污染物短时间内不能消除。 实验被迫暂停。 备用实验室。
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案例：检测HBV“灰区”样本120份，（S/CO
性对照结果阳性。
0.5-1之间），汇集检测结果全部阳性，阴

1.清洁实验室完毕后，用1.7ml离心管（用于配制反应液的管子）分别放置于以下位置：
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核酸实验室的防污染措施



规范化的设置和管理
实验室的区域划分
设置阴性质控
严格的消毒措施
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防污染的消毒措施





实验室仪器的消毒 实验室台面的消毒 实验室地面的消毒 传递窗的消毒 废液的消毒 空气消毒 实验室通风 勤换手套
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实验室仪器的消毒

样本处理模块:每天实验结束后用无纺布蘸75% 乙醇清洁工作台面，擦拭Core-Tip金属挡板， 酒精喷雾清洁样本载架。每周用75%乙醇清洁 试剂载架，枪头载架。
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核酸实验室验收


验收依据: 卫办医政发〔2010〕194号《医疗 机构临床基因扩增管理办法》、《医疗机构 临床基因扩增检验工作导则》、《临床基因 扩增检验实验室技术验收表》 验收机构：甘肃省临床检验中心 验收方式：现场验收和盲样检测
6
核酸实验室验收

血站基因扩增检验实验室技术验收表 1.实验室设置和设备 2.设施和环境 3.人员 4.设备管理和质控物 5.检测方法 6.标本管理 7.记录 8.报告 9.质量控制 10.抱怨
本汇集、核酸提取）
三台ABI 7500荧光PCR仪: 扩增检测
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甘肃省血液中心检验科 核酸实验室基本情况



汇集检测不超过48小时，拆分不超过72小时 检测策略：两遍酶免+一遍核酸 规划设置为集中化核酸检测实验室（200公里以 内4家中心血站）
4
基本情况

2012年下半年开始核酸检测 2013年7月通过甘肃省临检中心核酸实验室技 术验收
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日常管理的体会

人员培训 设施设备维护 检测流程管理 安全卫生管理
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日常管理的体会

人员培训 1.轮岗培训 2.相对固定 3.科室定期培训 4.严格执行SOP
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日常管理的体会

设施设备维护
1. 实验室1、2、3三个区域内压力梯度应保持在5-10Kpa，依次 按照1区>2区>3区递减。各区缓冲间压力恒定，与外走廊保持 10-15Kpa正压力差。 2. 各区温度：20-26℃ 二区湿度：>40% 3.二区生物安全柜，开盖机，用于真空采血管的去帽。 （无尘无纺布） 4.二区、三区应配备ＵＰＳ电源。 5.各区间的传递窗？
的紫外灯消毒60分钟。
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空气消毒

消毒时实验台面必须整洁，不得有纸张等其 他覆盖物，以免影响消毒效果。

灯管表面应经常(一般2周左右1次)用酒精棉
球轻轻擦拭，除去上面灰尘与油垢，以减少 对紫外线穿透的影响。
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避免消毒“过度”

探讨： 1.设备发生故障频率增加？
2.假阴性率升高？
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实验室消毒方案
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实验室地面的消毒

每天工作结束后，地面应用含有效氯0.5%含氯消毒液 拖擦1次、15分钟后用清水再拖擦1次。

地面有明显污染或血液溅漏时，应用含有效氯0.5% 含 氯消毒液喷洒于污染表面，并用无纺布蘸消毒液后覆 盖污染表面，保持15分钟以上，再用清水拖擦。

拖把等清洁工具各区专用，不得混用，用后洗净晾干
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实验室通风

紫外灯消毒结束后，通风1小时。


每天试验开始前，打开送排风系统通风。
试验过程中，通过送排风系统维持三个区 域的压力差，防止扩增产物逆流。 ------很重要
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谢 谢 ！
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日常管理的体会

安全卫生管理 核酸实验室防污染的目的 核酸实验室的污染物 核酸实验室被污染的后果 核酸实验室的防污染措施
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核酸实验室防污染的目的

预防和控制核酸残余污染及病源微生 物的传播，确保实验室生物安全与周 围环境安全。
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核酸实验室的污染物
扩增产物（阳性核酸片段） 天然基因组DNA 试剂污染 标本间的交叉污染（气溶胶）