血浆真菌葡聚糖检测标准操作规程

血浆真菌葡聚糖检测标准操作规程
1. 目的
规范使用真菌葡聚糖检测试剂盒（动态浊度法）进行真菌（1,3）-β-D-葡聚糖检测的检验操作程序，保证实验结果的准确性。

2. 适用范围
用于人体血浆真菌（1,3）-β-D-葡聚糖定量检测。

3. 责任者
经培训合格的微生物实验室检验人员。

4. 适用仪器
鲎试验微生物检测仪ELx808IU（全自动酶标仪ELx808）或同等光学检测仪器。

5. 样本要求
5.1 标本采集
用除葡聚糖肝素钠抗凝真空采血管采集静脉血2ml以上，进行3000rpm离心60s，分离得到富含血小板的血浆样本。

5.2 标本保存和运送
样本可立即用于检测。

若不能及时检测，应将血浆转移至无热原试管内，保存于2-8℃待测，保存期为一周；也可保存于-20℃待测，保存期为1个月。

样本应避免反复冻融。

6. 检验方法
6.1 仪器设定
6.1.1 预热仪器，设置温育温度为37ºC。

6.1.2 设定检测仪器的读板波长为630nm（或厂家提供的其他适用波长），读板时间为120分钟，每1分钟读板一次。

6.2 取0.1ml血浆样本，加入到0.9ml样本处理液中，混匀后70℃保温10分钟，取出后立即放入冰水中冰浴3分钟。

6.3 取处理后的血浆样本混合液0.2 ml加入鲎试剂中，轻轻振摇溶解鲎试剂后移取0.1ml 至反应容器中，放置于检测仪器中检测，反应结束后软件将自动计算出样本真菌（1,3）-β-D-葡聚糖含量。

7. 参考值
正常人体血浆中真菌（1,3）-β-D-葡聚糖含量＜10pg/ml。

8. 检验结果解释
8.1 样本（1,3）-β-D-葡聚糖含量≥10pg/ml时，表明该样本有（1,3）-β-D-葡聚糖存在，但并不表示该样本一定存在真菌活菌。

8.2 样本（1,3）-β-D-葡聚糖含量＜10pg/ml时，表示该样本（1,3）-β-D-葡聚糖低于参考值。

9. 检验方法的局限性
9.1 本试剂盒只能检测真菌（1,3）-β-D-葡聚糖含量，不能区分真菌种属。

9.2 本试剂盒不能检测出不产生或产生很少（1,3）-β-D-葡聚糖的隐球菌及接合菌。

9.3 本试剂盒不适用于脂浊及溶血类异常样本的（1,3）-β-D-葡聚糖检测。

10. 产品性能指标
10.1 灵敏度：最小检出值5pg/ml。

10.2 标准曲线范围：10～1000pg/ml。

10.3 回收率：75%～150%。

10.5 批内精密度：CV≤20%。

10.6批间精密度：CV≤25%。

11. 注意事项
11.1 试剂盒为体外诊断试剂，禁止使用于人体。

11.2 禁止在有效期外使用。

11.3 试剂盒在使用前应做仔细检查，出现损坏禁止使用，以免影响测定结果。

11.4 实验操作中应避免微生物污染，接触试剂及样本的所有器皿耗材必须是除热原除葡聚糖的(我公司提供除热原除葡聚糖耗材)。

11.5 某些纤维素透析膜用于血液透析病人时可能会测出高水平的（1,3）-β-D-葡聚糖。

用三乙酸纤维素透析膜和聚甲基丙烯酸甲酯(有机玻璃)膜的血液透析病人不会影响实验结果。

11.6 某些手术纱布和绷带会释放高水平的（1,3）-β-D-葡聚糖，因此手术后的病人有可能在短时间内葡聚糖检测会出现假阳性。

11.7 病人取样测试的频率取决于真菌感染的危险性的高低。

处于高危险的病人每周应至少取样2-3次。