分子生物学资料：分生 十一章之后

第十二章感染性疾病的分子生物学

论述题：试述细菌产生耐药的分子生物学机制。

病原菌针对抗菌素发生遗传进化改变，产生耐药。具体机制包括

(1)钝化酶或灭活酶的产生细菌产生破坏抗生素或使之失去抗菌作用的酶，使药物在作用于菌体前即被破坏或失效。

(2)改变细胞壁通透性细菌外膜上存在着多种微孔蛋白，细菌发生突变失去某种特异微孔蛋白后即可导致细菌耐药性。例如绿脓杆菌对耐药机制之一是药物不易通过其外膜蛋白。

(3)改变药物的作用靶位 a、降低抗生素与靶分子的亲和力，如细菌可改变二氢叶酸合成酶，降低该酶与磺胺药的亲和力引起耐药。b、改变靶位的生理活性导致耐药，例如某些链球菌和某些革兰氏阴性菌可以使其粘肽成分对于保持细菌形态和活力变得无关重要，从而对青霉素类耐药。c、复制靶位从而耐药，如某些肺炎链球菌能改变其PBP的结构或产生一种新的PBP．后者与β-内酰胺类抗生素的亲和力减低因而导致耐药性。

(4)主动外排机制大肠杆菌依靠AcroAB-TolC系统，使抗生素主动转运到细菌外。如AcroAB-TolC系统参与了铜绿假单胞菌对内酰胺类抗菌素的耐药。

第十三章炎症的分子机制

简答题：TLRs介导的信号转导基本过程见书P171（抄书上的）

（1）配体与位于细胞膜或位于细胞内的TLRs结合，使受体活化；

（2）活化的TLRs募集胞浆中含有TIR结构域的接头分子，使接头分子活化；

（3）通过上述接头分子进一步募集和活化下游信号转导分子，经过多个步骤最后激活转录因子，从而调节相关基因表达

（4）第十五章内分泌及代谢疾病的分子机制

发育同源选择因子：是指含有发育同源结构域的蛋白分子，是一个十分保守的基因家族。这些基因及受体激活的靶基因的时空有序表达决定了组织、肢体、器官等的发育顺序。

简答题：简述肽类激素合成与分泌的分子调控特点。

（1）氨基末端均有信号肽结构。

（2）需经过多层次翻译后修饰。

（3）需要细胞内精确的定位和分泌过程。

（4）需要激素分泌与合成调节的协调。

第十七章应激反应的分子机制

简答题：简述细胞应激反应的基本过程

(1)细胞感受应激原信号；

(2)启动细胞内应激反应相关信号转导通路；

(3)改变细胞内各种效应蛋白的活性，尤其是一些转录因子的活性；

(4)活化的转录因子促进应激反应相关基因的快速表达，合成多种应激蛋白；

(5)应激相关的蛋白分子保护细胞免受损伤或修复已有的损伤，细胞继续生存；若无法修复应激损伤，则诱导细胞的凋亡。

论述题：DNA损伤后，细胞是如何应对的？

(1)DNA损伤信号的感应和信号转导途径的起始属于PI-3K超家族成员的ATM、ATR和DNA活化的蛋白激酶（DNA-PK）可能作为DNA损伤的感应分子。ATM和ATR都能被应激原引起的DNA损伤所激活，ATM主要对放射线引起的双链损伤起到感应作用，而ATR还能被紫外线或停滞的DNA复制叉所激活。DNA-PK象ATM和ART分子一样，可以感受到DNA的损伤并被激活。活化的DNA-PK再磷酸化下游的蛋白（如p53和MDM 2等）。

(2)DNA损伤信号在细胞内的传递过程激活的信号通过多条信号转导通路向下游传递，这些信号最终被细胞周期调控系统、DNA修复系统和细胞凋亡调节因子所接收。在DNA损伤的过程中，p53信号通路和MAPK信号通路均具有重要的调控作用。DNA损伤信号可以激活MAPK家族成员ERK、SAPK/JNK和P38，继而活化转录因子NF-κB、AP-1、ATM-2和C-Myc等。JNK亦可以催化p53蛋白的磷酸化，将p53信号通路和MAPK通路联系起来。

(3)DNA损伤后细胞的命运 DNA损伤后经过细胞内一系列的应激过程，最终会有三种结果

1)DNA的损伤不严重，细胞调动所有的损伤修复机制最终修复了被破坏的DNA，细胞解除周期的阻滞，继续进行正常的生长、分化、发育和凋亡；

2)DNA的损伤不严重，虽不能够将损伤的DNA完全修复，但可以部分修复。修复后的细胞仍然可以进行复制，但有形成肿瘤倾向；

3)DNA的损伤过于严重，细胞无法修复损伤的DNA分子，启动细胞的凋亡机制，使无法修复的细胞发生凋亡。

第十九章基因操作

简答题：基因克隆的基本过程是什么？

基因克隆的基本过程包括

(1) 获得目的基因。

(2) 限制性内切酶消化载体。

(3) 连接目的基因和载体。

(4) 重组DNA导入宿主细胞。

(5) 筛选并扩增获得重组克隆。

第二十一章基因诊断

简答题：请简述基因诊断的基本流程。

(1)样品的核酸抽提。 (2)目的序列的扩增。(3)核酸分子杂交。(4)信号检测。

第二十二章基因工程药物与疫苗

基因工程药物/疫苗：是指通过基因工程方式制备得到的具有疾病治疗或预防价值的重组蛋白质/多肽，DNA或RNA 简答题：基因工程中宿主细胞应满足哪些条件？

(1)遗传背景清楚，便于进行DNA重组操作。 (2)代谢途径及其调控机制清楚，容易进行代谢调控。

(3)容易获得较高密度的细胞培养。 (4)能利用廉价而容易获得的原料。

(5)产热少、耗氧低，发酵温度适当。(6)产量和得率高，产物容易提取纯化。

第二十三章基因治疗

全世界第一例基因治疗成功的疾病是重症联合免疫缺陷症

基因置换：指用正常的基因原位置换病变细胞内的致病基因，使细胞内的DNA完全恢复正常状态。

基因增补：即基因替代将正常基因转移到患者的宿主细胞，并不去除致病基因，正常基因异位替代致病基因在体内表达出功能正常的蛋白质。