不同产地丹参药材中丹参酮_A和丹酚酸B含量比较_陈彻

［ 1］ 王维婷， 单成钢， 倪大鹏， 等． 丹参有效成分代谢生理生化及分子 J］． 中药材， 2009 ， 32 （ 9 ） ： 1472 － 1476． 生物学研究进展［ ．中 ［ 2］ 徐丽君， 黄光英． 丹参的化学成分及其药理作用研究概述［J］ 2009 ， 23 （ 1 ） ： 45 － 48． 西医结合研究， ［ 3］ 杨征， ． 中国 邱敏． 丹参酮ⅡA 的心血管作用及机制研究进展［J］ 2011 ， 19 （ 4 ） ： 372 － 374． 动脉硬化杂志， ［ 4］ 李玉萍， 顾兵， 刘建涛， 等． 丹参酮 IIA 的研究进展［J］． 时珍国医 2010 ， 21 （ 7 ） ： 1770 － 1772． 国药， ［ 5］ 金娟， 刘莉， 杜丽娟． 丹参酮ⅡA 对不稳定型心绞痛患者血浆内皮 J］ ． 中医药信息， 2012 ， 29 （ 6 ） ： 62 － 63． 素及一氧化氮水平的影响［ ［ 6］ 于 金玲． 丹酚酸 B 药理作用研究进展［J］ ． 天津药学， 2012 ， 24 （ 3 ） ： 64 － 68． ［ 7］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典（ 一部） ［S］ ． 北京： 化学工 2005 ： 518 － 519． 业出版社，
量， 加热回流 1 h ， 放冷， 补足减失的 75% 甲醇， 摇匀， 0． 45 μm 微孔滤膜过滤， 取续滤液， 作为供试品溶液。 2． 2． 4 标准曲线的绘制 2、 4、 8、 分别精密吸取贮备液 （ 0． 138mg / mL） 各 1 、 10mL 置于 10mL 容量瓶中， 用 75% 色谱甲醇定容。 分 别吸取以上梯度对照液进样。 以含量为横坐标， 峰面 积为纵坐标， 绘制标准曲线， 进行线性回归， 得回归方 程： Y = 875 672X － 815 274 （ Ｒ = 0． 9 995 ） 。 2． 3 精密度试验 分别吸取同一浓度丹参酮 Ⅱ A （ 0． 054mg / mL ） 和 丹酚酸 B 对照品溶液 （ 0． 138mg / mL ） 连续进样 6 次， 每次进样量为 10 μL， 记录峰面积积分值。 结果， 丹参 酮ⅡA 与丹酚酸 B 的 ＲSD 分别为 0． 93% 和 1． 11% （ n = 6） ， 表明仪器精密度良好。 2． 4 重复性试验
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参考文献：
丹酚酸 B 的含量测定结果（ n = 3 ）
图2
丹酚酸 B 高效液相色谱图
5 6 7 8 9 10
2． 2． 2
对照品溶液的制备 精密称取丹酚酸 B 对照品 6． 9mg 置于 50mL 容量
瓶中， 用 75% 色谱甲醇溶解定容， 作为丹酚酸 B 贮备 液（ 0． 138mg / mL） 。 2． 2． 3 供试品溶液的制备 称取粉末（ 过 40 目筛 ） 约 0． 6 g， 精密称定， 置具 塞锥形瓶中，精密加入 75% 甲醇 50mL， 震摇， 称定重
Comparison of the Contents of TanshinoneⅡA and Salvianolic Acid B in Salviae Miltiorrhizae from Different Producing Areas
CHEN Che ，WANG Yong ，WANG Jing ，LI Hai － long，YANG Ya － li，WANG Fang ， CHU Hui － yuan （ Gansu College of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730000 ， China） Abstract： Objective ： To determine and compare the contents of tanshinone ⅡA and salvianolic acid B in salviae miltiorrhizae from different producing areas． Methods： HPLC was employed to determine the contents of tanshinone Ⅱ A and salvianolic acid B． Synchropak PＲ100 － 5 column was adopted in this process． The detective wavelength was set at 270 nm and 286nm，respectively． Ｒesults： Both of tanshinone ⅡA and salvianolic acid B levels of salviae miltiorrhizae from Sichuan Zhongjiang were higher． However ，the tanshinone ⅡA level of salviae miltiorrhizae from Shanxi Ｒuicheng was the lowest，but salvianolic acid B level was the highest． Conclusion ： The contents of tanshinone ⅡA and salvianolic acid B in salviae miltiorrhizae could be related to different producing areas． The results can be used as a reference for purchasing and using salviae miltiorrhizae in clinic． Key words： Salviae miltiorrhizae； TanshinoneⅡA； Salvianolic acid B ； HPLC ； Producing area 檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼
2． 1． 3
2010］ 基金项目： 甘肃省财政厅基本科研业务费专用资金资助（ 甘财政［
供试品溶液的制备 称取粉末（ 过 40 目筛） 约 0． 6g， 精密称定， 置具塞 ， 50mL ， ， 锥形瓶中 精密加入甲醇 震摇 称定重量， 加热
0． 45 μm 微孔滤 回流 1h， 放冷， 补足减失的甲醇， 摇匀， 膜过滤， 取续滤液， 作为供试品溶液。
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丹参为唇形科植物丹参 Salviae miltiorrhizae Bge 的干燥根及根茎。是我国传统常用中药材， 有近 2000 年的应用历史。丹参饮片不仅可在临床上直接应用， 也是 治 疗 心 脑 血 管 疾 病 最 常 用 的 中 成 药 制 剂 之 ［1 － 2 ］ 。由于其较高的经济价值， 一 全国很多地区都进 行了大规模的栽培。 然而， 不同的土壤条件及气候环 境使不同产地的丹参质量相差较大， 直接影响着成品 质量。 丹参酮 Ⅱ A 和丹酚酸 B 作为丹参的重要活性成 ［3 － 6 ］ ， 分， 具有广泛的药理作用 其含量的高低已是评价 优质丹参的关键标准之一。 目前丹参栽培产地以河 北、 河南、 四川、 陕西、 山西、 甘肃和安徽等省基地规模 较大， 因此本实验拟通过对不同产地丹参药材中丹参 A 酮Ⅱ 和丹酚酸 B 含量比较， 为丹参药材的优选及临 床用药提供一定的参考依据。 1 仪器与试药 1． 1 仪器 法国 Gilson 液相色谱仪，306 泵，MD － 119 紫外 715 软 件 数 据 处 理 系 统， Synchropak 可见 检 测 器， PＲ100 － 5 （ 150mm × 4． 6mmID， 5 μm ） 色谱柱， ODS 预 柱（ Alltech） 。 1． 2 材料和试药 对照品丹参酮 Ⅱ A、 丹酚酸 B 购于中国药品生物
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
标准曲线的绘制 1、 2、 分别精密吸取贮备液 （ 0． 054mg / mL） 各 0． 5 、 4、 8、 10mL 置于 10mL 棕色容量瓶中， 用色谱甲醇 定 容。分别吸取以上梯度对照液进样。 以含量为横坐 标， 峰面积为纵坐标， 绘制标准曲线， 进行线性回归， 得 回归方程： Y = 32 361X － 34 286 （ Ｒ = 0． 999 3 ） 。 2． 2 丹酚酸 B 检测方法 2． 2． 1 色谱条件流动相 甲醇： 乙腈： 0． 0167% 甲酸水溶液 （ 30 ： 9 ： 61 ） ； 检 测波长： 286nm； 流速： 1． 0mL / min； 柱温： 25℃ 。 理论塔 板数： 4 000 。色谱见图 2 。 2． 1． 4 取丹参粉末适量， 分别依 2． 1． 3 和 2． 2． 3 项下方 法平行制备 6 份样品， 按上述色谱条件， 依次进样， 记 录含量。结果， 丹参酮ⅡA 和丹酚酸 B 的 ＲSD 分别为 1． 08% 和 1． 81% 。表明， 本方法重复性良好。 2． 5 回收率试验 取已知丹参酮 Ⅱ A 和丹酚酸 B 含量的丹参各 6 份， 加适量对照品溶液， 分别依 2． 1． 3 和 2． 2． 3 项下方 测定含量， 计算回收率。 结果， 丹 法制备供试品溶液， A 98． 16% ， ＲSD 0． 96% 。 参酮Ⅱ 回收率为 为 丹酚酸 B 回收率为 100． 16% ， ＲSD 为 1． 32% 。 表明本方法回 收率良好。 2． 6 样品含量测定 取不同产地的丹参适量， 分别按 2． 1． 3 和 2． 2． 3 ， 项下方 法 制 备 供 试 品 溶 液 计 算 样 品 含 量， 结果见 表 1。
表1
编号 1 2 3 4 产地 河南卢氏（ 野生） 河南卢氏（ 栽培） 山西芮城（ 野生） 山西芮城（ 栽培） 甘肃陇西（ 野生） 甘肃陇西（ 栽培） 四川中江（ 栽培） 陕西商周（ 栽培） 安徽毫州（ 栽培） 河北承德（ 栽培）
不同产地丹参中丹参酮 ⅡA 和
丹参酮ⅡA（ % ） 0． 46 0． 15 0． 32 0． 13 0． 59 0． 21 0． 35 0． 22 0． 17 0． 15 丹酚酸 B（ % ） 7． 66 4． 75 5． 77 7． 67 6． 11 6． 41 6． 08 4． 26 5． 24 5． 01
讨论 实验中发现以药典流动 相 比 例 测 定 丹 参 酮 Ⅱ A 时， 所 测 成 分 出 峰 太 晚 （ 30min ） 故 加 大 流 速 （ 1 → 1. 2mL / min） 测定， 效 果 良 好。 以 药 典 流 动 相 比 例 甲 醇： 乙腈： 甲酸： 水（ 30 ： 10 ： 1 ： 59 ） 测定丹酚酸 B 时所测 成分前有一干扰峰且未达到基线分离， 加大水相比例 至 62 时两峰基线分离， 但所测成分出峰太迟且峰面积 显著减小， 进而在此基础减小水相比例至 61 测定， 效 果良好。 就测定结果来看， 不同地区丹参药材的丹参酮 Ⅱ A 和丹酚酸 B 含量差别较大，野生品的含量普遍高于 栽培品。河南卢氏、 山西芮城及河北承德栽培品丹参 酮ⅡA 含量较低， 四川中江栽培品丹参酮 Ⅱ A 含量最 高。然而， 山西芮城栽培品丹参酮ⅡA 含量尽管最低， 但丹酚酸 B 含量却最高。 丹参酮 Ⅱ A 和丹酚酸 B 含 量均较高的是四川中江栽培品。这些结果可为丹参药 材的优选及临床用药提供相应的参考依据 。 3
不同产地丹参药材中丹参酮 Ⅱ A 和丹酚酸 B 含量比较
王勇， 王晶， 李海龙， 杨雅丽， 王芳， 楚惠媛 陈彻，
（ 甘肃中医学院， 甘肃 兰州 730000 ） 摘 要： 目的: 测定和比较不同大规模栽培产地丹参 药 材 中 丹 参 酮 Ⅱ A 和 丹 酚 酸 B 含量。 方 法: 采用 高 效液相色谱法， 选用 Synchropak PＲ100 － 5 色谱柱， 检测波长分别为 270nm 和 286nm。 结 果: 丹 参 酮 Ⅱ A 和丹酚酸 B 含量均较高的是四川中江栽培品。山西芮城栽培 品 丹 参 酮 Ⅱ A 含量 尽管 最低， 但丹酚酸 B 含量却最高。结论: 丹参中丹参酮ⅡA 和丹酚酸 B 的 含量 与 产 地 关 系 较 大，此 研究结 果 可 作为 丹 参 药 材采购及临床选用的参考依据。 关键词： 丹参; 丹参酮ⅡA; 丹酚酸 B ; 高效液相色谱法; 产地 中图分类号： Ｒ284． 1 文献标识码： A 文章编号： 1002 － 2392 （ 2014 ） 01 － 0032 － 03 制品检定所。乙腈与甲醇均为色谱纯， 实验用水为自 制高纯水， 其他试剂均为分析纯。 不同产地丹参药材 采自河北、 河南、 四川、 陕西、 山西、 甘肃和安徽等省， 经 鉴定均为丹参 Salvia miltiorrhiza Bge． 的根及根茎。 2 方法与结果 2． 1 丹参酮ⅡA 检测方法 2． 1． 1 色谱条件流动相［7］ 甲醇 ∶ 水 （ 75 ∶ 25 ） ； 检 测 波 长： 270nm； 流 速： 1. 2mL / min； 柱温： 30℃ 。理论塔板数： 12 000 。色谱见 图 1。
收稿日期： 2013 － 09 － 20 176 号） 作者简介： 陈彻（ 1972 － ） ， 副教授， 主要从事生化过程研究。 男， 博士， E － mail： chen72123@ 163． com 修回日期： 2013 － 10 － 27
图1
丹参酮ⅡA 高效液相色谱图
2． 1． 2
对照品溶液的制备 精密称取丹参酮Ⅱ A 对照品 2． 7mg 置于 50mL 棕 色容量瓶中， 用色谱甲醇溶解定容， 作为丹参酮 Ⅱ A 贮 备液（ 0． 054mg / mL） 。