病理解剖技术

3. 胸腹腔检查
1〕切口
2〕腹腔检查
3〕胸腔检查
腹腔有渗出液
心包积液（血液〕
气管周围血液
液体称量
4. 内脏器官的取出及检查 一般有两种方法：
1〕各脏器分别取出法
是病理解剖最常用的方法
2〕多脏器联合取出法
此法比较简单，可保持各器官的完整性。
心脏
表面充血
绒毛心
双肺和支气管
肝脏
表面有结节
1〕试剂配制： （1〕重铬酸钾液。重铬酸钾2.5g，醋酸5ml，蒸馏水95ml； （2〕苯胺蓝橘黄G液。苯胺蓝0.5g，橘黄2g，磷钨酸1g， 蒸馏水100ml；
（3〕酸性复红液。酸性复红0.5g，蒸馏水100ml。
2〕染色步骤：
（1〕重铬酸钾液10分钟； （2〕流水洗2分钟，蒸馏水洗2次；
（3〕酸性复红液2分钟，蒸馏水稍洗；
乳腺癌
乳腺癌
乳腺癌
子宫颈癌
子宫颈癌
子宫颈癌
子宫颈癌，切面
3.大体标本的固定
1〕固定的目的： 将受检组织尽快地侵入固定液内，使组织和细 胞的固有成分迅速凝固，防治自溶和腐败，使其保 持与生活状态有相似的结构，以利于切片和观察。 2〕固定液的选择： A.甲醛（Fomaldehyde〕，又称福尔马林，其浓度在 4％，它是一种还原剂，极易挥发，散发出强烈的刺 激性气体，使人流鼻涕、流眼泪，呼吸道有异物感。 B.95％酒精（乙醇〕，除具有固定组织的作用外，尚 有脱水作用。
病理解剖学技术
（The technique of Pathology〕
哈尔滨医科大学病理教研室
金晓明
序：
病理学的理论和技术被视为一辆车的两个车轮， 缺一不可，互为依存，互相促进，两者的结合决 定病理学的发展。
病理学的技术主要体现在几个结合上
1.传统病理学技术与现代生物新技术相结合 2.宏观、脏器、组织、细胞、超微与分子基因不同层次技术 相结合 3.形态、机能与代谢变化相结合
胰腺，出血改变
肠管，出血
脑
脑干出血
第二章 病理大体标本的制作
一、大体标本的收集、体解剖和活体组织（包括外科手术切 除标本和活体组织穿刺标本〕检查时发现并收 集。
2.大体标本的取材
取材室条件： 通风要好，必须有排风 设备； 固定的组织取材前要用 流水充分冲洗； 排水要远离住宅区等
3〕浸透和包埋：可使组织具有一定的硬度和韧度，
便于切成薄的切片。常用的石蜡溶点为60~62℃， 有时为保存更多的抗原成分。可采用低溶点石蜡 （48~50 ℃ 〕。 4〕切片 切片机类型： 旋转式切片机 滑动式切片机
旋转式切片机
5. HE（Hematoxin Eosin,HE〕染色
1〕苏木素染色配方： 苏木素 纯酒精 钾明矾 蒸馏水 氯化汞 1g 10ml 20g 200ml 0.5g
3. 六胺银（PASM〕染色
在肾脏活体组织检查和一些真菌感染的组织 选用此方法。
1〕PASM染液的配方： 2％硝酸银水溶液3ml；
3％六次甲基四胺液25ml；
5％硼砂2ml。 注：2％硝酸银配制胺溶液，染色时间40分钟，温度 55~60℃，随时镜下观察便于控制。
2〕PASM染色法：
（1〕1％过碘酸水溶液内染10分钟；
3〕固定液的特性 甲醛固定液渗透力强，固定均匀，对组织收 缩较小，并能增加组织韧性的优点，而且可以保 存组织内的脂类物质，对组织的主要作用为硬化 和防腐。 酒精可以保存组织内的糖类物质及尿酸结晶， 不过，它常使组织明显收缩，且使脂类物质溶解。
4. 大体标本的脱水、包埋和切片
为能制成满意的切片，固定后的组织还要经过 脱水、透明、浸蜡及包埋等一系列程序。 1〕脱水：目的是将固定了的组织内水分除去。以 便使切片时的支撑物（石蜡〕充分进入组织内。常 用的是酒精。 2〕透明：目的是使能与石蜡结合溶解的媒介剂进 入组织，进而将不能与石蜡结合的脱水剂置换出来， 并使组织透明。常用的是二甲苯。
6. Masson三色染色法
（2〕自来水冲洗，蒸馏水冲洗； （3〕入5％铬酸水溶液40分钟，出此溶液后用1％亚硫酸钠除 掉铬酸； （4〕自来水洗数次，蒸馏水洗3－4次； （5〕入六胺银染液（50－60℃〕40分钟，20分钟后，每5分钟 镜下观察一次，蒸馏水洗四次； （6〕入0.2%氯化金水溶液1－2分钟，蒸馏水洗三次； （7〕入5％硫代硫酸钠水溶液1－2分钟，蒸馏水洗数次；
二、病理解剖室的设备和器械
1. 设备： 1〕解剖室的设计要求
最好位于太平间；
室内面积要大，必须有两个门； 地面用水磨石，四周有排水沟或地漏； 室内通风好； 有消毒室，男女更衣室，浴室等。
2〕解剖台的设计 高低和大小要合适 台面可用水磨石或不锈钢 有条件可购置能够升降的解剖台 解剖台可带有抽气的功能等
2〕伊红染色配方：
伊红
蒸馏水
0.5-1g
99ml
HE染色法：
1〕苏木素染色5－7分钟； 2〕自来水冲洗多余的染液； 3〕1％盐酸酒精分化数秒钟，使细胞核呈紫蓝色 4〕自来水中充分洗涤；
5〕1％氨水中数秒，至返蓝；
6〕自来水中至蒸馏水冲洗； 7〕1％的伊红染色，3分钟左右；
结果：细胞核呈紫蓝色，细胞浆呈粉红色，基 底膜，胶原纤维及肌纤维呈粉红色。
第一章：病理解剖技术
一、病理解剖的意义 病理解剖技术是病理学的基础之一，是病理学不可 分割的一部分。 通过病理解剖收集病理教学及科研资料是其中一个 途径，大量病理资料的积累促进了医学的发展与进步。 病理解剖是通过解剖尸体观察和发现死者器官、组 织的病理变化，找出主要病变，分析判断直接死亡的一 个重要方法。
4.免疫组织化学促进了免疫病理学的发展 5.分子生物学带动了分子病理学的兴起 6.计算机及其网络的应用，将病理学走向信息病理学时代
传统病理学技术：
传统的Formalin固定，石蜡切片和HE染色技 术仍是病理学的基本技术，大量应用与基础和临 床病理学日常工作中，保证和提高常规质量和现
代设备水平十分重要。
（8〕复染HE，脱水、透明、封片
结果：底膜呈黑色，网状纤维呈黑色，细胞核呈蓝色， 背景呈粉红色。
PASM染色
PASM染色
PASM
PASM
附：PASM对真菌的染色
真菌（fungus〕，又称霉菌，其种类较多。 真菌的基本结构成分是含有较多的粘多糖和蛋白质。
1〕试剂的配制： （1〕六次甲基四胺、硝酸银原液（简称六胺银原液〕。3％六 次甲基四胺水溶液100ml，5％硝酸银水溶液5ml； （2〕六胺银硼砂染色液。六胺银原液25ml，蒸馏水25ml，5％ 硼砂水溶液2ml；
1〕试剂配制：苏丹染液 苏丹III或苏丹IV0.5g，70%乙醇250ml，丙酮250ml。 2〕染色方法： （1〕标本常规甲醛固定后流水冲洗12h； （2〕用滤纸吸干标本表面的水分，把标本放入苏丹III染液中 浸泡30min； （3〕用70％乙醇分化，以脂肪组织呈橙黄色，其它组织不着色 为佳； （4〕水洗后浸存在5％甲醛液中，为了防腐可加入适量的防腐 剂。
（7〕无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
结果：真菌均呈黑色，菌丝和孢子呈黑褐色，细胞核 呈红色，背景呈淡绿色。
念珠菌（假菌丝）
新生隐球菌性脑膜炎
4. 淀粉样物质染色（介绍刚果红染色）
淀粉样物质是一种嗜伊红性物质，性质属于糖蛋 白成分。组织出现此物质称为淀粉样变性。
1〕试剂配制： （1〕刚果红染色液。刚果红1g，蒸馏水100ml； （2〕Harris苏木素染色液。
PAS
念珠菌（PAS染色）
附：AB/PAS法（阿尔辛蓝过碘酸雪夫染色法〕
结果：中性粘液物质呈红色，酸性粘液物质呈蓝
色，中性和酸性粘液的混合物质呈紫色。
阿尔辛蓝－阿尔辛黄法：常用于黏液上皮肿瘤的鉴别诊断
阿尔辛蓝过碘酸雪夫反应：是显示中性和酸性黏液物质的有效方法
AB/PAS
HID/AB:高铁二胺奥新蓝法
HE切片
第三章 特殊染色
HE染色虽是一种快速、经济、且易掌握的 方法，但它不能回答病因学、Z组织发生及发病
机制等方面的许多问题。而特殊染色可以协助
解决病理诊断问题。
目前市场上有配制好的特殊染色试剂
介绍常用的几种特殊染色
1. 脂肪染色 主要用于心、肝、肾的脂肪变性，动脉粥样硬化， 以及因脂肪栓塞导致的死亡病例鉴定等。
水磨石台面的解剖台
水磨石台面的解剖台
不锈钢台面的解剖台
2. 器械：
病 理 解 剖 器 械
3. 清洁、消毒和个人保护 1〕病理解剖室的清洁和消毒
2〕病理解剖器械的清洁和消毒
3〕个人保护等
三、病理解剖的方法和步骤
1. 病理解剖前的准备
主要办理一切手续，非常重要。
2. 体表检查
体表检查
尸斑，尸僵
（3〕核固红染液。核固红0.1g，硫酸铝5g，蒸馏水100ml；
（4〕亮绿染色液。亮绿0.2g，蒸馏水100ml，冰醋酸0.2ml。
2〕染色步骤：
（1〕5％铬酸水溶液氧化1小时，流水洗2分钟，蒸馏水洗2次； （2〕浸入1％亚硫酸钠水溶液除掉铬酸1分钟，流水洗5分钟， 蒸馏水洗3次； （3〕浸入六胺银硼砂液染色1－1.5小时（40－50℃温箱内〕， 至切片呈浅棕色，蒸馏水3次； （4〕用0.2%氯化金水溶液调色3分钟，蒸馏水稍洗； （5〕核固红染色细胞核10分钟，流水洗，蒸馏水洗； （6〕亮绿染色液30秒，用蒸馏水快速稍洗；
3〕肺
肺组织比较疏松，固定液容易渗透。 肺组织的取材要清楚的了解各叶肺组织所伴随 的支气管。
A：主支气管
B：叶支气管
肺 和 气 管 周 围 的 淋 巴 结
肺癌
肺门型
肺癌
肺门与周 围之间
肺癌
周围型
肺癌 空洞型
4）其它类型 外科手术标本常见： 乳腺癌 子宫颈癌 肠癌 卵巢肿瘤等
乳腺癌
（5〕冷却至25℃时，再加入无水亚硝酸钠1g并搅拌匀。
（6〕置入遮光瓶内并放入在4℃冰箱内保存备用。
2〕PAS染色方法： （1〕1％过碘酸水溶液染10分钟，使含有乙二醇的化合物氧 化形成醛基； （2〕蒸馏水洗去过碘酸；
（3〕 schiff氏试剂反应15分钟，使醛基和schiff氏试剂结合， 形成紫红色产物；
4.定性、定位与定量观测相结合
5.实验研究技术与临床应用技术相结合 6.技术的基本原理与具体方法相结合 7.基本技术知识与作者实践经验相结合
病理学的发展与使用的工具
和方法的更新密切相关
1.用解剖刀剪等进行尸体检查，开展了器官病理学 2.显微镜发明百年之后，建立了细胞病理学
3.电子显微镜的问世，发展了超微病理学
（4〕0.5%亚硝酸钠(NaHSO3)处理三次，每次2分钟；
（5〕流水冲洗5－10分钟；
（6〕用苏木素染色液复染细胞核； 〔7〕水洗或1％盐酸酒精分化。
3〕结果：
细胞核呈蓝色，基底膜呈红色，胶原纤维、肌 纤维及细胞浆呈红色。
过碘酸－Schiff反应：糖元及其他PAS反应阳性物质呈红色，细胞 核呈蓝色
不同器官的取材和固定不同：
1〕实质性的器官：如肝、脾等
要注意，实质器官不容易被固定液所穿透。
肝癌
肝癌
肝癌
肝癌
2〕空腔器官：如胃、肠等
取材时要看全层，保持粘膜、肌层和浆膜全 层的组织。
胃癌，呈菜花状
切面的形状
胃癌，溃疡型
切面的形状
溃疡型胃癌
切面的形状， 浸润性至浆膜
溃疡型胃癌
切面的形状，浸润 性至浆膜
2〕染色步骤：
（1〕苏木素染色液浸染2分钟； （2〕0.5%盐酸乙醇分化数秒钟； （3〕流水洗，蒸馏水洗2次； （4〕刚果红染色液中25分钟；
（5〕无水乙醇迅速脱水2次；
（6〕二甲苯透明，中性树胶封固。
结果：淀粉样物质呈红色，细胞核呈蓝色。
刚果红染色
5. Mallory三色染色法（属于结缔组织复合染色法〕
（4〕苯胺蓝液20分钟，95％乙醇快速分化； （5〕直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
结果：胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、粘液、淀粉 样变性物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸 性颗粒呈红色，髓鞘和红细胞呈橘红色。
Mallory
特点：利用酸性复红、苯胺蓝、橘黄G这三种染料对结缔组织和 非结缔组织进行着色。
肝脂肪变
苏丹III染色
2. 过碘酸(periodic acid)-schiff染色，即PAS染色
此技术主要显示糖原（在淀粉酶消化对照下〕、 中性粘液物质、基底膜、霉菌和寄生虫等。
1〕 schiff氏试剂的配方：
（1〕将200ml蒸馏水煮沸； （2〕冷却至90℃时，慢慢加入碱性复红1g; （3〕搅拌并煮沸5分钟使其全溶； （4〕冷却至50℃时过滤，并加入1N盐酸20ml；