大肠杆菌.ppt

大肠杆菌可以透过 接合作用传递遗传 物质。
五、抗原及血清型
（一）抗原 O抗原，即菌体抗原，为细胞壁脂多糖。该抗原刺激 机体主要产生IgM类抗体。 H抗原， 即鞭毛抗原 ，H抗原主要刺激机体产生IgG 类抗体，与其他肠道菌基本无交叉反应。 K抗原，即荚膜抗原，位于O抗原外层，为多糖。具 有K抗原的菌株不能被其相应的抗O血清所凝集叫 “O不凝集性”。 据耐热性不同，K抗原又分为：L、A和B 三型。

超过56种 100种以上
170多种
（二）血清型 可用O:K:H排列表示其血清型。如：O8:K23:H19， 表示该菌具有O抗原8，K抗原23，H抗原为19。 致人畜腹泻的产肠毒素大肠杆菌，除含K抗原外， 还可含有蛋白质性粘附素抗原。对粘附素抗原应并 列写于多糖K抗原之后。如：O8:K87，K88:H19 中 K88即为粘附素抗原。
大肠杆菌
大肠杆菌的历史
肠杆菌科,为革兰氏阴性杆菌。根据生化反应、血清 学试验、DNA同源性研究，肠杆菌科至少包括44个 菌属，170个以上的菌种。 埃希菌属（Escherichia）中最重要的是大肠埃希菌 (E. coli) ，常称为大肠杆菌。 大肠杆菌广泛分布于自然界，包括腐生菌、寄生菌 和人及动物的病原菌。多数是人和动物肠道正常菌 群的重要成员。 20世纪中叶，认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对 人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜（禽），常 引起严重腹泻和败血症。

病料
腹泻或水肿病例 败血症病例
常采集粪便或肠粘膜刮取物 麦康凯或伊红美兰琼脂平板划线
常采集血液及其病变组织 血琼脂或麦康凯琼脂平板划线
挑取疑似大肠杆菌菌落5～10个分别在琼脂平板进行纯培养 革兰染色镜检 革兰氏染色阴性 接种TSI琼脂培养基
生化试验
血清学鉴定 临床上只检测O抗原
猪水肿病菌株
Stx2e检测

六、致病性

（一）致病物质

1、定居因子（Colonization factor ，CF）；也称粘附素， 即大肠杆菌的菌毛。
2、肠毒素是肠产毒性大肠杆菌在生长繁殖过程中释放的外 毒素，分为耐热和不耐热两种。 ①耐热（ST）：100℃20min不破坏，免疫原性弱。 ②不耐热（LT）：65 ℃30min破坏，免疫原性强。 3．其他：细胞壁脂多糖的类脂A具有毒性；K抗原有抗吞噬 作用，有抵抗抗体和补体的作用 。
底层和斜面均呈 发酵葡萄糖和乳 大肠杆菌 糖；大量产酸产气 黄色，底层有气 葡萄糖 泡 乳糖 沙门菌 只发酵葡萄糖 底层黄色，斜 蔗糖 产酸产气 面保持红色 硫酸亚铁 能产硫化氢菌株 因形成硫化亚铁而使培养基呈黑色
对照 假单胞菌 志贺氏菌 沙门氏菌 大肠杆菌 变形杆菌 三糖铁培养基
吲哚试验
甲基红试验


（二）所致疾病 1．肠道外感染：多为内源性感染，以泌尿系感染为 主；大肠杆菌可侵入血液，引起败血症；大肠杆菌 性脑膜炎 。 2．急性腹泻 （1）肠产毒性大肠杆菌（ETEC） （2）产志贺毒素大肠杆菌(STEC） （3）肠致病性大肠杆菌（EPEC） （4）肠出血性大肠杆菌（EHEC） （5）肠侵袭性大肠杆菌（EIEC ） （6）肠粘附性大肠杆菌（EAEC）
V-P试验
枸橼酸盐试验
IMViC试验
三、大肠杆菌的基本结构
(一)细胞壁 大肠杆菌的细胞壁分外膜和肽聚糖层。 外膜是大肠杆菌细胞壁的主要成分，主要由磷脂、 蛋白质和脂多糖组成。 脂多糖是革兰氏阴性细菌的内毒素，也是革兰氏阴 性细菌细胞壁的特有成分，主要与抗原性、致病性 及对噬菌体的敏感性有关。
十、防治
母源抗体能保护幼畜抵抗致病性大肠杆菌。 相应血清型的灭活苗，亚单位苗具有免疫预防作 用。 治疗可选用庆大霉素、丁胺卡那霉素等。 使用微生态制剂：治疗出生幼畜下痢。

（1）三糖铁培养基 ①配方 牛肉膏 5g 氯化钠 5g 蛋白胨 20g 蛋白胨 5g 乳糖 10g 蔗糖 10g 葡萄糖 1g

硫酸亚铁 0.2g 蒸馏水 1000mL 硫代硫酸钠 0.2g 琼脂 1 2g 2%酚红溶液 12.5ml
②原理

测定细菌对葡萄糖、乳糖及蔗糖的发酵反应，以及 能否产生硫化氢。可鉴别肠道菌。

L型K抗原：对热敏感，100℃ 1h破坏其抗原性，并 失去与相应抗体的结合力和凝集性，位于被膜中， 偶见于荚膜中。 A型K抗原：耐100℃ 1h ，但121℃ 2.5h破坏其抗 原性和O不凝集性，但保留与相应抗体结合能力。 位于荚膜中，抗A血清可使具有相应A抗原的菌体出 现荚膜肿胀现象。 B型K抗原：100℃ 1h 破坏其抗原性与相应抗体的 凝集性，但保留其与相应抗体结合力。

细胞质膜 周质
外膜
（二）质粒
是细胞染色体外能够自主复制很小的环状DNA分子， 是基因工程最常见的运载体

F因子：又称致育因子，插入、复制和转移的功 能。有F因子的大肠杆菌为雄性，用F+表示，不含F 因子的大肠杆菌称为雌性，用F-表示。通过F+和F细菌的接合，F因子可经性菌毛传递给F-菌株，使F菌株转变为F+菌株。 R因子 ：抗性转移因子和抗性决定因子 。

④ 肠道菌鉴别培养基 麦康凯琼脂培养基：红菌落。 SS琼脂培养基：一般不生长或生长较差，生长者呈红色。 ⑤血平板：一些致病性菌株常β溶血。
麦康凯琼脂培养基 伊红美兰琼脂培养基 SS琼脂培养基
血平板
2、 生化特性
I：吲哚试验 M：甲基红试验 V：V-P试验 C：枸橼酸盐利用实验

一 、大肠杆菌的形态与染色

1、G－直短杆菌，两端钝圆，散在或成对。
革兰染色
2、周身鞭毛，能运动，无芽孢 ，有的有荚膜。
3、代谢能力强，代谢类型是异养兼性厌氧型 。
二 、培养及生化特性


1、培养特性
① 兼性厌氧； ② 最适生长温度37℃，最适生长pH7.2～7.6； ③ 普通琼脂培养基：生长良好，圆形凸起、光滑、湿润、半 透明、灰白色菌落，直径约2~3mm；


Col因子：产大肠杆菌素因子，编码合成大肠杆菌 素。
四、大肠杆菌的特殊结构
1、荚膜 荚膜具有抗原性，构成了大肠杆菌的表面抗原，即 K抗原 。 2、鞭毛 由鞭毛蛋白组成，构成了细菌的鞭毛抗原，与运动 有关。 3、菌毛 在细胞表面还含有一种比鞭毛更细更短更硬的丝状 体叫菌毛，可分为普通菌毛和性菌毛。


肠产毒性大肠杆菌（ETEC）
ETEC是致人和幼畜腹 泻最常见的病原菌； 毒力因子有粘附素性 菌毛和肠毒素。
致病过程
七、抵抗力
大肠杆菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强。 55℃加热60min或60℃加热15min仍有部分细菌存 活。 胆盐、煌绿等对非致病性大肠杆菌有选择性抑制作 用，而对致病性大肠杆菌无抑制作用，所以用肠道 选择鉴别培养基来分离致病性大肠杆菌。 对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感。

八、非致病性大肠杆菌的作用
保护肠道的微生态平衡。消耗肠道内的氧
气，创造厌氧环境，利于厌氧菌的生长； 分解代谢产物供厌氧菌生长。 能合成维生素K和B。 对外袭菌有拮抗作用。某些大肠杆菌能产 生大肠菌素，对一些病原微生物具有拮抗 作用。
九、微生物学的诊断
1、病料的采集：肠道外感染取中段尿、血液、脓 液、脑脊液等，腹泻者取粪便。 2、分离培养：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培 养基。其他病料可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌 选择性培养基。37℃培养18～24h后，观察菌落并涂 片染色镜检。 3、生化鉴定：大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发 酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和木胶糖等产酸 产气。 IMViC试验为“+ + - -”。即为典型大肠杆菌。
猪腹泻菌株
肠毒素检测
十、卫生细菌学检查


1、细菌总数：检测每毫升或每克样品中所含细菌数，采用 倾注培养计算。 2、大肠菌数检验：指100g1000mL水中所含大肠菌群的最 近似数（MPN），采用乳糖胆盐发酵试验检测。
乳糖胆盐发酵试验
发酵试验
分离培养
复发酵试验
食品执行标准：含乳蛋白冷冻饮品菌落总数应小于25000cfu/ml，大肠菌群小于 450MPN/100ml； 含豆类冷冻饮品菌落总数应小于20000cfu/ml，大肠菌群小于 450MPN/100ml；含淀粉或果类冷冻饮品菌落总数应小于3000cfu/ml，大肠菌群 小于100MPN/100ml；食用冰块菌落总数应小于100cfu/ml，大肠菌群小于 6MPN/100ml。