细菌学检验-2-细菌学检验基本技术

二、不同标本采样方法有所不同
1．血及骨髓样本的采集：采静脉血； 2．尿液样本的采集：晨起第一次尿液；中段尿或
肾盂尿。 3．粪便样本的采集：脓血粘液便、肛拭子。 4．痰样本的采集：咳痰法、胃内采痰、咽拭子等。 5．上呼吸道样本的采集：清水反复漱口后，咽后
壁拭子。 6. 其他临床样本的采集：脓汁(拭子、吸管) ；脑
（二）细菌接种的基本程序
灭菌接种环
取菌种试管和待 接种的斜面试管
接种管宜放在菌种管上面
沾取标本
接种
接种后灭菌接种环
（三）细菌接种方法
1．平板划线接种法：分离细菌
目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成 单个菌落，以便获得纯菌。
曲线接种法：适用于含菌量较少的标本。 分区划线接种法：适用于含菌量较多的标本。 棋盘格划线接种法：用于分离肠道菌科细菌。 平板涂布接种法：用于活菌计数和药敏实验。 倾注培养：用于细菌计数。
脊液(穿刺)；
三、标本的送检与处理
1.对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和 流感嗜血杆菌等应保温并立即送检。
2.其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室。 3.若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存。 4.一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超
过24h。
５.病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全防 护。
６.标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装好， 防止送检过程中倒翻或碰破流出。
７.对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须按 规定包装，由专人运送。
８.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有 时可直接用抽Fra bibliotek标本的注射器运送。
第二节 细菌的分离培养方法
一、培养基（culture medium） 的制备
SS琼脂使致病的沙 门菌、志贺菌容易 分离到。
5．特殊培养基
疱肉培养基、 巯基乙醇酸钠培养基
（四）培养基的选择
根据标本来源和可能 存在的病原菌，确定选用 各种分离培养基。 如：伊红美蓝/麦康凯用于 筛选革兰阴性杆菌。
（四）培养基的选择
从血液、骨髓中分离 病原菌用血液增菌培 养基
二、细菌接种方法
（三）培养基的种类(按成分分类)
1．基础培养基（based medium） 2．营养培养基（nutrient medium） 3．鉴别培养基（diferential medium） 4．选择培养基（selective medium） 5．特殊培养基（special medium） 6. 增菌培养基：可提高检出率。
1．基础培养基
含有基础生长所需的 基本营养成分，最常用 的是肉浸液，俗称肉汤 （broth），主要成分含 牛肉浸液和蛋白胨。
2．营养培养基
最常用的是血琼脂平板、巧克力血平板 等。
3．鉴别培养基
糖发酵管、克氏双糖 铁琼脂（KIA）、伊红镁蓝琼脂和动力-吲哚尿素（MIU）培养基等。
4．选择培养基
一样；
郭霍法则 （Koch’s postulate）
本章内容
第一节 样本的采集与送检原则 第二节 细菌的分离培养方法 第三节 细菌的形态结构检查法 第四节 细菌的生化反应检查法 第五节 细菌的血清学检验 第六节 细菌毒素的检测 第七节 细菌数量的测定 第八节 细菌L型检验
第一节 标本的采集与送检原则
调配
溶化
矫正pH
2019/10/5
过滤澄清
分装加塞
灭菌
检定
保存
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(三)培养基的种类（按物理性状分类）
液体培养基：
不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。
半固体培养基：
含0.3％～0.5％琼脂， 用于观察细菌的动力、保存菌种等。
固体培养基：斜面、平板。
含2％～2.5％琼脂， 平板：多用于细菌的分离培养。 斜面：多用于纯培养、保存菌种等。
四、细菌在培养基上 的生长现象
(一)细菌在固体培养基中的生长现象
接种环境：严格无菌环境中进行 接种工具 接种的基本程序 接种方法
（一）接种工具
接种针和接种环：由三部分组组成，即环 （针）、金属柄和绝缘柄。接种前后都要过 火灭菌。
接种针：用于穿刺接种细菌， 接种环：用于固体、液体培养基的细菌接种。 L型玻璃棒：用于琼脂平板涂布接种细菌。
本节主要讲：临床样本的采集与送检 其余样本采集方法详见第七章
一、标本采集的一般原则
1．早期采集：应争取在使用抗生素之前采集； 2．无菌采集：避免杂菌污染； 3．根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位，
采取不同标本。尽可能采集病变明显部位的材料。 4．采集适量标本：特别是无菌部位的标本。 5．安全采集 6.标本必须新鲜，采集后尽快送检； 7.送检过程中要采取适当的保存方式。
第二章 细菌学检验基本技术
郭霍法则（Koch’s postulate）
证明某种微生物是否为某种疾病病原体的基本 原则。
在患病动物中存在可疑病原有机体，而健康动物中 没有；
可疑有机体在纯培养中生长； 纯培养中的可疑有机体细胞能引起健康动物发病； 可疑有机体被再次分离，并且和最初分离的有机体
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4.液体培养基接种法
可观察细菌在培养基中的生长现 象或用作生化反应实验。
三、细菌培养方法
1．需氧培养法(一般培养法)
培养温度：37℃（采用恒温培养箱） 培养时间：18～24h
2．二氧化碳培养法 ：
烛缸法、二氧化碳培养箱
3．厌氧培养法
厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐 疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等
连续划线法
分区划线法
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
涂布接种法：
用于测定标本中活菌数和药敏实验 细菌接种。
倾注培养法：用于细菌计数。
2.斜面接种法：
用于鉴定和保存菌种。
3.半固体培养基：
穿刺接种法 ，用于 保存菌种或观察细菌 动力。
培养基：是指人工配制的供 细菌生长繁殖需要的各种营 养物质配制而成的基质。
(一)培养基的的主要成分及其作用
营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、 醇类、血液、无机盐类、鸡蛋和动物血清生长 因子等。
水分：蒸馏水。 凝固物质： 琼脂（赋形剂）、明胶、卵白 抑制剂和指示剂
(二)制备培养基的一般程序