大豆磷脂中磷脂酰胆碱的液相测定
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h 0 21462.0 0.5 1 20795.1 19854.9 2 21775.4 4 8 20204.3 20368.6 RSD(%) 0.56
2.6 重复性实验 精密量取 10 μl 样品液, 在设定的色谱条件下重复进样 6 次， 精密量取 10 μl 标准液进样 1 次， 记录峰面积。由见表 3 可见， 平 均含量为 100.39%， RSD=0.37%。结果表明该方法的重复性良好。 表 3 重复性实验结果
1 101.92 2 98.95 3 99.81 4 100.33 5 99.79 6 101.54 100.39 RSD(%) 0.35
2.7 回收率实验 精密吸取标准液和样品液各 5 份， 体积分别为 1ml， 混匀， 取混 合液 10μl 打入液相色谱仪中， 在设定的色谱条件下， 按外标法进 行峰面积测定， 计算回收率。表 4 中结果显示， 样品液中的 PC 含量 平均回收率为 99.9 %， RSD 测定的回收率均在 98 %～102 %之间， 为 1.18 %(RSD≤ 2.0 %)符合要求， 说明该检测方法回收率良好。 表 4 回收率实验结果
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大豆磷脂中磷脂酰胆碱的液相测定
邢晶晶 1 郝 旭 2 （1、 哈药集团生物工程有限公司， 黑龙江 哈尔滨 150025 2、 江西省萍乡市中医院制剂室， 江西 萍乡 337000 ） 摘 要:目的： 建立大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量的高效液相色谱 （HPLC） 检测方法。方法： 采用高效液相色谱仪 （Agilent 1200 ） ，C18 柱 （ZOR BAX SB ， 150 x 4.6 mm, 5 μm， Agilent ） ， 流动相为正己烷 - 异丙醇 - 水 （7 : 7 : 2, V : V : V ） ， 流速为 1.0ml/ min， 检测波 长为 205 nm， 柱温为 30℃进行检测。结果： 磷脂酰胆碱浓度在 0.02751～0.43825 mg/ ml 范围内时， 线性关系良好， 回归方程的相关系数 r＝0.9972， 平均回收率 99.9 %， R SD=1.18 %。结论:用该方法检测大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量高效， 简便， 准确。 关键词:高效液相色谱； 大豆磷脂； 磷脂酰胆碱 大豆磷脂(phospholipid)是由大豆中的磷脂酰胆碱 (phosphatidylPC)、 磷脂酸乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine， PE)、 磷脂酰肌 choline， 醇 (phosphatidylinositol， PI) 、 溶血磷脂酰胆碱 （lyso- phosphatidylcholine， LPC ） 与磷脂酸 (phosphatidic acid， PA)等组成的天然类脂混 其中的 PC 由于具有很好的分散、 乳化、 粘着、 润湿等特性， 在 合物[1]。 医药、 食品、 化工及其它行业得到广泛应用， 因此检测大豆中 PC 的 含量成为一项重要的指标[2]。目前， 国内外 PC 含量的主要检测方法 TLC ） 和高效液相色谱法 有薄层色谱法 （thin layer chromatography， (high performance liquid chromatography， HPLC)： TLC 对操作技术要 求较高， 易造成大豆磷脂各组分的交叉反应， 成功率偏低； HPLC 具 有 “两快、 三高、 一广” 的特点： 分析速度快、 载液流速快； 高效、 高压、 高灵敏度； 应用范围广[3]。 虽然 PC 含量的检测方法众多， 但还没有一 个统一的标准检测方法， 重复性较差。本文建立一种高效液相的方 法对 PC 的含量进行测定， 取得良好的效果。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 电子天平 （ME104 梅特勒托利多） ； 高效液相色谱仪 (1200 美国 安捷伦公司 )；紫外检测器 （美国安捷伦公司） ； C18 柱 （ZORBAX SB， 150 × 4.6 mm, 5 cm 美国安捷伦公司 ） ；pH 计 （FE20 梅特 。 勒托利多 ） 1.2 试剂 PC 标准品 （中国药品生物制品检定所， 纯度大于 99%） ； 磷酸 、 异丙醇、 正己烷 （色谱纯 ） ； 无水乙醇、 丙酮 （分析纯 ） ； 水 （注射水 ） 。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 Agilent ZORBAX SB- C18 柱 (长度 × 直径： 150 × 4.6 mm， 5μm)，流动相为正己烷 - 异丙醇 - 水 （7 : 7 : 2, V : V : 粒径： V ） , 混匀后脱气 5 min， 流速为 1.0 ml / min， 检测波长为 205 nm， 柱温为 30℃， 进样量为 10μl。 2.2 标准液和样品液的配置 标准液的配置： 精密称取适量的 PC 标准品， 加流动相稀释制成 浓度为 0.1mg/ml 的溶液， 作为标准液。 样品液的配置： 原料为自制的大豆浓缩磷脂， 精密称取适量的 大豆浓缩磷脂溶于丙酮中， 获得真空干燥后丙酮不溶物， 再将丙酮 不溶物溶解于无水乙醇中， 离心后取上清， 用三氧化二铝对上清脱 色及过滤， 将滤液加无水乙醇定容至 20 ml。 2.3 线性关系考察 精密量取标准液 0.5， 1， 2， 4， 6， 8ml 至 10 ml 量瓶中， 加流动相 定容至刻度， 混匀。再各取 10 μl 上述溶液打入液相色谱仪中， 最 后用 PC 标准品面积 Y 对浓度 X （mg/ml ） 进行线性回归。 得到的回归 方程： Y=932X+628， r=0.9972， 结果表明 PC 标准品浓度在 0.02751～ 0.43825 mg/ml 范围内， 有良好的线性关系。 2.4 精密度考察 精密吸取 10 μl 标准液， 在设定的色谱条件下重复进样 8 次， 记录峰面积的结果见表 1， RSD=0.41%。 表 1 精密度检测结果
1 2 18377.6 21446.3 3 4 19993.5 20774.6 5 6 7 18435.9 20258.2 19007.5 8 RSD(%) 21709.3 0.41
0.5、 1、 2、 4、 8 h 进样品 10 μl， 记录 精密量取样品液， 分别在 0、 计算的 RSD=0.56%。结果表明样品至少在 8 峰面积。结果见表 2， h 内是稳定的。 表 2 稳定性实验结果
2.6 重复性实验 精密量取 10 μl 样品液, 在设定的色谱条件下重复进样 6 次， 精密量取 10 μl 标准液进样 1 次， 记录峰面积。由见表 3 可见， 平 均含量为 100.39%， RSD=0.37%。结果表明该方法的重复性良好。 表 3 重复性实验结果
1 101.92 2 98.95 3 99.81 4 100.33 5 99.79 6 101.54 100.39 RSD(%) 0.35
2.7 回收率实验 精密吸取标准液和样品液各 5 份， 体积分别为 1ml， 混匀， 取混 合液 10μl 打入液相色谱仪中， 在设定的色谱条件下， 按外标法进 行峰面积测定， 计算回收率。表 4 中结果显示， 样品液中的 PC 含量 平均回收率为 99.9 %， RSD 测定的回收率均在 98 %～102 %之间， 为 1.18 %(RSD≤ 2.0 %)符合要求， 说明该检测方法回收率良好。 表 4 回收率实验结果
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大豆磷脂中磷脂酰胆碱的液相测定
邢晶晶 1 郝 旭 2 （1、 哈药集团生物工程有限公司， 黑龙江 哈尔滨 150025 2、 江西省萍乡市中医院制剂室， 江西 萍乡 337000 ） 摘 要:目的： 建立大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量的高效液相色谱 （HPLC） 检测方法。方法： 采用高效液相色谱仪 （Agilent 1200 ） ，C18 柱 （ZOR BAX SB ， 150 x 4.6 mm, 5 μm， Agilent ） ， 流动相为正己烷 - 异丙醇 - 水 （7 : 7 : 2, V : V : V ） ， 流速为 1.0ml/ min， 检测波 长为 205 nm， 柱温为 30℃进行检测。结果： 磷脂酰胆碱浓度在 0.02751～0.43825 mg/ ml 范围内时， 线性关系良好， 回归方程的相关系数 r＝0.9972， 平均回收率 99.9 %， R SD=1.18 %。结论:用该方法检测大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量高效， 简便， 准确。 关键词:高效液相色谱； 大豆磷脂； 磷脂酰胆碱 大豆磷脂(phospholipid)是由大豆中的磷脂酰胆碱 (phosphatidylPC)、 磷脂酸乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine， PE)、 磷脂酰肌 choline， 醇 (phosphatidylinositol， PI) 、 溶血磷脂酰胆碱 （lyso- phosphatidylcholine， LPC ） 与磷脂酸 (phosphatidic acid， PA)等组成的天然类脂混 其中的 PC 由于具有很好的分散、 乳化、 粘着、 润湿等特性， 在 合物[1]。 医药、 食品、 化工及其它行业得到广泛应用， 因此检测大豆中 PC 的 含量成为一项重要的指标[2]。目前， 国内外 PC 含量的主要检测方法 TLC ） 和高效液相色谱法 有薄层色谱法 （thin layer chromatography， (high performance liquid chromatography， HPLC)： TLC 对操作技术要 求较高， 易造成大豆磷脂各组分的交叉反应， 成功率偏低； HPLC 具 有 “两快、 三高、 一广” 的特点： 分析速度快、 载液流速快； 高效、 高压、 高灵敏度； 应用范围广[3]。 虽然 PC 含量的检测方法众多， 但还没有一 个统一的标准检测方法， 重复性较差。本文建立一种高效液相的方 法对 PC 的含量进行测定， 取得良好的效果。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 电子天平 （ME104 梅特勒托利多） ； 高效液相色谱仪 (1200 美国 安捷伦公司 )；紫外检测器 （美国安捷伦公司） ； C18 柱 （ZORBAX SB， 150 × 4.6 mm, 5 cm 美国安捷伦公司 ） ；pH 计 （FE20 梅特 。 勒托利多 ） 1.2 试剂 PC 标准品 （中国药品生物制品检定所， 纯度大于 99%） ； 磷酸 、 异丙醇、 正己烷 （色谱纯 ） ； 无水乙醇、 丙酮 （分析纯 ） ； 水 （注射水 ） 。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 Agilent ZORBAX SB- C18 柱 (长度 × 直径： 150 × 4.6 mm， 5μm)，流动相为正己烷 - 异丙醇 - 水 （7 : 7 : 2, V : V : 粒径： V ） , 混匀后脱气 5 min， 流速为 1.0 ml / min， 检测波长为 205 nm， 柱温为 30℃， 进样量为 10μl。 2.2 标准液和样品液的配置 标准液的配置： 精密称取适量的 PC 标准品， 加流动相稀释制成 浓度为 0.1mg/ml 的溶液， 作为标准液。 样品液的配置： 原料为自制的大豆浓缩磷脂， 精密称取适量的 大豆浓缩磷脂溶于丙酮中， 获得真空干燥后丙酮不溶物， 再将丙酮 不溶物溶解于无水乙醇中， 离心后取上清， 用三氧化二铝对上清脱 色及过滤， 将滤液加无水乙醇定容至 20 ml。 2.3 线性关系考察 精密量取标准液 0.5， 1， 2， 4， 6， 8ml 至 10 ml 量瓶中， 加流动相 定容至刻度， 混匀。再各取 10 μl 上述溶液打入液相色谱仪中， 最 后用 PC 标准品面积 Y 对浓度 X （mg/ml ） 进行线性回归。 得到的回归 方程： Y=932X+628， r=0.9972， 结果表明 PC 标准品浓度在 0.02751～ 0.43825 mg/ml 范围内， 有良好的线性关系。 2.4 精密度考察 精密吸取 10 μl 标准液， 在设定的色谱条件下重复进样 8 次， 记录峰面积的结果见表 1， RSD=0.41%。 表 1 精密度检测结果
1 2 18377.6 21446.3 3 4 19993.5 20774.6 5 6 7 18435.9 20258.2 19007.5 8 RSD(%) 21709.3 0.41
0.5、 1、 2、 4、 8 h 进样品 10 μl， 记录 精密量取样品液， 分别在 0、 计算的 RSD=0.56%。结果表明样品至少在 8 峰面积。结果见表 2， h 内是稳定的。 表 2 稳定性实验结果