白鲜皮杀菌活性成分的研究
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method, whose structures were identified as fraxinellone and dictamnine by 1H NMR and 13C NMR. The results showed that the EC50 of fraxinellone were determined as 64.2µg/mL against Alternaria longipes, and 123.3µg/mL against Curvulavia lunata. The EC50 of dictamnine were determined as 91.7µg/mL against Alternaria longipes, and 46.6µg/mL against Curvulavia lunata. Key words: Dictamnus dasycarpus; fungicidal activity
：ｐｐｍ）： ０．８６（３Ｈ，ｓ，１１－ＣＨ ），２．１４ ３
（３Ｈ，ｓ，１０－ＣＨ３），４．８９（１Ｈ，ｓ，３－Ｈ），６．３５（１Ｈ，ｓ，１５－Ｈ），７．４５（１Ｈ，ｓ，
１５－Ｈ）， ７．４８（１Ｈ．ｓ，１３－Ｈ），１．４５，１．８６（４Ｈ，ｍ，５－Ｈ，６－Ｈ），２．２６（２Ｈ，
ｍ，７－Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ δ ：ｐｐｍ）： １６９（１－Ｃ＝Ｏ）， １４８（９－Ｃ），１４３（１６－ＣＨ），１３９（１３－ＣＨ），１２７（８－Ｃ），１２０（１４－Ｃ），１０８
Ｗ Ｍ Ｌ － ０ １ 和 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ ２ ，经 １Ｈ Ｎ Ｍ Ｒ 和 １３Ｃ Ｎ Ｍ Ｒ 鉴定分别为 皮酮和白鲜碱。可有效抑制玉米弯孢病菌和烟
草赤星病菌孢子的萌发。
皮酮对烟草赤星病菌的
ＥＣ ５０
值为
６４．２µg/mL，对玉米弯孢病菌的
ＥＣ ５０
值为
１２３．３µg/mL；
白鲜碱对玉米弯孢病菌的 ＥＣ５０ 值为 ４６．６µg/mL，对烟草赤星病菌的 ＥＣ５０ 值为 ９１．７µg/mL。
（１５－ＣＨ），８３（３－ＣＨ），４３（４－Ｃ），３２（５－ＣＨ２），３１（７－ＣＨ２）２０（１０－ＣＨ３）， １８．３（１１－ＣＨ３），１８．２（６－ＣＨ２）。与文献报道的ｆｒａｘｉｎｅｌｌｏｎｅ［１０，１２］ 的核磁波谱数据完全一致，故鉴定 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ １ 为 皮酮，
结构见图 １ 。
Ｗ Ｍ Ｌ － ０ ２ 无色棒状结晶：熔点：１ ２ ９ ℃￣ １ ３ １ ℃。
参考文献：
［１］ 江苏医学院编． 中药大辞典（上册）［Ｍ］． 上海： 上海人民出版社， １９７７： ７３７－７３８．
１ 材料与方法
１．１ 材料
植物材料：白鲜皮（Ｄｉｃｔａｍｎｕｓ ｄａｓｙｃａｒｐｕｓ Ｔｕｒｃｚ）， 购自太白县生药联诊所。供试病原菌：玉米弯孢病菌 （Ｃｕｒｖｕｌａｖｉａ ｌｕｎａｔａ）、苹果腐烂病菌（Ｖａｌｓａ ｍａｌｉ）、烟草 赤星病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｏｎｇｉｐｅｓ），由西北农林科技大学植
第 ４５ 卷第 １１ 期 ２００６ 年 １１ 月
科技与开发－
农药 Agrochemicals
Vol. 45, No. 11 Nov. 2006
白鲜皮杀菌活性成分的研究
王麦玲，张继文，钱 勇，李君浩，姬志勤
（西北农林科技大学 农药研究所，陕西 杨陵 ７１２１００）
摘要：在活性追踪指导下，通过多次硅胶柱层析从白鲜皮石油醚提取物中分离得到两个具有杀菌活性化合物
白鲜（Ｄｉｃｔａｍｎｕｓ ｄａｓｙｃａｒｐｕｓ Ｔｕｒｃｚ）为芸香科白鲜属植 物保护学院植物病理研究室提供。主要仪器：Ｂ ｒ ｕ ｋ ｅ ｒ 物。生长于山坡丛林中，我国辽宁、河北、安徽、陕 ＡＭ－４００ 核磁共振谱仪，Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ２４１ＭＣ 旋光仪，Ｘ－４
西、甘肃等省均有分布［ １ ］ 。白鲜的干燥根皮即为传统中 药白鲜皮，具有清热燥湿、祛风解毒、抗菌抗癌的作 用。临床上用于治疗湿热疮毒、黄水淋漓、湿疹等， 并对心血管及血液病有一定的疗效［ 。 ２－３］
２ 结果与分析 ２．１ 杀菌活性成分的分离
以苹果腐烂病原菌作为杀菌活性追踪指示菌，采用菌 丝生长速率法，追踪杀菌成分的分离，结果见表 １ 、２ 。
表１ 一级柱层析分离各馏分的抑菌活性
注：“－”表示样品对菌丝生长有刺激作用 。
从表 １ 可以看出，一级柱层析的 ６ 个馏分中，馏分 １ 和馏分 ３ 的菌丝生长抑制率分别为 ８６．４％ 和 ９１．７％，远 高于其它 ４ 个馏分，说明馏分 １ 和馏分 ３ 为杀菌活性馏 分，对它们进一步做杀菌活性成分分离。
菌的毒力方程为ｙ＝１．９５８３＋１．８２３０ｘ及ｙ＝０．０３３３＋２．５６４８ｘ，求
出抑制中浓度 ＥＣ５０（µg/mL）分别为 ４６．６ 和 ９１．７。
２．３ 活性成分结构鉴定
Ｗ Ｍ Ｌ － ０ １ 白色针状结晶：熔点：１ ２ １ ℃￣ １ ２ ３ ℃。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ δ
２．２ 杀菌成分的毒力
以玉米弯孢病原菌和烟草赤星病原菌为供试菌，测 定了杀菌成分 ＷＭＬ－０１ 和 ＷＭＬ－０２ 对孢子萌发的抑制情 况，结果见表 ３ 。
图１ 皮酮的分子结构 图２ 白鲜碱的分子结构
第 １１ 期
王麦玲，等：白鲜皮杀菌活性成分的研究
７４１
３ 讨论
型数字显示显微熔点测定仪。
１．２ 实验方法
１．２．１ 杀菌活性测定 （１）菌丝生长速率法 用少量丙酮将待测样品溶解，加无菌水稀释至预定浓
度，取 ５mL 与灭菌的定量 ＰＤＡ 培养基混合后，倒入直径 为 ９ ｃ ｍ 培养皿内制成带毒培养基，各浓度重复 ３ 次，以 丙酮为对照。用直径为 ６ ｍ ｍ 的打孔器在培养好的供试病 原真菌菌落边缘切下菌饼反接于培养皿内，２ ５ ℃培养 ３ ￣ ４ ｄ ，用十字交叉法测量菌落扩展直径，求出菌丝生长 抑制率［８］。
白鲜皮主要含有白鲜碱、β－ 谷甾醇、黄柏酮、岑酮、 柠檬苦素及其衍生物和忒文等［４－５］。国外学者报道其具有解 热、健胃、抗肿瘤、引起昆虫拒食等作用［ ６ ］ 。我国学者 报道了该植物的乙醇提取物对蟋蟀、蚂蚱和粘虫均表现出 显著毒杀活性，对粘虫也具有一定的拒食活性［７］ 。笔者 在植物源杀菌活性筛选中发现白鲜皮提取物具有明显的杀 菌活性，并在活性追踪指引下，从白鲜皮的石油醚提取 物中分离出两个杀菌活性成分 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ １ 和 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ ２ ，经 １Ｈ ＮＭＲ 和 １３Ｃ ＮＭＲ 鉴定其结构分别为 皮酮和白鲜碱。
(Institute of Pesticide, Northwest A&F University, Yangling 712100, Shanxi, China)
Abstract: Two fungicidal compounds were isolated from Dictamnus dasycarpus Turcz by the bioactivity guided
热回流提取 ３ ｈ ，过滤，残渣中加入 ４ Ｌ 石油醚，热回
收稿日期：２００６－０４－０５ 基金项目：８６３ 高技术研究发展计划（２００２ＡＡ２４５１２１） 作者简介：王麦玲（ １ ９ ７ ８ － ） ，女，汉族，陕西渭南人，在读硕士研究生，主要从事天然产物分离研究。Ｅ － ｍ ａ ｉ ｌ ：ｗ ｏ ｓ ｈ ｉ ｍ ａ ｉ ｌ ｉ ｎ ｇ ＠ １ ６ ３ ． ｃ ｏ ｍ 。 通讯作者：姬志勤，电话：０２９－８７０９２１９１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉｚｈｉｑｉｎ＠１６３．ｃｏｍ。
关键词：白鲜皮；杀菌活性
中图分类号：ＴＱ４５０．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：1006-0413(2006)11-0739-03
The study on fungicidal activity of Dictamnus dasycarpus
WANG Mai-ling, ZHANG Ji-wen, QIAN Yong, LI Jun-hao, Ji Zhi-qin
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚδ：ｐｐｍ）： ４．４（３Ｈ，ｓ，１４－ＣＨ３），７．１（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝５．６Ｈｚ，５－Ｈ），７．６（１Ｈ，ｄ， Ｊ＝５．６Ｈｚ，４－Ｈ），８．２６（１Ｈ，ｄ， Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１３－Ｈ），
８．０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，１０－Ｈ），７．６８（１Ｈ，ｄｄ， Ｊ＝１６．８Ｈｚ， Ｊ＝１４Ｈｚ，１２－Ｈ），
（２）抑制孢子萌发法 将样品的丙酮溶液 １０µL 滴加在凹玻片上，待溶剂挥 发形成药膜后再滴加 ５µL 病原菌孢子悬浮液，以甲醇为 对照，在 ２６℃￣２８℃条件下保湿培养 １０￣１２ｈ，统计孢子 萌发率［ ９ ］ 。
１．２．２ 活性成分提取 取 ３．０ｋｇ白鲜皮粉，加入６Ｌ 石油醚（ｂ．ｐ． ６０℃￣９０℃）
７４０
农 药 Agrochemicals
第 ４５ 卷
流提取 ２ ｈ，过滤。合并滤液，蒸去溶剂得浸膏 ４８．０ｇ 。
表 ３ ＷＭＬ－０１ 和 ＷＭＬ－０２ 抑制孢子萌发的结果
１．２．３ 活性成分的分离 取 ４８．０ｇ 浸膏做柱层析（２００￣３００ 目硅胶，１２０ｃｍ ×
５ｃｍ，干法上样）。依次以 １５００ｍＬ 石油醚 － 氯仿（体积比 分别为 ７ ∶１ 、５ ∶１ 、３ ∶１ 、１ ∶１ ） 、乙酸乙酯及甲 醇洗脱，得 ６ 个一级柱层析馏分（馏分 １￣ 馏分 ６）。取馏 分 １（５．１ｇ）进一步做柱层析分离（２００￣３００ 目硅胶，１００ｃｍ × ３ｃｍ，干法上样）。以石油醚 － 乙酸乙酯（体积比为 ３∶１） 洗脱，每 ２００ｍＬ 收集 １ 份。除去溶剂得馏分 １－１￣ 馏分 １ － ６ ，将馏分 １ － ３ （ 粗结晶） 重结晶得化合物 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ １ （６００ｍｇ）。取馏分３（２．８ｇ）进一步做柱层析分离（２００￣３００目 硅胶，６ ０ ｃ ｍ × ３ ｃ ｍ ，干法上样） 。以石油醚 － 乙酸乙 酯（ 体积比为 ５ ∶１） 洗脱，每 ２００ｍＬ 收集 １ 份。除去溶 剂得馏分 ３－１~ 馏分 ３－４，将馏分 ３－４（粗结晶）重结晶得化 合物 ＷＭＬ－０２（１４３ｍｇ） 。
７．４４（１Ｈ，ｄｄ， Ｊ＝１６．４Ｈｚ， Ｊ＝１４Ｈｚ，１１－Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３， １００ＭＨｚ δ：ｐｐｍ）： ５９（１４－ＣＨ３），１０３（８－Ｃ），１０４（５－ＣＨ），１１８（６－Ｃ），１４３ （４－ＣＨ），１２９（１１－ＣＨ），１２７（１０－ＣＨ），１２２ （１３－ＣＨ），１２３（１２－ＣＨ），１６４（２－Ｃ），
关于 皮酮和白鲜碱的农药活性，Ｌｉｕ 曾报道了白 鲜皮提取物中 皮酮和白鲜碱对两种仓储害虫具有拒食 作用［１０］；关于杀菌活性仅 Ｚｈａｏ 等曾报道在作硅胶薄板层 析时，直接在层析板上定性地测定过这两个化合物对黄 瓜黑星病菌有抑菌活性［ １ １ ］ 。本文采用杀菌活性追踪法， 首次系统地研究了白鲜皮中的杀菌活性成分，从中分离 鉴定出 皮酮和白鲜碱是其主要杀菌活性成分。 皮酮和 白鲜碱的杀菌活性虽然较常用杀菌剂低 １ ￣ ２ 个数量级， 显然不能将其直接开发为杀菌剂，但这两个化合物的骨 架结构并不复杂，如能以这两个化合物为先导化合物， 进行先导优化，有可能筛选出具有很高商业化潜力的活 性化合物。
１５６（７－Ｃ），１４５（９－Ｃ）。与文献报道的ｄｉｃｔａｍｎｉｎｅ［１２－１３］ 的核磁
波谱数据完全一致，故鉴定 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ ２ 为白鲜碱。结构
见图 ２ 。
从表 ２ 可以看出二级柱层析的馏分 １－３、３－４ 为杀菌 活性馏分，其菌丝生长抑制率分别为 ９ ３ ． ７ ％ 、９ ６ ． ６ ％ 。
表２ 二级柱层析分离各馏分的抑菌活性
从表 ３ 的试验数据回归出 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ １ 对玉米弯孢病
菌和烟草赤星病菌的毒力方程为ｙ＝０．７３Biblioteka Baidu６＋２．０４１９ｘ及
ｙ＝１．９６８５＋１．６７７１ｘ，求出抑制中浓度 ＥＣ５０（µg/mL）分别为 １２３．３ 和 ６４．２。
同样回归出 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ ２ 对玉米弯孢病菌和烟草赤星病
：ｐｐｍ）： ０．８６（３Ｈ，ｓ，１１－ＣＨ ），２．１４ ３
（３Ｈ，ｓ，１０－ＣＨ３），４．８９（１Ｈ，ｓ，３－Ｈ），６．３５（１Ｈ，ｓ，１５－Ｈ），７．４５（１Ｈ，ｓ，
１５－Ｈ）， ７．４８（１Ｈ．ｓ，１３－Ｈ），１．４５，１．８６（４Ｈ，ｍ，５－Ｈ，６－Ｈ），２．２６（２Ｈ，
ｍ，７－Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ δ ：ｐｐｍ）： １６９（１－Ｃ＝Ｏ）， １４８（９－Ｃ），１４３（１６－ＣＨ），１３９（１３－ＣＨ），１２７（８－Ｃ），１２０（１４－Ｃ），１０８
Ｗ Ｍ Ｌ － ０ １ 和 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ ２ ，经 １Ｈ Ｎ Ｍ Ｒ 和 １３Ｃ Ｎ Ｍ Ｒ 鉴定分别为 皮酮和白鲜碱。可有效抑制玉米弯孢病菌和烟
草赤星病菌孢子的萌发。
皮酮对烟草赤星病菌的
ＥＣ ５０
值为
６４．２µg/mL，对玉米弯孢病菌的
ＥＣ ５０
值为
１２３．３µg/mL；
白鲜碱对玉米弯孢病菌的 ＥＣ５０ 值为 ４６．６µg/mL，对烟草赤星病菌的 ＥＣ５０ 值为 ９１．７µg/mL。
（１５－ＣＨ），８３（３－ＣＨ），４３（４－Ｃ），３２（５－ＣＨ２），３１（７－ＣＨ２）２０（１０－ＣＨ３）， １８．３（１１－ＣＨ３），１８．２（６－ＣＨ２）。与文献报道的ｆｒａｘｉｎｅｌｌｏｎｅ［１０，１２］ 的核磁波谱数据完全一致，故鉴定 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ １ 为 皮酮，
结构见图 １ 。
Ｗ Ｍ Ｌ － ０ ２ 无色棒状结晶：熔点：１ ２ ９ ℃￣ １ ３ １ ℃。
参考文献：
［１］ 江苏医学院编． 中药大辞典（上册）［Ｍ］． 上海： 上海人民出版社， １９７７： ７３７－７３８．
１ 材料与方法
１．１ 材料
植物材料：白鲜皮（Ｄｉｃｔａｍｎｕｓ ｄａｓｙｃａｒｐｕｓ Ｔｕｒｃｚ）， 购自太白县生药联诊所。供试病原菌：玉米弯孢病菌 （Ｃｕｒｖｕｌａｖｉａ ｌｕｎａｔａ）、苹果腐烂病菌（Ｖａｌｓａ ｍａｌｉ）、烟草 赤星病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｏｎｇｉｐｅｓ），由西北农林科技大学植
第 ４５ 卷第 １１ 期 ２００６ 年 １１ 月
科技与开发－
农药 Agrochemicals
Vol. 45, No. 11 Nov. 2006
白鲜皮杀菌活性成分的研究
王麦玲，张继文，钱 勇，李君浩，姬志勤
（西北农林科技大学 农药研究所，陕西 杨陵 ７１２１００）
摘要：在活性追踪指导下，通过多次硅胶柱层析从白鲜皮石油醚提取物中分离得到两个具有杀菌活性化合物
白鲜（Ｄｉｃｔａｍｎｕｓ ｄａｓｙｃａｒｐｕｓ Ｔｕｒｃｚ）为芸香科白鲜属植 物保护学院植物病理研究室提供。主要仪器：Ｂ ｒ ｕ ｋ ｅ ｒ 物。生长于山坡丛林中，我国辽宁、河北、安徽、陕 ＡＭ－４００ 核磁共振谱仪，Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ２４１ＭＣ 旋光仪，Ｘ－４
西、甘肃等省均有分布［ １ ］ 。白鲜的干燥根皮即为传统中 药白鲜皮，具有清热燥湿、祛风解毒、抗菌抗癌的作 用。临床上用于治疗湿热疮毒、黄水淋漓、湿疹等， 并对心血管及血液病有一定的疗效［ 。 ２－３］
２ 结果与分析 ２．１ 杀菌活性成分的分离
以苹果腐烂病原菌作为杀菌活性追踪指示菌，采用菌 丝生长速率法，追踪杀菌成分的分离，结果见表 １ 、２ 。
表１ 一级柱层析分离各馏分的抑菌活性
注：“－”表示样品对菌丝生长有刺激作用 。
从表 １ 可以看出，一级柱层析的 ６ 个馏分中，馏分 １ 和馏分 ３ 的菌丝生长抑制率分别为 ８６．４％ 和 ９１．７％，远 高于其它 ４ 个馏分，说明馏分 １ 和馏分 ３ 为杀菌活性馏 分，对它们进一步做杀菌活性成分分离。
菌的毒力方程为ｙ＝１．９５８３＋１．８２３０ｘ及ｙ＝０．０３３３＋２．５６４８ｘ，求
出抑制中浓度 ＥＣ５０（µg/mL）分别为 ４６．６ 和 ９１．７。
２．３ 活性成分结构鉴定
Ｗ Ｍ Ｌ － ０ １ 白色针状结晶：熔点：１ ２ １ ℃￣ １ ２ ３ ℃。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ δ
２．２ 杀菌成分的毒力
以玉米弯孢病原菌和烟草赤星病原菌为供试菌，测 定了杀菌成分 ＷＭＬ－０１ 和 ＷＭＬ－０２ 对孢子萌发的抑制情 况，结果见表 ３ 。
图１ 皮酮的分子结构 图２ 白鲜碱的分子结构
第 １１ 期
王麦玲，等：白鲜皮杀菌活性成分的研究
７４１
３ 讨论
型数字显示显微熔点测定仪。
１．２ 实验方法
１．２．１ 杀菌活性测定 （１）菌丝生长速率法 用少量丙酮将待测样品溶解，加无菌水稀释至预定浓
度，取 ５mL 与灭菌的定量 ＰＤＡ 培养基混合后，倒入直径 为 ９ ｃ ｍ 培养皿内制成带毒培养基，各浓度重复 ３ 次，以 丙酮为对照。用直径为 ６ ｍ ｍ 的打孔器在培养好的供试病 原真菌菌落边缘切下菌饼反接于培养皿内，２ ５ ℃培养 ３ ￣ ４ ｄ ，用十字交叉法测量菌落扩展直径，求出菌丝生长 抑制率［８］。
白鲜皮主要含有白鲜碱、β－ 谷甾醇、黄柏酮、岑酮、 柠檬苦素及其衍生物和忒文等［４－５］。国外学者报道其具有解 热、健胃、抗肿瘤、引起昆虫拒食等作用［ ６ ］ 。我国学者 报道了该植物的乙醇提取物对蟋蟀、蚂蚱和粘虫均表现出 显著毒杀活性，对粘虫也具有一定的拒食活性［７］ 。笔者 在植物源杀菌活性筛选中发现白鲜皮提取物具有明显的杀 菌活性，并在活性追踪指引下，从白鲜皮的石油醚提取 物中分离出两个杀菌活性成分 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ １ 和 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ ２ ，经 １Ｈ ＮＭＲ 和 １３Ｃ ＮＭＲ 鉴定其结构分别为 皮酮和白鲜碱。
(Institute of Pesticide, Northwest A&F University, Yangling 712100, Shanxi, China)
Abstract: Two fungicidal compounds were isolated from Dictamnus dasycarpus Turcz by the bioactivity guided
热回流提取 ３ ｈ ，过滤，残渣中加入 ４ Ｌ 石油醚，热回
收稿日期：２００６－０４－０５ 基金项目：８６３ 高技术研究发展计划（２００２ＡＡ２４５１２１） 作者简介：王麦玲（ １ ９ ７ ８ － ） ，女，汉族，陕西渭南人，在读硕士研究生，主要从事天然产物分离研究。Ｅ － ｍ ａ ｉ ｌ ：ｗ ｏ ｓ ｈ ｉ ｍ ａ ｉ ｌ ｉ ｎ ｇ ＠ １ ６ ３ ． ｃ ｏ ｍ 。 通讯作者：姬志勤，电话：０２９－８７０９２１９１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉｚｈｉｑｉｎ＠１６３．ｃｏｍ。
关键词：白鲜皮；杀菌活性
中图分类号：ＴＱ４５０．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：1006-0413(2006)11-0739-03
The study on fungicidal activity of Dictamnus dasycarpus
WANG Mai-ling, ZHANG Ji-wen, QIAN Yong, LI Jun-hao, Ji Zhi-qin
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚδ：ｐｐｍ）： ４．４（３Ｈ，ｓ，１４－ＣＨ３），７．１（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝５．６Ｈｚ，５－Ｈ），７．６（１Ｈ，ｄ， Ｊ＝５．６Ｈｚ，４－Ｈ），８．２６（１Ｈ，ｄ， Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１３－Ｈ），
８．０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，１０－Ｈ），７．６８（１Ｈ，ｄｄ， Ｊ＝１６．８Ｈｚ， Ｊ＝１４Ｈｚ，１２－Ｈ），
（２）抑制孢子萌发法 将样品的丙酮溶液 １０µL 滴加在凹玻片上，待溶剂挥 发形成药膜后再滴加 ５µL 病原菌孢子悬浮液，以甲醇为 对照，在 ２６℃￣２８℃条件下保湿培养 １０￣１２ｈ，统计孢子 萌发率［ ９ ］ 。
１．２．２ 活性成分提取 取 ３．０ｋｇ白鲜皮粉，加入６Ｌ 石油醚（ｂ．ｐ． ６０℃￣９０℃）
７４０
农 药 Agrochemicals
第 ４５ 卷
流提取 ２ ｈ，过滤。合并滤液，蒸去溶剂得浸膏 ４８．０ｇ 。
表 ３ ＷＭＬ－０１ 和 ＷＭＬ－０２ 抑制孢子萌发的结果
１．２．３ 活性成分的分离 取 ４８．０ｇ 浸膏做柱层析（２００￣３００ 目硅胶，１２０ｃｍ ×
５ｃｍ，干法上样）。依次以 １５００ｍＬ 石油醚 － 氯仿（体积比 分别为 ７ ∶１ 、５ ∶１ 、３ ∶１ 、１ ∶１ ） 、乙酸乙酯及甲 醇洗脱，得 ６ 个一级柱层析馏分（馏分 １￣ 馏分 ６）。取馏 分 １（５．１ｇ）进一步做柱层析分离（２００￣３００ 目硅胶，１００ｃｍ × ３ｃｍ，干法上样）。以石油醚 － 乙酸乙酯（体积比为 ３∶１） 洗脱，每 ２００ｍＬ 收集 １ 份。除去溶剂得馏分 １－１￣ 馏分 １ － ６ ，将馏分 １ － ３ （ 粗结晶） 重结晶得化合物 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ １ （６００ｍｇ）。取馏分３（２．８ｇ）进一步做柱层析分离（２００￣３００目 硅胶，６ ０ ｃ ｍ × ３ ｃ ｍ ，干法上样） 。以石油醚 － 乙酸乙 酯（ 体积比为 ５ ∶１） 洗脱，每 ２００ｍＬ 收集 １ 份。除去溶 剂得馏分 ３－１~ 馏分 ３－４，将馏分 ３－４（粗结晶）重结晶得化 合物 ＷＭＬ－０２（１４３ｍｇ） 。
７．４４（１Ｈ，ｄｄ， Ｊ＝１６．４Ｈｚ， Ｊ＝１４Ｈｚ，１１－Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３， １００ＭＨｚ δ：ｐｐｍ）： ５９（１４－ＣＨ３），１０３（８－Ｃ），１０４（５－ＣＨ），１１８（６－Ｃ），１４３ （４－ＣＨ），１２９（１１－ＣＨ），１２７（１０－ＣＨ），１２２ （１３－ＣＨ），１２３（１２－ＣＨ），１６４（２－Ｃ），
关于 皮酮和白鲜碱的农药活性，Ｌｉｕ 曾报道了白 鲜皮提取物中 皮酮和白鲜碱对两种仓储害虫具有拒食 作用［１０］；关于杀菌活性仅 Ｚｈａｏ 等曾报道在作硅胶薄板层 析时，直接在层析板上定性地测定过这两个化合物对黄 瓜黑星病菌有抑菌活性［ １ １ ］ 。本文采用杀菌活性追踪法， 首次系统地研究了白鲜皮中的杀菌活性成分，从中分离 鉴定出 皮酮和白鲜碱是其主要杀菌活性成分。 皮酮和 白鲜碱的杀菌活性虽然较常用杀菌剂低 １ ￣ ２ 个数量级， 显然不能将其直接开发为杀菌剂，但这两个化合物的骨 架结构并不复杂，如能以这两个化合物为先导化合物， 进行先导优化，有可能筛选出具有很高商业化潜力的活 性化合物。
１５６（７－Ｃ），１４５（９－Ｃ）。与文献报道的ｄｉｃｔａｍｎｉｎｅ［１２－１３］ 的核磁
波谱数据完全一致，故鉴定 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ ２ 为白鲜碱。结构
见图 ２ 。
从表 ２ 可以看出二级柱层析的馏分 １－３、３－４ 为杀菌 活性馏分，其菌丝生长抑制率分别为 ９ ３ ． ７ ％ 、９ ６ ． ６ ％ 。
表２ 二级柱层析分离各馏分的抑菌活性
从表 ３ 的试验数据回归出 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ １ 对玉米弯孢病
菌和烟草赤星病菌的毒力方程为ｙ＝０．７３Biblioteka Baidu６＋２．０４１９ｘ及
ｙ＝１．９６８５＋１．６７７１ｘ，求出抑制中浓度 ＥＣ５０（µg/mL）分别为 １２３．３ 和 ６４．２。
同样回归出 Ｗ Ｍ Ｌ － ０ ２ 对玉米弯孢病菌和烟草赤星病