第8章对氨基苯甲酸酯类药物分析(2012)

苯佐卡因、盐酸普鲁卡因鉴别方法： 本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录III）

取供试品约50mg，加稀盐酸1ml，必要时缓缓 煮沸使溶解，放冷，加0.1mol/L亚硝酸钠溶液 数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，视供试品不 同，生成由橙黄到猩红色沉淀。
NH2 + NaNO2 + 2HCl COOCH2CH2N(C2H5)2
2.水解特性：对氨基苯甲酸酯类分子结构中的 酯键易水解，除盐酸丁卡因水解产物为对丁基 苯甲酸外，其余均为对氨基苯甲酸(PABA)。
3. 弱碱性：该类药物分子结构中含有脂烃胺侧 链为叔胺氮原子，具有一定碱性，可成盐；可 与生物碱沉淀剂发生沉淀反应，可相互区别。
4.与金属离子发生沉淀反应：利多卡因和布比 卡因分子结构中酰氨基上氮可与Cu2+或Co2+络 合，生成有色配位化合物沉淀。
N2+Cl
_
+ NaCl + 2H2O COOCH2CH2N(C2H5)2
HO
_ + N2 Cl
N N OH + + NaOH
+ NaCl + H2O COOCH2CH2N(C2H5)2
COOCH2CH2N(C2H5)2
猩红或红色
二、与金属离子反应
1. 盐酸利多卡因的鉴别方法
（与铜离子反应）
CH3 2 NHCOCH2N(C2H5)2 + Cu++ CH3 CH3 NHCOCH2N(C2H5)2 CH3 Cu CH3
第八章 对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻 药物的分析
药物分析教研室
辽宁医学院药学院
本章内容
分类与 典型药物 鉴别试验 理化特征
杂质检查
含量测定
化学结构：

1.亲脂性芳香环
2.中间连接功能基
对氨基苯甲酸酯类

3.亲水性胺基
酰苯胺类
第一节
对氨基苯甲酸酯和酰苯胺 类药物的结构与性质

一、对氨基苯甲酸酯类基本结构与典型 药物
2.苯佐卡因的鉴别 方法（ChP2010）
取本品约0.1g，加氢氧化钠试液5m1，煮沸，即 有乙醇生成；加碘试液，加热，即生成黄色沉 淀，并发生碘仿的臭气。
H2N COOC2H5 + NaOH
H2N COONa + C2H5OH
C2H5OH + 4I2 + 6NaOH
CHI3
+ 5NaI + HCOONa + 5H2O
5.吸收光谱特性：含有苯环及取代基，具有特
征的紫外光谱与红外光谱行为。 6. 其它特性：因结构中有 芳伯氨基或同时具 有脂烃胺侧链，其游离碱多为碱型油状液体 或低熔点固体，难溶于水，可溶于有机溶剂。 其盐酸盐则易溶于水。
第二节 鉴别试验
一、重氮化—偶合反应
分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的 药物，均可发生此反应。
第三节
特殊杂质与检查
一、盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查 杂质来源：分子结构中含有酯键，可发生水 解。注射液制备过程中受灭菌温度、时间、 溶液pH、贮藏时间以及光线和金属离子影响， 易水解。
H2N COOCH2CH2N(C2H5)2 H 2N COOH + HOCH2CH2N(C2H5)2
（为什么要检查？）
四、制备衍生物测熔点
盐酸丁卡因： 取本品0.1g，加5%醋酸钠溶液10ml溶解后， 加25%硫氰酸铵溶液1ml，析出白色结晶；滤 过，结晶用水洗涤后，在80 ℃干燥，熔点为 131℃。
五、吸收光谱特征
1.紫外吸收光谱：分子结构中含有苯环
2.红外吸收光谱：利用化合物结构中特殊基团的 振动和转动等红外活性振动产生的红外吸收峰 对药物进行鉴别的方法。
杂质来源：在生产和贮藏过程中，其注射液在 一定的灭菌时间、温度和pH条件下，更易发 生水解反应，生成4-氨基-2-氯苯甲酸降解产物。 检查方法（USP34-NF29）：HPLC 限量： 4-氨基-2-氯苯甲酸≦0.625% 4-氨基-2-氯苯甲酸注射液≦3.0%
三、盐酸利多卡因注射液中2，6-二甲基 苯胺及其他杂质的检查
CH3 NHCO CH3
C4H9 N HCl
盐酸布比卡因（bupivacaine hydrochloride ）
CH3 H N CH3 O N C3H7 .HCl
盐酸罗哌卡因
三、主要理化性质
1.芳伯氨基特性：对氨基苯甲酸酯类结构中 有芳伯氨基，发生重氮化-偶合；与芳醛缩合； 易氧化变色。盐酸丁卡因无此特性。酰苯胺类 分子结构中含有芳酰氨基，酸水解后显芳伯氨 基的特性反应。注意空间位阻的影响。
3.测定的主要条件 (1)加入适量的溴化钾加快反应速度：
重氮化反应机制：
NaNO2 + HCl HNO2 + HCl
Ar NH2
快
HNO2 + NaCl NOCl + H2O
-
NO Cl 慢
+
Ar
NH NO
快
（第一步）
Ar
N N OH
Ar
N2+Cl-
反应速度取决于：溶液中芳伯氨基的浓度和NO+ 的浓度
密称定，置烧杯中，除另有规定外，可加水 40ml与盐酸溶液（1→2）15ml，置电磁搅拌器 上，搅拌使溶液，再加溴化钾2g，插入铂-铂电 极后，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，用 亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L或0.05mol/L）迅速 滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的 尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入 溶液中，继续缓缓滴定，至电流计指针突然偏 转，并不再回复，即为滴定终点。

含量测定
一、亚硝酸钠滴定法
本类药物分子结构中具有芳伯氨基或水解后具 有芳伯氨基，在酸性溶液中可与亚硝酸钠反应， 可用亚硝酸钠滴定法测定含量。
NHCOR + H2O
H △
+
NH2 + RCOOH

ChP2010中的苯佐卡因、盐酸普鲁卡因和注 射用盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺及其 片剂与注射剂，可直接采用本法测定含量。

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二、盐酸氯普鲁卡因注射液中有关物质 和光解产物的检查
H2N Cl COOCH2CH2N(C 2H5)2 . HCl
1.基本原理：芳伯氨基或水解后具有芳伯氨基，
在酸性溶液中与亚硝酸钠定量发生重氮化反 应，生成重氮盐，可用永停滴定法指示反应 终点。
Ar
NHCOR + H2O
NH2 + NaNO2 + 2HCl
H
+
Ar
Ar
NH2 + RCOOH
N2+Cl- + NaCl + 2H2O
Ar
2.滴定法（ChP2010）：取供试品适量，精

Ar
N2+Cl- + H2N Ar
Ar
N N NH Ar + HCl
偶氮氨基化合物

芳胺与盐酸摩尔比1：2.5～6
(3)反应温度：
温度过高，可使亚硝酸逸失，并可使重氮 盐分解： Ar—N2+Cl-+H2O→Ar—OH+N2↑+HCl 滴定应在室温（10－30℃）条件下滴定，
其中15℃以下结果准确。

(2) 外指示剂法 用KI-淀粉指示剂指示终点的原理： 2NaNO2 +2KI+4HCl 2NO+I2 +2KCl+ 2NaCl + 2H2O
(3)电位法：Pt-饱和甘汞电极 (4)内指示剂法：中性红，蓝紫色→纯 蓝色

例：盐酸普鲁卡因含量测定方法（ChP2010）
取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法， 在15－25℃，用亚硝酸钠滴定液 （0.1mol/L）滴定。每1ml亚硝酸钠滴定 液（ 0.1mol/L）相当于27.28mg的 C13H20N2O2· HCl。
(C2H5)2NCH2CONH
蓝紫色 转入氯仿中显黄色
CH3

方法（ChP2010） [鉴别]取本品0.2g，加水20ml溶解 取溶液2ml，加硫酸铜试液0.2ml与碳酸 钠试液1ml，即显蓝紫色；加三氯甲烷 2ml，振摇后放置，三氯甲烷层显黄色。
（与钴离子反应）
CH3 NHCOCH2N(C2H5)2 + CoCl2 CH3
计算：精密称取盐酸普鲁卡因0.5207g，按 永停滴定法,在15～25℃用亚硝酸钠滴定液 （0.1022mol/L）滴定到终点，用去亚硝酸 钠滴定液18.52ml.已知,每1ml亚硝酸钠滴 定液（0.1mol/L）相当于27.28mg的盐酸普 鲁卡因。求盐酸普鲁卡因的百分含量？
CH3 NCOCH2N(C2H5)2 CH3 CH3 (C2H5)2NCH2CON Co CH3 + 2HCl
亮绿色细小钴盐沉淀


盐酸利多可因加硝酸酸化，加硝酸汞，加 热，显黄色。 对氨基苯甲酸酯类显红色或橙黄色。
2. 盐酸普鲁卡因胺的鉴别方法
基于普鲁卡因胺分子中的芳酰胺结构。
H 2N CONHCH 2CH 2N(C 2H 5)2 + H 2O2
加入溴化钾（ChP2010规定加入2g）
KBr + HCl
HNO2 + HBr HNO2 + HCl
HBr + KCl
NOBr + H2O NOCl + H2O
KHBr KHCl
∵ KHBr 比KHCl大300倍 ∴生成NOBr量大得多 ∴加快重氮化反应速度
(2)加过量盐酸加速反应： 因胺类药物盐酸盐溶解度﹥硫酸盐 ①重氮化反应速度加快 ②重氮盐在酸性溶液中稳定 ③防止生成偶氮氨基化合物
H2N COOH -CO2 H2N
O
O
ChP2010规定盐酸普鲁卡因及其注射液以及注射 用盐酸普鲁卡因均需要检查对氨基苯甲酸。
检查方法（ChP2010）：HPLC 限量:盐酸普鲁卡因原料药以及注射用灭菌粉末

中对氨基苯甲酸不得超过0.5%。

盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸不得超过 1.2%。
H2N
COOCH2CH2N(C2H5)2
普鲁卡因
油状物
蒸气
湿润红色石蕊试纸变蓝
NaOH H2N COONa + HOCH2CH2N(C2H5)2
对氨基苯甲酸钠
H2N
+HCl
HCl
+过量HCl 溶解 白色↓
H2N COOH
COONa
HCl
HCl H2N
COOH

方法（ChP2010） 取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10％ 氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；加 热，变为油状物；继续加热，产生的蒸 气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色； 热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化， 即析出白色沉淀。
(4)滴定速度：
滴定速度不宜太快。为了避免滴定过 程中亚硝酸挥发和分解，滴定时宜将 滴定管尖端插入液面下约2/3处滴定， 一次将大部分亚硝酸钠滴定液在搅拌 条件下迅速加入，后将滴定管尖端提 出液面，用少量水淋洗，再缓缓滴定。 “先快后慢”
4.指示终点的方法
(1)永停滴定法：ChP2010全部采用该法。 永停滴定仪
O R1HN C OR2
H2N
COOC2H5
苯佐卡因（benzocaine）
[CH3(CH2)3NH
COOCH2CH2N(CH3)2] HCl
盐酸丁卡因（tetracaine hydrochloride）
[ H2N
COOCH2CH2N(C2H5)2] HCl
盐酸普鲁卡因（procaine hydrochloride）
NHCOCH2N(C2H5)2 H3C CH3 HCl H2O
NH2 H3C CH3
杂质来源：生产和贮藏 过程中水解。

检查方法（ChP2010）：HPLC
限量： 2，6-二甲基苯胺≦0.04% 其他各杂质≦1.0%
第四节
亚硝酸钠滴定法 非水溶液滴定法 紫外分光光度法 高效液相色谱法
HCl NH2 NaNO 2
Ar
重氮盐
橙黄～猩红色
OH萘酚
直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、 盐酸普 鲁卡因胺。 丁卡因虽无芳伯氨基，但可与NaNO2反应生成 N－亚硝基化合物的乳白色沉淀。
NHC4H9 + HNO2 COOCH2CH2(C2H5)2
C4H9N-NO + H2O COOCH2CH2(C2H5)2 乳白色
H2N
CONCH2CH2N(C 2H5)2 + H2O OH
FeCl3
H 2N
CONCH 2CH 2N(C 2H 5)2 O
Fe + 3 HCl
3
紫红色
暗棕色
棕黑色
三、水解产物反应 1.盐酸普鲁卡因的鉴别
盐酸普鲁卡因+NaOH→白色↓（普鲁卡因）
H2N COOCH2CH2N(C2H5)2 HCl
NaOH
[N2H CONHCH2CH2N(C2H5)2] HCl
盐酸普鲁卡因胺
（procainamide hydrochloride）
二、酰苯胺类药物的基本结构与典 型药物
基本结构
R3 NH C R4 O R2
R1
NHCOCH2N(C2H5)2 H3C CH3 HCl H2O
盐酸利多卡因（lidocaine hydrochloride ）