BIOENGINE精斑试纸条使用灵敏度以及特异性的研究(校订版)
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（三）女性生理周期所产生的分泌液斑所得到的检测结果 通过对 2 名阴道分泌液斑呈现阳性的女志愿者的黄体期、排 卵期和滤泡期进行检测发现，只有 10 分钟观察黄体期的阴道分 泌液斑呈现阳性，其余各个时期以及 5 分钟和 10 分钟观察都是 阴性。 （四）汗液斑所得到的检测结果 通过对 10 名男性志愿者所提供的汗液斑检测所得到的结果 都是质控线出现红色，呈现阴性特征。 （五）尿液斑所得到的检测结果 通过对 8 名女性志愿者和 10 名男性志愿者所提供的尿液斑 检测所得到的结果都是质控线出现红色，呈现阴性特征。 （六）唾液斑所得到的检测结果 通过对 10 名男性志愿者所提供的唾液斑检测所得到的结果 都是质控线出现红色，呈现阴性特征。 （七）对于患有多囊卵巢综合症的女性阴道分泌液斑所得到 的检测结果 通过对 10 例患有多囊卵巢综合症并且并未去进行治疗的患 者所提供的阴道分泌液斑所得到的结果是其中有 2 例检测线和 质控线双线上都出现红色，呈现阳性特征。 （八）对于人的精液以及动物精液所得到的检测结果 通过对 1 例猪精液和 1 例鸡精液检测所得到的检测结果是 都显示质控线出现红色，呈现阴性特征。而把人的精液按照 1： 10000 的比例进行稀释，所得到的检测结果显示质控线出现红色， 呈现阴性特征，但在显示的时候只是 1-2 分钟质控线出现之后才 出现，所以有着十分明显的时间显色延迟现象。而质控线与检测 线两者相似的色度在 10 分钟的时间观察到。把人的精液按照 1： 1000 的比例进行稀释之后还可以检测出来精子，按照比例一直 稀释到 1：10000 的比例依然可以偶然的检测出来少量的精子存
8 例阴道分泌液斑和 20 例阴道拭取样本均仅仅在（Ｃ）区域质控 线上呈现红色，也就判断为阴性，10 分钟之后再对两种样本的检 测结果发现，20 例阴道拭取样本其中有 4 例以及 8 例阴道分泌 液斑有 4 例均在检测线和质控线双线上呈现红色，也就判断为阳 性。
（二）对 10 分钟后读取为阳性的 8 例样本进行稀释后所得到 的检测结果
作者简介：李慧，贵州省贵阳市公安局花溪分局；姚亚飞，贵阳市公安局花溪分局刑侦大队。
中图分类号：D920.4
文献标识码：A
文章编号：1009-0592(2012)03-258-02
一、材料和方法 （一）材料 抗原胶体金免疫试纸条选用的是美国 BIOENGINE，选取的 样品是从一周内无性生活的女性志愿者用阴道棉签拭取 20 支， 从 8 名未婚女性志愿者提取阴道分泌液斑和尿液斑，从 10 名男 性志愿者提取尿液斑、汗液斑以及唾液斑。由贵阳医学院检验科 提供人精液样本 2 份，贵阳医学院生殖中心提供多囊卵巢综合症 患者阴道分泌液斑 10 份，由贵州农业大学提供 2 份鸡和猪的精 液样本。 （二）方法 1．样品的制备 在进行样品的制备过程中，分别使用 300 L 的生理盐水浸泡 规格为 10mm×10mm 的汗液斑、尿液斑、唾液斑和尿道液斑以及 规格为 10mm×10mm×10mm 阴道拭取样本过夜，在此基础上，这 以上所有试剂中分别吸取 100 L 各自浸泡液用生理盐水按照 1： 100、1:50、1:10、1:5、1:2 以及 1:1 的比例进行稀释，再取人精液含 量为 1 L 按照 1：100000、1:10000、1:1000、1:100、1:10 的比例进 行稀释。 2．精斑试纸条的使用判定 对于精斑试纸条的使用详情可见使用说明书，上面对使用方 法操作进行详细的叙述，通常来说使用经本试纸条去检查进行结 果的观察都是分为 5 分钟和 10 分钟这两个时间段，当对比颜色 发现试纸条上面只是质控线出现红色的情况则判定为阴性，而当 出现红色在检测线和质控线双线上的时候则判断为阳性，当显示 的结果检测线为淡红色和质控线为红色则判断为弱阳性。 3．精子检查所采用的办法 精液是睾丸生成的精子和前列腺、精囊和尿道球腺分泌液的 混合物，具有特殊的气味，因附着物不同形态也不同，在暗色布质 上，精斑浓厚时，呈灰白色，似浆糊状，稀薄时不易察见；在白色布 质上，呈黄白色，边缘较中间明显；以手触之有硬感。用放大镜观 察，可在表面或布纤维中见黄白色鳞状小片。对发现的可疑斑 痕，应首先进行预试验，其方法有以下几种：
8 例样本按照 1：1 的比例进行稀释后，5 分钟读取只是质控 线呈现红色，判别为阴性，10 分钟读取检测线为淡红色和质控线 为红色，判断为弱阳性；按照 1：2 的比例进行稀释后，5 分钟读取 只是质控线呈现红色，判别为阴性，10 分钟读取检测线为淡红色 和质控线为红色，判断为弱阳性；按照 1：5 的比例进行稀释后，5 分钟和 10 分钟读取质控线呈现红色，均判别为阴性；之后的比例 稀释均呈现阴性。对于这 8 例样本进行精子涂片 HE 染色法检 测均为发现有精子检测出。
参考文献： [1]公安部第二研究所编写组编写．法医物证检验技术及应用．人民法院出版社．1997． [2]张琼予，丁梅，王保捷，庞灏，贺薇．DNA 提取自动化工作站在法医学领域的应用．中 国法医学杂志．2010(1)． [3]李红霞，陈晓晖．精斑检材的 3 种提取方法比较．中国法医学杂志．2007(5)． [4]杨思思，贾晓杰．精斑试纸在水中高腐尸体应用失效 1 例．山西职工医学院学报．2011 (3)． [5]Bahceci M,Bilge M,Tuzcu A,et al.Serum prostate specific antigen levels in women with polycystic ovary syndrome and the effect of flutamide + desogestrel/ethinyl estradiol combination. 2004．
（1）紫外线检查。精斑在紫外线下呈银白色荧光，周围较深， 带紫蓝色边缘。经水洗涤残留于布质纤维中的精斑，在紫外线下 仍可见点状荧光，借此可以发现精斑所在的部位。人体其他分泌 物的斑痕，如汗液斑、尿斑、阴道分泌物、乳汁、鼻涕等，以及肥皂、 浆糊斑、某些药物、化学纤维制品，在紫外线—F—也可显现与精 斑相类似的荧光。因此，在紫外线下出现银白色荧光，不是精斑 的特异性反应，不能作为确定精斑的根据。
（3）酸性磷酸酶检验。精液中含有前列腺液，有大量酸性磷 酸酶，对可疑斑迹进行检测，可作为精斑的预试验。精液中的酸 性磷酸酶．在合适的温度环境与酸性溶液中，可分解磷酸苯二钠， 释放出酚。酚经氧化剂铁氰化钾的作用，与氨基安替比林结合， 产生红色酮类化合物，随检材中精斑的不同浓度而呈深浅不同的 红色，浓度过高，可出现红色沉淀；阴性反应为橙黄色。精液稀释 至 2 万倍，仍可呈阳性反应。
（2）碘化碘钾结晶试验。精斑中卵磷脂逐渐析出胆碱，胆碱 遇碘则形成过碘胆碱结晶。剪取可疑斑痕少许，置于玻片上，加 试剂（碘化钾 1．65 克、碘 2．54 克、加水 30 毫升）1-2 滴加盖玻片 镜检，初见褐色颗粒，逐渐演变成针状结晶，然后则为褐色菱形结 晶，结晶不稳定，于生成后 1-3 小时可消失。此结晶并非精斑特 异性反应，凡含有胆碱的物质（阴道粘液、子宫分泌物、脓液、鼻 涕、唾液以及肝、肾等脏器）也可形成结晶。因此，检见结晶只能 推断是精斑的可能，而不能确定就是精斑。
பைடு நூலகம்
求等诸多优势而在日常精斑确证试验中在法医学的实际检案上。在实际检测过程中，很可能会出现精子检测不到或者是
男性的 DNA 不能进行扩增情况的发生，为对此种办法的灵敏度和特异性进行验证和比较，本文特对此课题做一探讨，相信
本文能够对相关课题研究起到抛砖引玉的作用。
关键词 精子检测 男性 DNA 扩增 精斑试纸条
这种方法具有简便、灵敏、迅速和不破坏检材的完整性等优 点。但特异性较差，酸性磷酸酶除存在于前列腺外，还广泛分布 在人体血液、阴道分泌物、唾液、尿液以及胰、脾等脏器内。利用 精液所含酸性磷酸酶浓度显著高于其他体液的特点 6，还可作精 液检验的确证试验，如果酸性磷酸酶浓度大于 300 单位／毫升， 可推定为精斑，大于 500 单位／毫升，可靠性更大。
在。 2.9STR 检测 通过对 8 例在进程检测出 10 分钟时间段为阳性的女性样本
使用 Amelogenin 基因均只检出 X 基因峰，剩余的常染色体 STR 的锋速都不大于 2。
三、讨论 精斑试纸条其是通过免疫学技术来对精液中的前列腺特异 抗原进行检测，在本试验过程中，根据所使用的精斑试纸条说明 书显示灵敏度在两千至三千范围，从这可以看出，由于厂家的不 同，所生产出来的产品在灵敏度上也存在着差异性。本试验将精 液浓度稀释到 100000 倍的话，依然呈现出阳性反应的特征，从这 也可以显示出精斑试纸条具备十分高的敏感度。 从临床上来看，在进行前列腺炎以及前列腺癌症患者的血清 中进行 PSA 水平的检测通常都是用到精斑试纸条。精斑特别是 微量陈旧检材确证的最有效办法之一就是进行前列腺特异抗原 检测。根据本试验过程中对所搜集到的汗液斑、唾液斑以及尿液 斑进行检测发现均呈现出阴性特征，从这就体现出所选用做试验 的精斑试纸条具备器官差异性并且不受到体液的影响。而通过 鸡和猪这两种动物精液样本的收集经过精斑试纸条检测发现结 果呈现出阴性特征，这也就反映出精斑试纸条具备一定程度的种 属特异性特征。 由于在进行本次试验的时候所采用的 20 例阴道拭取样本其 中有 4 例出现阳性反应。PSA 这是精液中的蛋白成分而存在，与 各种各样的酶相比，其所受到的外界干扰影响小得多，所以这也 可以看出其具备良好的稳定性，PSA 在性交后精液和阴道液两者 混合到一起之后还能够存在很长的一段时间，所以对一周时间内 无性生活女性提取阴道液，但这 2 例阳性反应者也不能够排除掉 是之前所残存的微量 PSA 存在，或者是之前服用过避孕药，或者 是在进行治疗的时候使用激素类的药品。通过对 8 例未婚女性 阴道分泌物中出现 4 例阳性的情况，很可能的试纸条的特异性受 到阴道分泌物中有着和 PSA 的结构相类似的物质。黄体期中检 测出阳性，但排卵期和滤泡期使用试纸条进行检测呈现阴性，这 就说明试纸条的特异性受到女性不同时期性激素水平的严重影 响比较大。对于多囊卵巢综合症患者的检测出现 2 例阳性样本， 这说明某些类型的疾病状态下的引导分泌物对于精斑试纸条的 特异性能够进行干扰。所以从这可以看出，在进行检测的时候发 现试纸条检测出阳性的话，则应当对以上的因素进行考虑，操作 人员一定要按照操作指南所规定的步骤进行操作，并且按照 5 分 钟和 10 分钟这两个时间段来进行检测，这样才能够避免出现人 为因素所走出的误检情况的发生。
而在本试验中进行精子检查的时候所采用的是精子涂片 HE 染色法进行。
4．STR 检测 本试验进行 STR 检测所采用的是 PowerPlex! 16System 试
2012 · 03（下）
◆学术前沿
剂盒进行相关检测。 二、结果 （一）对阴道分泌液斑和阴道拭取样本所进行的检测结果 使用精斑试纸条对这两种样本进行读取后发现，5 分钟读取
◆学术前沿
2012 · 03（下）
性侵犯案件中对于精斑试纸条使用灵敏
度以及特异性的研究
李 慧 姚亚飞
摘 要 抗原胶体金免疫试纸条也就是精斑试纸条，这是一种使用色谱层析技术以及免疫学方法通过前列腺特异性抗原
对特异性进行检测的办法。该办法在实际操作过程中具备简单、所耗费时间短、得出的结果容易判断以及没有特殊设备要
8 例阴道分泌液斑和 20 例阴道拭取样本均仅仅在（Ｃ）区域质控 线上呈现红色，也就判断为阴性，10 分钟之后再对两种样本的检 测结果发现，20 例阴道拭取样本其中有 4 例以及 8 例阴道分泌 液斑有 4 例均在检测线和质控线双线上呈现红色，也就判断为阳 性。
（二）对 10 分钟后读取为阳性的 8 例样本进行稀释后所得到 的检测结果
作者简介：李慧，贵州省贵阳市公安局花溪分局；姚亚飞，贵阳市公安局花溪分局刑侦大队。
中图分类号：D920.4
文献标识码：A
文章编号：1009-0592(2012)03-258-02
一、材料和方法 （一）材料 抗原胶体金免疫试纸条选用的是美国 BIOENGINE，选取的 样品是从一周内无性生活的女性志愿者用阴道棉签拭取 20 支， 从 8 名未婚女性志愿者提取阴道分泌液斑和尿液斑，从 10 名男 性志愿者提取尿液斑、汗液斑以及唾液斑。由贵阳医学院检验科 提供人精液样本 2 份，贵阳医学院生殖中心提供多囊卵巢综合症 患者阴道分泌液斑 10 份，由贵州农业大学提供 2 份鸡和猪的精 液样本。 （二）方法 1．样品的制备 在进行样品的制备过程中，分别使用 300 L 的生理盐水浸泡 规格为 10mm×10mm 的汗液斑、尿液斑、唾液斑和尿道液斑以及 规格为 10mm×10mm×10mm 阴道拭取样本过夜，在此基础上，这 以上所有试剂中分别吸取 100 L 各自浸泡液用生理盐水按照 1： 100、1:50、1:10、1:5、1:2 以及 1:1 的比例进行稀释，再取人精液含 量为 1 L 按照 1：100000、1:10000、1:1000、1:100、1:10 的比例进 行稀释。 2．精斑试纸条的使用判定 对于精斑试纸条的使用详情可见使用说明书，上面对使用方 法操作进行详细的叙述，通常来说使用经本试纸条去检查进行结 果的观察都是分为 5 分钟和 10 分钟这两个时间段，当对比颜色 发现试纸条上面只是质控线出现红色的情况则判定为阴性，而当 出现红色在检测线和质控线双线上的时候则判断为阳性，当显示 的结果检测线为淡红色和质控线为红色则判断为弱阳性。 3．精子检查所采用的办法 精液是睾丸生成的精子和前列腺、精囊和尿道球腺分泌液的 混合物，具有特殊的气味，因附着物不同形态也不同，在暗色布质 上，精斑浓厚时，呈灰白色，似浆糊状，稀薄时不易察见；在白色布 质上，呈黄白色，边缘较中间明显；以手触之有硬感。用放大镜观 察，可在表面或布纤维中见黄白色鳞状小片。对发现的可疑斑 痕，应首先进行预试验，其方法有以下几种：
8 例样本按照 1：1 的比例进行稀释后，5 分钟读取只是质控 线呈现红色，判别为阴性，10 分钟读取检测线为淡红色和质控线 为红色，判断为弱阳性；按照 1：2 的比例进行稀释后，5 分钟读取 只是质控线呈现红色，判别为阴性，10 分钟读取检测线为淡红色 和质控线为红色，判断为弱阳性；按照 1：5 的比例进行稀释后，5 分钟和 10 分钟读取质控线呈现红色，均判别为阴性；之后的比例 稀释均呈现阴性。对于这 8 例样本进行精子涂片 HE 染色法检 测均为发现有精子检测出。
参考文献： [1]公安部第二研究所编写组编写．法医物证检验技术及应用．人民法院出版社．1997． [2]张琼予，丁梅，王保捷，庞灏，贺薇．DNA 提取自动化工作站在法医学领域的应用．中 国法医学杂志．2010(1)． [3]李红霞，陈晓晖．精斑检材的 3 种提取方法比较．中国法医学杂志．2007(5)． [4]杨思思，贾晓杰．精斑试纸在水中高腐尸体应用失效 1 例．山西职工医学院学报．2011 (3)． [5]Bahceci M,Bilge M,Tuzcu A,et al.Serum prostate specific antigen levels in women with polycystic ovary syndrome and the effect of flutamide + desogestrel/ethinyl estradiol combination. 2004．
（1）紫外线检查。精斑在紫外线下呈银白色荧光，周围较深， 带紫蓝色边缘。经水洗涤残留于布质纤维中的精斑，在紫外线下 仍可见点状荧光，借此可以发现精斑所在的部位。人体其他分泌 物的斑痕，如汗液斑、尿斑、阴道分泌物、乳汁、鼻涕等，以及肥皂、 浆糊斑、某些药物、化学纤维制品，在紫外线—F—也可显现与精 斑相类似的荧光。因此，在紫外线下出现银白色荧光，不是精斑 的特异性反应，不能作为确定精斑的根据。
（3）酸性磷酸酶检验。精液中含有前列腺液，有大量酸性磷 酸酶，对可疑斑迹进行检测，可作为精斑的预试验。精液中的酸 性磷酸酶．在合适的温度环境与酸性溶液中，可分解磷酸苯二钠， 释放出酚。酚经氧化剂铁氰化钾的作用，与氨基安替比林结合， 产生红色酮类化合物，随检材中精斑的不同浓度而呈深浅不同的 红色，浓度过高，可出现红色沉淀；阴性反应为橙黄色。精液稀释 至 2 万倍，仍可呈阳性反应。
（2）碘化碘钾结晶试验。精斑中卵磷脂逐渐析出胆碱，胆碱 遇碘则形成过碘胆碱结晶。剪取可疑斑痕少许，置于玻片上，加 试剂（碘化钾 1．65 克、碘 2．54 克、加水 30 毫升）1-2 滴加盖玻片 镜检，初见褐色颗粒，逐渐演变成针状结晶，然后则为褐色菱形结 晶，结晶不稳定，于生成后 1-3 小时可消失。此结晶并非精斑特 异性反应，凡含有胆碱的物质（阴道粘液、子宫分泌物、脓液、鼻 涕、唾液以及肝、肾等脏器）也可形成结晶。因此，检见结晶只能 推断是精斑的可能，而不能确定就是精斑。
பைடு நூலகம்
求等诸多优势而在日常精斑确证试验中在法医学的实际检案上。在实际检测过程中，很可能会出现精子检测不到或者是
男性的 DNA 不能进行扩增情况的发生，为对此种办法的灵敏度和特异性进行验证和比较，本文特对此课题做一探讨，相信
本文能够对相关课题研究起到抛砖引玉的作用。
关键词 精子检测 男性 DNA 扩增 精斑试纸条
这种方法具有简便、灵敏、迅速和不破坏检材的完整性等优 点。但特异性较差，酸性磷酸酶除存在于前列腺外，还广泛分布 在人体血液、阴道分泌物、唾液、尿液以及胰、脾等脏器内。利用 精液所含酸性磷酸酶浓度显著高于其他体液的特点 6，还可作精 液检验的确证试验，如果酸性磷酸酶浓度大于 300 单位／毫升， 可推定为精斑，大于 500 单位／毫升，可靠性更大。
在。 2.9STR 检测 通过对 8 例在进程检测出 10 分钟时间段为阳性的女性样本
使用 Amelogenin 基因均只检出 X 基因峰，剩余的常染色体 STR 的锋速都不大于 2。
三、讨论 精斑试纸条其是通过免疫学技术来对精液中的前列腺特异 抗原进行检测，在本试验过程中，根据所使用的精斑试纸条说明 书显示灵敏度在两千至三千范围，从这可以看出，由于厂家的不 同，所生产出来的产品在灵敏度上也存在着差异性。本试验将精 液浓度稀释到 100000 倍的话，依然呈现出阳性反应的特征，从这 也可以显示出精斑试纸条具备十分高的敏感度。 从临床上来看，在进行前列腺炎以及前列腺癌症患者的血清 中进行 PSA 水平的检测通常都是用到精斑试纸条。精斑特别是 微量陈旧检材确证的最有效办法之一就是进行前列腺特异抗原 检测。根据本试验过程中对所搜集到的汗液斑、唾液斑以及尿液 斑进行检测发现均呈现出阴性特征，从这就体现出所选用做试验 的精斑试纸条具备器官差异性并且不受到体液的影响。而通过 鸡和猪这两种动物精液样本的收集经过精斑试纸条检测发现结 果呈现出阴性特征，这也就反映出精斑试纸条具备一定程度的种 属特异性特征。 由于在进行本次试验的时候所采用的 20 例阴道拭取样本其 中有 4 例出现阳性反应。PSA 这是精液中的蛋白成分而存在，与 各种各样的酶相比，其所受到的外界干扰影响小得多，所以这也 可以看出其具备良好的稳定性，PSA 在性交后精液和阴道液两者 混合到一起之后还能够存在很长的一段时间，所以对一周时间内 无性生活女性提取阴道液，但这 2 例阳性反应者也不能够排除掉 是之前所残存的微量 PSA 存在，或者是之前服用过避孕药，或者 是在进行治疗的时候使用激素类的药品。通过对 8 例未婚女性 阴道分泌物中出现 4 例阳性的情况，很可能的试纸条的特异性受 到阴道分泌物中有着和 PSA 的结构相类似的物质。黄体期中检 测出阳性，但排卵期和滤泡期使用试纸条进行检测呈现阴性，这 就说明试纸条的特异性受到女性不同时期性激素水平的严重影 响比较大。对于多囊卵巢综合症患者的检测出现 2 例阳性样本， 这说明某些类型的疾病状态下的引导分泌物对于精斑试纸条的 特异性能够进行干扰。所以从这可以看出，在进行检测的时候发 现试纸条检测出阳性的话，则应当对以上的因素进行考虑，操作 人员一定要按照操作指南所规定的步骤进行操作，并且按照 5 分 钟和 10 分钟这两个时间段来进行检测，这样才能够避免出现人 为因素所走出的误检情况的发生。
而在本试验中进行精子检查的时候所采用的是精子涂片 HE 染色法进行。
4．STR 检测 本试验进行 STR 检测所采用的是 PowerPlex! 16System 试
2012 · 03（下）
◆学术前沿
剂盒进行相关检测。 二、结果 （一）对阴道分泌液斑和阴道拭取样本所进行的检测结果 使用精斑试纸条对这两种样本进行读取后发现，5 分钟读取
◆学术前沿
2012 · 03（下）
性侵犯案件中对于精斑试纸条使用灵敏
度以及特异性的研究
李 慧 姚亚飞
摘 要 抗原胶体金免疫试纸条也就是精斑试纸条，这是一种使用色谱层析技术以及免疫学方法通过前列腺特异性抗原
对特异性进行检测的办法。该办法在实际操作过程中具备简单、所耗费时间短、得出的结果容易判断以及没有特殊设备要