微生物分离技术全解
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微生物分离技术
一、平板倾注法
1、样品作10倍递减稀释至适当浓度
2、加样倾注平板 无菌方法，由低浓度开始，从各浓度样品稀释液 中各吸取100ul，均匀地放入已写好稀释度的空白 无菌平皿中，然后在各平皿中加入已经融化并冷却 到45 -50℃的营养琼脂培养基12-15ml，将培养
皿在超净工作台面上轻轻转动，使稀释的菌悬液与
• 样品稀释
• 倒培养基，制成平板。 • 凝固后，吸取相应的样品稀释液0.2mL放在平板上。 • 用灼烧冷却后的无菌玻璃将稀释液在平板表面涂 抹均匀。每个浓度做3个平板（重复）。倒置于 370C条件下培养1～2d。
wk.baidu.com
凝 固 后
28～ 30℃ 培养
涂布法流程图
三、划线分离法
1、挑取单个菌落，分别在平板上做分区 和连续划线。
融化的培养基混合均匀，直至培养基凝固。
3、菌落计数
含菌样品的微生物经稀释分离培养后，每一个活菌
细胞可在平板上繁殖形成一个肉眼可见的菌落，故 可据平板上菌落的数目推算出每克含菌样品中所含 的活菌总数（菌落形成数目）。
每毫升样品中微生物细胞数= 每皿菌落平均数 × 稀释倍数 × 1/取样体积数
二、涂布法
2、37℃培养24-48h检查菌落是否单纯。
3、如不单纯继续按上述方法分离。
划线方法
☻ 接种环灼烧灭菌、冷却
☻ 左手取样品，右手用接种环挑取样品，用已经粘有菌体的 接种环于另一新的空白平板中划线 分区划线法：灼烧、冷却、区1划线；灼烧、冷却 区2 划线；灼烧、冷却、区3划线；灼烧、冷却、区4划线；完 毕、灼烧 连续划线法：灼烧、冷却、取菌，连续划线，完毕、灼烧
平皿划线 分离法
思考题
• 平板培养时为什么要把培养皿倒置？ • 在划线分离时，为什么每次都需要将接 种环上的剩余物烧掉？
一、平板倾注法
1、样品作10倍递减稀释至适当浓度
2、加样倾注平板 无菌方法，由低浓度开始，从各浓度样品稀释液 中各吸取100ul，均匀地放入已写好稀释度的空白 无菌平皿中，然后在各平皿中加入已经融化并冷却 到45 -50℃的营养琼脂培养基12-15ml，将培养
皿在超净工作台面上轻轻转动，使稀释的菌悬液与
• 样品稀释
• 倒培养基，制成平板。 • 凝固后，吸取相应的样品稀释液0.2mL放在平板上。 • 用灼烧冷却后的无菌玻璃将稀释液在平板表面涂 抹均匀。每个浓度做3个平板（重复）。倒置于 370C条件下培养1～2d。
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凝 固 后
28～ 30℃ 培养
涂布法流程图
三、划线分离法
1、挑取单个菌落，分别在平板上做分区 和连续划线。
融化的培养基混合均匀，直至培养基凝固。
3、菌落计数
含菌样品的微生物经稀释分离培养后，每一个活菌
细胞可在平板上繁殖形成一个肉眼可见的菌落，故 可据平板上菌落的数目推算出每克含菌样品中所含 的活菌总数（菌落形成数目）。
每毫升样品中微生物细胞数= 每皿菌落平均数 × 稀释倍数 × 1/取样体积数
二、涂布法
2、37℃培养24-48h检查菌落是否单纯。
3、如不单纯继续按上述方法分离。
划线方法
☻ 接种环灼烧灭菌、冷却
☻ 左手取样品，右手用接种环挑取样品，用已经粘有菌体的 接种环于另一新的空白平板中划线 分区划线法：灼烧、冷却、区1划线；灼烧、冷却 区2 划线；灼烧、冷却、区3划线；灼烧、冷却、区4划线；完 毕、灼烧 连续划线法：灼烧、冷却、取菌，连续划线，完毕、灼烧
平皿划线 分离法
思考题
• 平板培养时为什么要把培养皿倒置？ • 在划线分离时，为什么每次都需要将接 种环上的剩余物烧掉？