组织分离制食用菌母种

示范操作
贴标签培养：试管从接种箱取出之前， ⑥ 贴标签培养：试管从接种箱取出之前， 应逐支试管正面的上方贴上标签， 应逐支试管正面的上方贴上标签，写明 菌种编号、接种日期， 菌种编号、接种日期，随后把试管放入 培养箱（ 置适宜温度（ 培养箱（室）中，置适宜温度（平菇 22℃，香菇 ℃）下培养，待组织块长 ℃ 香菇25℃ 下培养， 出菌丝无污染即为纯种。 出菌丝无污染即为纯种。
分组辅导
注意同学们的操作； 注意同学们的操作； 及时纠正不规范动作。 及时纠正不规范动作。 接种操作完毕，收集试管进行培养。 接种操作完毕，收集试管进行培养。
数显式恒温培养箱的使用
注意事项（提问同学） 注意事项（提问同学）
实训第三大部分
结果观察
母种培养生长状态观察
母种培养生长状态可分4种情况 母种培养生长状态可分 种情况. 种情况 1.菌丝已萌发，生长旺，无污染 菌丝已萌发， 菌丝已萌发 生长旺， (如图所示 ； 如图所示)； 如图所示
母种培养基配方： 母种培养基配方： 1.土豆200g、 20g、琼脂20g、 1.土豆200g、糖20g、琼脂20g、水1000ml 土豆200g 20g 2.去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、 去皮马铃薯200g 葡萄糖20g 琼脂20g 200 20 20 1000ml PH值自然 另外添加：麸皮20 ml、 值自然， 20g 水1000ml、PH值自然，另外添加：麸皮20g、 玉米面5 或黄豆粉5 磷酸二氢钾2 玉米面 5g 或黄豆粉 5g 、 磷酸二氢钾 2g ， 硫酸 10mg mg） 镁2g，VB11片（10mg）。 此配方适用于大多数菌种，金针菇、黑木耳、 此配方适用于大多数菌种，金针菇、黑木耳、 灵芝生长尤其茁壮。 灵芝生长尤其茁壮。 可作黑木耳、香菇的复壮培养基，效果显著。 可作黑木耳、香菇的复壮培养基，效果显著。
组织分离操作的主要步骤 步骤： （四）组织分离操作的主要步骤：
①挑选种菇：挑选生长健壮，菌龄适中， 挑选种菇：挑选生长健壮，菌龄适中， 无病虫害， 无病虫害，具有本品种优良性状的菇体 或组织作为种菇。 或组织作为种菇。 环境、用具严格消毒： ②环境、用具严格消毒：即超净工作台 或无菌室的使用，形成无菌的环境。 或无菌室的使用，形成无菌的环境。
培
养
置于适宜温度下培养3-5天，就可以看到 天 置于适宜温度下培养 组织上产生白色绒毛状菌丝， 组织上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大 即得到菌种。如香菇、平菇、双孢菇、 即得到菌种。如香菇、平菇、双孢菇、 草菇、猴头菌等多采用此方法。 草菇、猴头菌等多采用此方法。
附：数显式恒温 培养箱的使用
数显式恒温培养箱的使用
（一）实训目的 1.掌握母种培养基的配制操作及 1.掌握母种培养基的配制操作及 掌握母种培养基的配制 高压灭菌方法; 高压灭菌方法; 2.理解组织分离法制母种的原理 理解组织分离法制母种的原理; 2.理解组织分离法制母种的原理; 3.掌握组织分离接种技术 掌握组织分离接种技术; 3.掌握组织分离接种技术; 4.会使用超净工作台和培养箱 会使用超净工作台和培养箱. 4.会使用超净工作台和培养箱.
组织分离部位的选择
菌肉组织如图
菌核组织如图
示 范操 作
组织分离：解剖刀经火焰灭菌， ④ 组织分离：解剖刀经火焰灭菌，在菇 柄中部纵切一刀， 柄中部纵切一刀，用手掰开菌再用刀片 在菇盖与菇柄交界处切取黄豆大小的小 方块。 方块。 接种：在无菌条件下， ⑤ 接种：在无菌条件下，随后挑取一组 织小块，迅速移接到PDA斜面培养基上， 斜面培养基上， 织小块，迅速移接到 斜面培养基上 并塞好棉塞。 并塞好棉塞。
常见的杂菌观察
常见的杂菌主要有细菌、放线菌； 常见的杂菌主要有细菌、放线菌；
常见的杂菌观察
细菌、霉菌等。 细菌、霉菌等。
常见的杂菌观察
青霉、 青霉、黑曲霉
（五）组织分离制母种应注意的事项 提问同学） （提问同学）
环境用具严格消毒； 环境用具严格消毒； 组织小块大小要适宜(黄豆粒大小 黄豆粒大小)； 组织小块大小要适宜 黄豆粒大小 ； 接种时要严格无菌操作； 接种时要严格无菌操作； 培养时调节到该菌的适宜温度。 培养时调节到该菌的适宜温度。
新鲜菇(耳 体 刀片、 新鲜菇 耳)体、刀片、镊子或接种针 试管斜面培养基 接种箱或超净工作台、无菌室、酒精灯、 接种箱或超净工作台、无菌室、酒精灯、 75%酒精及酒精棉球等 酒精及酒精棉球等 培养箱等。 培养箱等。
复习上一节 母种培养基的配制步骤
1.按配方称量：见下面的配方 2.煮制 3.分装 4.灭菌 5.排斜面
培养箱是通过对周围环境条件的控制制 造出一个能使细胞、组织更好地生长的 环境，条件控制的结果就会形成一个稳 定的条件 ①调节适宜温度，并使温度稳定，再放 培养物; ②培养过程中要观察温度稳定性和生长 状态，并注意培养时间；
注意
③培养终止，关掉电源，取出培养物； ④培养箱的环境应清洁整齐，干燥通风； 保持培养箱内空气干净，并定期消毒；
超净工作台பைடு நூலகம்
使用注意事项（提问同学） ⑴ 使用注意事项（提问同学） ① 提前接通电源，开启紫外线杀菌灯，30 提前接通电源，开启紫外线杀菌灯， 分钟后关闭杀菌灯； 分钟后关闭杀菌灯； 然后开启日光灯、风机， 分钟后方可 ②然后开启日光灯、风机，20分钟后方可 进行操作。 进行操作。
组织分离操作
③菇体消毒：将子实体菌柄基部切 菇体消毒： 置接种箱内，在无菌箱内以0.1 除，置接种箱内，在无菌箱内以 的升汞水浸几分钟， ％的升汞水浸几分钟，再用无菌水 冲洗并揩干，或用75％ 冲洗并揩干，或用 ％酒精棉球擦 拭菌盖与菌柄2次 进行表面消毒。 拭菌盖与菌柄 次，进行表面消毒。
培养基的高压灭菌
使用高压蒸汽灭菌锅应注意的事项？ 使用高压蒸汽灭菌锅应注意的事项？ 高压蒸汽灭菌锅应注意的事项 提问同学） （提问同学） (1)锅内装物品不应过紧 (1)锅内装物品不应过紧； 锅内装物品不应过紧； (2)注意排出冷气，否则不能保证灭菌效果； 注意排出冷气， 注意排出冷气 否则不能保证灭菌效果； (3)加热排冷气后，使温度达到 加热排冷气后， 加热排冷气后 使温度达到121.3℃，压 ℃ 力在0.1－0.15 MPa之间维持 之间维持30 min； 力在 － 之间维持 ； (4)不耐高热高压之物品，不能用此法灭菌。 不耐高热高压之物品， 不耐高热高压之物品 不能用此法灭菌。
（六）实训作业
1.组织分离法制母种过程中的注意事项 组织分离法制母种过程中的注意事项 有哪些？ 有哪些？ 2.记录你制作的母种的生长状态 记录你制作的母种的生长状态; 记录你制作的母种的生长状态 3.是否有杂菌污染 如有分析其原因 是否有杂菌污染,如有分析其原因 是否有杂菌污染 如有分析其原因.
再 见 !
超净工作台的使用
超净台可将空气通过由特制的微孔的 超级滤清器”后吹送出来， “超级滤清器”后吹送出来，形成连续 不断的无尘无菌的超净空气层流， 不断的无尘无菌的超净空气层流，即所 高效的特殊空气” 谓“高效的特殊空气”，它除去了大于 0.3m的尘埃、真菌和细菌孢子等等。 的尘埃、 的尘埃 真菌和细菌孢子等等。 工作人员就在这样的无菌条件下操作， 工作人员就在这样的无菌条件下操作， 保持无菌材料在转移接种过程中不受污 染。
2.菌丝已萌发，但有杂菌污染； 菌丝已萌发，但有杂菌污染； 菌丝已萌发 3.菌丝未萌发，无污染； 菌丝未萌发， 菌丝未萌发 无污染； 4.菌丝未萌发，且杂菌污染严重； 菌丝未萌发， 菌丝未萌发 且杂菌污染严重；
原因分析
1.菌丝未萌发：①组织块太小②烫伤严 菌丝未萌发： 组织块太小② 菌丝未萌发 培养条件如温度不适宜。 重③培养条件如温度不适宜。 2.有杂菌污染： 有杂菌污染： 有杂菌污染 培养基灭菌不彻底； ①培养基灭菌不彻底； 培养基成分适宜杂菌生长； ②培养基成分适宜杂菌生长； 环境、用具消毒不严格； ③环境、用具消毒不严格； 菇体耳体消毒不严格； ④菇体耳体消毒不严格； 接种操作控制不当，要无菌操作。 ⑤接种操作控制不当，要无菌操作。
实训设计思路 1. 母种培养基的成分不同对 菌丝生长有什么影响； 菌丝生长有什么影响； 2. 组织分离选用的材料及分 离的部位不同有什么影响； 离的部位不同有什么影响； 3.培养温度不同有什么影响 培养温度不同有什么影响； 3.培养温度不同有什么影响； 4.杂菌污染的原因 4.杂菌污染的原因
（三）实训器材
（二）实训原理
组织分离法是利用子实体组织来分离获得纯 菌丝的方法。 菌丝的方法。 组织分离系一种无性繁殖法， 组织分离系一种无性繁殖法，双亲的染色体 没有经过重组， 没有经过重组，因此组织分离基本上可保持 亲本的生物学特性， 亲本的生物学特性，优良菌株用组织分离法 能使遗传特性稳定下来。 能使遗传特性稳定下来。 该法操作简便，取材广泛，菌丝生长发育快， 该法操作简便，取材广泛，菌丝生长发育快， 比较常用。 比较常用。
实训第二大部分
学生分组操作
分组操作
每班同学可分为二大组6小组； 每班同学可分为二大组 小组； 小组 第一大组3台双人超净工作台 每次可6 台双人超净工作台， 第一大组 台双人超净工作台，每次可 人操作； 人操作； 第二大组可在无菌室内操作； 第二大组可在无菌室内操作； 第一大组采用菌盖与菌柄交界处组织进 行分离， 行分离，第二大组采用菌盖带菌褶部分 进行组织分离，作对比观察。 进行组织分离，作对比观察。
实训三 组织分离制食用菌母种
组织分离制食用菌母 种
好树结好果, 好种出好菇! 好树结好果 好种出好菇 美味的食用菌及珍贵的药用菌需要好菌种! 美味的食用菌及珍贵的药用菌需要好菌种
你了解吗?
噢 菌种很重要！
食用菌的栽培
母种
原种
栽培种
子实体(菇体)
实训内容 母种培养基的配制 及组织分离接种
（一）实训目的 （二）实训原理 （三）实训设计思路 （四）实训器材 （五）实训步骤 （六）注意事项 （七）实验作业