最新PEG诱导细胞融合

• PEG诱导细胞融合的特点：
1、价格低廉，操作方便，融合能力强。 2、有毒，易损伤细胞。
六、单元测验
一、单选题
1.目前生产中最常使用的细胞融合方法是 。
A.灭活病毒诱导 B.PEG诱导
C.电融合法
D.激光诱导融合法
2.PEG是
。
A.溶血卵磷脂 B.二甲基亚砜
C.聚乙二醇 D.磷脂酰丝氨酸
3. PEG诱导细胞融合时其 可使细胞凝集在一起。
A.醚键
B.醇键
C.碳-碳键
D.碳-氢键
4.PEG诱导细胞融合常用分子量为
。
A.100-400
B.1000-4000
C.10000-40000
D.以上均不对
5. PEG诱导细胞融合的常用浓度为 。 A.5% B. 10% C.50% D.100%
6. PEG诱导细胞融合的时间一般为
。
A.1min B. 2.5min C.10min D.25min
胞毒性和粘度也随之增大。
四、PEG促融合作用机理
1、PEG含有大量醚键，可吸附溶液中大量的 自由水，使细胞凝集。 2、PEG可使细胞膜的脂类分子发生重排，排 开膜蛋白，并作用于膜磷脂极性基团和细胞 膜表面蛋白，使膜磷脂的表面电位下降，同 时使膜糖蛋白的排阻体积减少，最终使膜出 现缺口。
Fra Baidu bibliotek
五、PEG诱导细胞融合的方法
PEG诱导细胞融合
分泌抗体 短命
脾细胞 (B淋巴细胞)
长命 不分泌抗体
骨髓瘤 细胞
1984年Nobel医学奖
Köhler和Milstein, 1975
分泌抗体 杂交瘤细胞 长命
一、细胞融合的概念和目的
• 细胞融合：自然或人为条件下，两个或两 个以上细胞相互接触，发生膜融合、胞质 融合和核融合形成融合细胞的现象。
1）亲本细胞混合，1000rpm，10min离心，弃上清。 2）轻扣管底，混匀细胞， 37℃水浴。 3）60s内滴加0.6ml 50％PEG，边滴边摇动试管， 3）30s内将细胞悬液吸入吸管静置30s，再在30s内缓慢 转入离心管。 4）5min内加入10mlDMEM逐渐终止PEG的作用。
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• 目的：获得杂种优势
二、细胞融合的一般过程
凝集 膜融合 质融合 核融合
细胞膜的结构模式图
膜脂的主要运动方式
侧向扩散 旋转运动 摆动运动
伸缩震荡
翻转运动 旋转异构化运动
侧向扩散的频率：106/s
细胞融合关键是膜的融合，而膜融合 的关键是相邻的膜脂不稳定。
三、PEG的性质
• 中文名称：聚乙二醇 • 用于细胞融合的分子量:1000－6000 • 使用浓度:30－60％。 • PEG的处理时间:时间较短 • PEG分子量和浓度越大，其融合率越高，但它的细
7. PEG诱导细胞融合一般与
搭配使用。
A. NaCl B. KCl C. CaCl 2 D. AlCl 3
二、简答题 1.简述动物细胞融合的一般过程。 2.简述PEG诱导细胞融合的优缺点。