改良的白术药材薄层色谱鉴别研究_寿旦

华 中 医 药
2005 年版一部附录ⅥB） 实验，分别吸取上述各样品的供试
收稿日期： 2010 － 09 － 29
品溶液和对照品溶液各 2μL，分别用微量定量点样毛细管 535
基金项目： 浙江省科技计划资助项目（ 2008R20007） ； 浙江省中医药 科技计划资助项目（ 2007CB157）
作者简介： 寿旦（ 1973 － ） ，女，浙江诸暨人，副研究员，硕士，研究方 向： 中药成分研究及中药新药开发。
的干燥根茎，性苦、甘、温，归脾、胃经。具健脾益气、燥湿利 水、止汗、安胎 之 功 效［1］，为 中 医 临 床 传 统 用 药，全 国 各 地
术酮、白术内酯Ⅰ及白术内酯Ⅲ对照品均由本实验室自行 制备，经 HPLC 检测，其纯度在 98% 以上，符合鉴别试验纯
均有出产，但是研究报道以浙江、安徽、四川等地的品质为 度要求。白术药材样品采自浙江磐安浙八味种植基地，为
立了专属性更强的白术薄层色谱鉴别方法，以期为白术药 1mg 至 1mL 量 瓶 中 中，加 甲 醇 至 刻 度，摇 匀，即 得 含 量 为
材的鉴别方法改进提供实验依据。
1mg / mL 的白术内酯Ⅲ对照品溶液；
1 仪器与试药
2． 1． 2 供试品溶液制备 取干燥白术粗粉 1g，精密称定，置
双槽展开缸 PF562C （ 瑞士 CAMAG） ； 薄层色谱摄像 仪 REPROSTAR 3 （ 瑞士 CAMAG） ； AE － 240 电子分析天 平（ 瑞士梅特勒） ； KQ － 400 型数控超声波清洗器（ 昆山市
《中华人民共和国药典》2010 年版一部中白术的鉴别方法 含量为 1mg / mL 的苍术酮对照品溶液； 精密称取白术内酯
以白术药材为对照药材，未设对照品。本文以苍术酮、白术 Ⅰ1mg 至 1mL 量 瓶 中，加 甲 醇 至 刻 度，摇 匀，即 得 含 量 为
内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ三种成分为对照品，采用二次展开，建 1mg / mL 的白术内酯Ⅰ对照品溶液； 精密称取白术内酯Ⅲ
为展开剂，比例 50 ∶ 1 为佳； 分别选用石油醚 － 乙酸乙酯、
石油醚 － 氯仿等作为二次展开剂，结果显示石油醚（ 60 ～
90℃ ） － 乙酸乙酯分离效果好，斑点 Rf 值适宜，故最终选择
以石油醚（ 60 ～ 90℃ ） － 乙酸乙酯（ 3． 5 ∶ 1） 为二次展开剂。
（ 3） 供试品溶液制备方法的比较。曾经采用白术药材
种内酯对照品色谱相应的位置上无相同的荧光斑点。结果 石油醚 － 乙酸乙酯为展开剂，则对内酯成分的分离较为理
见图 1。
想，但是苍术酮斑点几乎在溶剂前沿位置，色谱图中几种指
标成分的分离及分布情况不甚理想。经过条件摸索，最终
采用二次展开，首先用低极性展开剂系统将低极性成分，包
括苍术酮分离至前沿位置，然后再用中极性展开剂系统进
lancea （ thumb． ） DC． 或北苍术 Artactylodes chinensis （ DC． ） 2． 1． 1 对照品溶液制备 精密称取苍术酮 1mg 至 1mL 量 Koidz． 的干燥 根 茎［ 5］，与 白 术 为 同 科 不 同 种 属，易 混 淆。 瓶中，加甲醇使苍术酮充分溶解，加甲醇至刻度，摇匀，即得
于锥形瓶中，加 10mL 甲醇，超声 20min，放冷后，滤过，滤液 于室温自然挥干至体积约 1mL，即得白术药材供试品溶液。
中
超声仪器有限公司） 。薄层板： 硅胶 G60 预制板（ 20 cm × 20 cm，MERCK 公司） 。微量定量点样毛细管 （ 瑞士 CAMAG） 。
2． 1． 3 苍术供试溶液制备 取干燥苍术粗粉，照供试品溶 液制备方法操作，制得苍术供试溶液。 2． 1． 4 薄 层 色 谱 鉴 别 法［6］ 照 薄 层 色 谱 法 （ 中 国 药 典
摘 要： 目的： 建立新的白术薄层色谱鉴别方法。方法： 以苍术酮、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ为对照品，分别
以石油醚（ 60 ～ 90℃ ） 与乙酸乙酯（ 10 ∶ 0． 2） 和正己烷 － 醋酸乙酯（ 3． 5 ∶ 1） 为展开剂，进行二次展开，10% 硫酸乙
醇显色后在波长 365nm 下检识。结果白术药材薄层色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑
点。结论 该方法准确可靠，能够为白术的质量控制提供参考。
关键词： 白术； 薄层色谱鉴别； 苍术酮； 白术内酯Ⅲ； 白术内酯Ⅰ
中图分类号： R284． 1
文献标识码： A 文章编号： 1673 － 7717（ 2011） 03 － 0535 － 02
Research on the Advanced TLC Methods to Identify Atractylodes Macrocephalae
优。白术的主要成分有苍术酮、白术内酯等，已分离得到的 从全国各地收集并复种的种质样品。苍术购自浙江省立同
有苍术酮、多种白术内酯及内酰胺以及杜松脑等近 20 个化 德医院中药房，白术及苍术均由高家鉴主任中药师鉴定。
合物［2］，药理研究证明苍术酮、内酯类成分是白术抗炎、健 2 方法与结果
脾有 效 成 分［3 － 4］。苍 术 为 菊 科ห้องสมุดไป่ตู้植 物 茅 苍 术 Artactylodes 2． 1 对照品与供试品溶液制备
第 29 卷 第 3 期 2011 年3 月
中华中医药学刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 29 No． 3 Mar． 2 0 1 1
酸乙醇 溶 液，迅 速 取 出，105 ℃ 加 热 至 斑 点 显 色 清 晰，于 3 讨 论
手工点样于同一块硅胶 G 板上，以石油醚（ 60 ～ 90℃ ） － 乙 学 酸乙酯（ 10 ∶ 0． 2） 为展开剂，预饱和 20 min 后上行展开 8 刊
cm，取出晾干，继用正己烷 － 醋酸乙酯（ 3． 5 ∶ 1） 为展开剂，
预饱和 20 min 后上行展开 5cm，取出，晾干，浸入 10% 的硫
Key words： Atractylodes macrocephalae； TLC ； Atractylon； Atraetylenolide Ⅲ ； Atraetylenolide Ⅰ
白术为菊科植物白术 Artactylodes macrocephala Koidz．
所用试剂均为分析醇（ 华东医药化学试剂公司） 。苍
（ 4） 试 验 中 对 显 色 剂 及 显 色 方 法 进 行 了 比 较，选 用 10% 香兰素硫酸为显色剂，显色后色谱图在自然光下检视 效果很好，苍 术 酮 斑 点 清 晰，但 是 内 酯 成 分 在 自 然 光 及 365nm 紫外灯下检视都没有明显的斑点，选用 10% 硫酸乙 醇为显色剂，虽然自然光下色谱图中苍术酮斑点颜色较暗 淡，但是内酯成分在紫外灯光下呈现为明显的蓝色荧光斑 点，苍术酮为明亮的黄色荧光斑。因此确定 10% 硫酸乙醇 为显色剂。在此基础上，分别以喷雾显色及浸渍显色显色
SHOU Dan，YU Zhong-ming，ZHANG Jian-min
（ Zhejiang Academy of traditional Chinese medicine，Hangzhou 310007，Zhejiang，China）
Abstract： Objective： To establish the advanced TLC method of Atractylodes macrocephalae． Methods： Atractylon、Atraetylenolide Ⅲ and Atraetylenolide Ⅰ were used as the reference substance and the mixture of benzene（ 60 ～ 90℃ ） － ethyl acetate（ 50 ∶ 1） and hexane － ethylacetate （ 3． 5 ∶ 1） as the mobile phase with twice － development ，containing 10% sulfuric acid was used for coloration． The fluorescence chromatogram was detected at 365 nm in the ultraviolet lamp house． Results： The spots in the chromatogram of the test solution corresponding to the position to the each reference substance had the same color． Conclusion： The method is accurate and stable，and can be used for the quality control of Atractylodes macrocephalae．
了试验研究，以白术粉末 1g，直接加入经甲醇、水预洗的固 相萃取小柱（ 200mg /3mL） 顶端，加水 3mL，以 1mL / min 速度 洗脱，继用 20% 甲醇溶液 2mL 洗脱，弃去上述 2 种洗脱液， 用甲醇 3mL 洗脱，弃去初洗脱液 0． 5mL，收集后续洗脱液，室 温自然挥干溶剂至 1mL 作为供试品溶液。试验结果近原点 杂质明显减少，内酯斑点更清晰，但是由于操作过程较长，苍 术酮斑点有所减小。并且含淀粉较多的样品经水洗脱后容 易堵塞柱子。而正文中供试品溶液制备方法操作简单，苍术 酮含量较高，可操作性强，虽然有少数白术样品薄层色谱图 中近前沿部位有杂质，内酯成分清晰度不佳，但不影响结果 判断。故最终确定甲醇直接提取为供试品溶液制备方法。
行较短展距的上行展开，分离内酯等中极性成分，而极性较
大的杂质成分保留在原点附近。通过二次展开，使极性差
异较大的 3 种指标成分达到较好的分离度，最大程度避免
杂质干扰。
（ 2） 对展开剂的种类及配比进行了摸索，分别选用正
己烷 － 乙酸乙酯、环己烷 － 乙酸乙酯等作为一次展开剂，结
果显示展开结果无显著差异，最终选用环己烷 － 乙酸乙酯
第 29 卷 第 3 期 2011 年3 月
中华中医药学刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 29 No． 3 Mar． 2 0 1 1
改良的白术药材薄层色谱鉴别研究
寿旦，俞忠明，章建民
（ 浙江省中医药研究院中药研究所，浙江 杭州 310007）
365nm 下观察，白术供试品色谱中，在与对照品色谱相应的
（ 1） 曾尝试通过一次展开进行鉴别，采用正己烷 － 乙
位置上有相同的荧光斑点。苍术供试品色谱中，仅在与苍 酸乙酯为展开剂，结果苍术酮斑点 Rf 值适中，但是内酯成
术酮对照品色谱相应的位置上有相同的荧光斑点，而与两 分近原点位置，没有达到有效分离，鉴别效果不佳。如采用
直接通过 SPE 固相萃取小柱进行洗脱分离的制备方法进行
1、2 不同产地的白术供试品溶液； 3、苍术酮对照品； 4、白术内酯Ⅰ对照品； 5、白术内酯Ⅲ对照品； 6、苍术供试溶液
图 1 白术薄层色谱图
2． 2 药典方法试验及结果 2． 2． 1 供试品溶液制备 取干燥白术粉末 0． 5g，加正己 烷 2mL，超声处理 15min，滤过，滤液作为白术供试品溶液。 取干燥苍术粉末 0． 5g，加正己烷 2mL，超声处理 15min，滤 过，滤液作为苍术供试品溶液。 2． 2． 2 对照药材溶液制备 取白术对照药材 0． 5g，加正己烷 2mL，超声处理 15min，滤过，滤液作为白术对照药材溶液。 2． 2． 3 薄层鉴别法 照薄层色谱法（ 中国药典 2010 年版 一部附录ⅥB） 实验，分别吸取上述供试品溶液和对照药材 溶液各 10μL，分别点于同一块硅胶 G 板上，以石油醚（ 60 ～ 90℃ ） － 乙酸乙酯（ 10 ∶ 0． 2） 为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以 5% 香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，白术供试 品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上有相同颜色 的斑点。苍术供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的 位置上有相同颜色的斑点。结果见图 2。