链球菌分离鉴定及药敏试验

链球菌的分离鉴定及药敏试验

摘要为分离和鉴定疑似链球菌感染病料，该试验采用革兰氏阳性菌选择性培养基进行分离培养，并进行生化试验鉴定及药敏试验。结果表明：6份病料中分离出6株链球菌菌株，根据生化试验鉴定表推断出，有4株为c群，1株为d群，1株为e群。药敏试验结果表明，先锋必和青霉素对链球菌有较好的抑制作用，此结果为链球菌病的研究和防治提供一定的理论依据。

关键词链球菌；分离鉴定；药敏试验

中图分类号 s852.61 文献标识码 a 文章编号 1007-5739（2013）04-0270-02

链球菌（streptococcus）广泛存在于自然界，水、尘埃、动物体表、消化道、呼吸道、泌尿生殖道黏膜、乳汁等都有存在，大多数不致病。医学上重要的链球菌主要有化脓性链球菌、肺炎链球菌、无乳链球菌、羊链球菌等，有些可致人和动物各种化脓性疾病、肺炎、乳腺炎、败血症等。近段时间，楚雄州部分羊场发生羊急性死亡病例，该试验通过对部分羊场送检的7份病料进行分离鉴定与药敏试验，了解各地羊发病的原因，从而为该病的预防和用药提供一定的理论基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 病料来源。各地送检的疑似链球菌病引起的病变组织，共7份，保存于4 ℃冰箱。

1.1.2 试验试剂。牛心浸液、兔子全血、牛肉浸膏、琼脂粉、血清、蛋白胨、磷酸二氢钠、氯化钠、无水磷酸氢二钠、蒸馏水、乙醇、氢氧化钠、盐酸、磷酸氢二钾、酵母金粉、胰胨、l-精氨酸盐盐酸、柠檬酸铁、0.5%酸性复红、精氨酸、马尿酸钠、七叶苷、淀粉酶、甘露醇、乳糖、棉子糖、山梨醇、菊糖、水杨苷、海藻糖、伯胶糖等，均来自于传染病实验室。

1.1.3 培养基。叠氮钠血琼脂、营养琼脂、牛心浸液培养基、马丁肉汤培养基、6.5% nacl生长培养基、血清糖发酵培养基、精氨酸培养基、3-羟基丁酮培养基、马尿酸盐培养基、七叶苷培养基、葡萄糖培养基、蔗糖培养基、海藻糖培养基等培养基均按照陈天寿《微生物培养基的制造与应用》[1]中的方法配制。

1.1.4 药敏片。青霉素、红霉素、万古霉素、卡那霉素、氟哌酸、先锋必、复方新诺明。

1.2 试验方法

1.2.1 病原分离培养。将病料从横断面剪开，露出新鲜的组织液，在叠氮钠血液培养基上涂抹一点后，做常规划线分离。37 ℃培养24～48 h，挑取可疑菌落做纯培养后，进行生化试验鉴定。

1.2.2 镜检。先于载玻片上滴1滴蒸馏水，用铂耳挑取待检的菌落于载玻片上涂片，酒精灯火焰固定，革兰氏染色，镜检。

1.2.3 纯培养。选择叠氮钠血琼脂培养基上有溶血的可疑菌落接种于血清葡萄糖琼脂斜面或马丁肉汤琼脂斜面，在37 ℃恒温箱中培养24～48 h，作为菌种。

1.2.4 生化试验。从血清葡萄糖琼脂斜面或马丁肉汤琼脂斜面，挑取待检菌落或菌苔接种于各种糖发酵培养基和生化培养中，于

37 ℃恒温箱中培养24～48 h，观察培养基变化和做生化试验。

1.2.5 药敏试验。将纯培养菌株接种于马丁肉汤中，37 ℃恒温箱中培养24～48 h。然后将菌液稀释至麦氏比浊管第1管的浓度（即0.5管），用灭菌移液器吸取0.1 ml接种到马丁肉汤琼脂培养基中，用“l”型玻璃刮子均匀涂布，置室温或4 ℃下吸收液体。在无菌条件下将抗菌素药敏纸片贴于培养基中，纸片之间的距离为2 cm，纸片与平皿壁的距离为2 cm，于4 ℃下扩散1 h，移入37 ℃培养24～48 h，观察并测量抑菌圈的大小。

2 结果与分析

2.1 分离培养结果

该试验研究致病性链球菌，在血琼脂培养基上出现β溶血，在菌落周围形成完全透明的溶血环，红细胞完全溶解[2]。病料接种培养24～48 h，可见圆形、露滴状、边缘呈β溶血的菌落与链球菌培养特性相符合。叠氮钠血琼脂培养基的溶血情况见图1。

2.2 镜检结果

链球菌呈球形或卵圆形，直径小于2.0 μm，常排列成链状或成双。革兰氏染色呈蓝紫色[2]，链球菌的染色镜检情况见图2。

2.3 生化试验结果

分离菌株经过生化试验，送检实验室的7份病料中，6个菌株为链球菌，1株为葡萄球菌。6株链球菌均能水解精氨酸和淀粉酶。

分离株羊1、羊2、羊4能发酵葡萄糖、蔗糖，在6.5% nacl培养基上不能生长，不能水解马尿酸钠、七叶苷、露醇羊、山梨醇、半乳糖、3-羟基丁酮（vp）、菊糖、棉实糖、海藻糖、伯胶糖、水杨苷，与马链球菌亚种生化特性相符合[3-4]；分离株羊3能发酵葡萄糖、蔗糖、半乳糖、菊糖、半乳糖、棉实糖、海藻糖和伯胶糖，能水解七叶苷，在6.5% nacl培养基上不能生长，不能水解马尿酸钠、甘露醇、山梨醇、水杨苷、3-羟基丁酮（vp），与羊链球菌生化特性相符；羊5不能发酵菊糖，能发酵葡萄糖、蔗糖、半乳糖、棉实糖、海藻糖和伯胶糖，能水解七叶苷、甘露醇和水杨苷，能在6.5% nacl培养基上生长，不能水解马尿酸钠、山梨醇和3-羟基丁酮（vp），与乳房链球菌生化特性相符[1，5]；分离株羊6，能发酵葡萄糖、蔗糖、半乳糖、菊糖、棉实糖、海藻糖和伯胶糖，能水解七叶苷、水杨苷和3-羟基丁酮（vp），在6.5% nacl培养基上不能生长，不能水解甘露醇、山梨醇，与类马链球菌生化特性相符。通过生化试验，6个分离菌株中4株血清型为c型，1株血清型为d 型，1株血清型为e型，生化试验结果见表1。

2.4 药敏试验

观察并测量抑菌圈的大小，先锋必和青霉素对6个分离链球菌菌株有较好的抑制作用。6个分离链球菌菌株对万古霉素产生耐药性，对其他药物有不同程度的敏感性[5]。药敏试验结果见表2。

3 结论

（1）分离菌株经过生化试验，送检实验室的7份病料中，6个

菌株为链球菌，1株为葡萄球菌。6株链球菌均能水解精氨酸和淀粉酶。分离株羊1、羊2、羊4能发酵葡萄糖、蔗糖，在6.5% nacl 培养基上不能生长，不能水解马尿酸钠、七叶苷、露醇羊、山梨醇、半乳糖、3-羟基丁酮（vp）、菊糖、棉实糖、海藻糖、伯胶糖、水杨苷，与马链球菌亚种生化特性相符；分离株羊3能发酵葡萄糖、蔗糖、半乳糖、菊糖、半乳糖、棉实糖、海藻糖和伯胶糖，能水解七叶苷，在6.5% nacl培养基上不能生长，不能水解马尿酸钠、甘露醇、山梨醇、水杨苷、3-羟基丁酮（vp），与羊链球菌生化特性相符；羊5株不能发酵菊糖，能发酵葡萄糖、蔗糖、半乳糖、棉实糖、海藻糖和伯胶糖，能水解七叶苷、甘露醇和水杨苷，能在6.5% nacl培养基上生长，不能水解马尿酸钠、山梨醇和3-羟基丁酮（vp），与乳房链球菌生化特性相符；羊6株，能发酵葡萄糖、蔗糖、菊糖、半乳糖、棉实糖、海藻糖和伯胶糖，能水解七叶苷、水杨苷和3-

羟基丁酮（vp），在6.5% nacl培养基上不能生长，不能水解甘露醇、山梨醇和水杨苷，与类马链球菌生化特性相符。通过进行生化试验发现，6个分离菌株中，4株的血清型为c型，1株的血清型为d型，1株的血清型为e型。

（2）通过对6个分离菌株进行青霉素、红霉素、万古霉素、卡那霉素、氟哌酸、先锋必、复方新诺明7种药敏试验，先锋必和青霉素对6个分离链球菌菌株有较好的抑制作用。另外，6株分离链球菌菌株对万古霉素产生耐药性，对其他药物有不同程度敏感性。

4 参考文献