浙江大学2003—2007考研生物化学真题(含详细解析)

浙江大学2003—2007考研生物化学真题（含解析）

2003、真题解析

1、简述SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳得基本原理，你使用该技术分离和检测过何种物质？主要操作步骤有哪些？

该题是实验操作中的常考题

SDS－PAGE：当SDS与蛋白质结合后，蛋白质分子即带有大量的负电荷，从而掩盖了天然蛋白质分子间的电荷差别。与此同时蛋白质在SDS的作用下结构变得松散，形状趋向一致，所以各种SDS -蛋白质复合物在电泳时产生的泳动率差异，只反映了分子量的差异，即纯利用分子筛效应，按蛋白质分子量大小进行分离，分子量越大移动越慢。

●应用

SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳还可以用于未知蛋白分子量的测定，在同一凝胶上对一系列已知分子量的标准蛋白及未知蛋白进行电泳，测定各个的标准蛋白的电泳距离（或迁移率），并对各自分子量的对数（log Mr）作图，即得到标准曲线。测定未知蛋白质的电泳距离（或迁移率），通过标准曲线就可以求出未知蛋白的分子量。

SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳经常应用于提纯过程中纯度的检测，纯化的蛋白质通常在SDS电泳上应只有一条带，但如果蛋白质是由不同的亚基组成的，它在电泳中可能会形成分别对应于各个亚基的几条带。SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高的灵敏度，一般只需要不到微克量级的蛋白质，而且通过电泳还可以同时得到关于分子量的情况，这些信息对于了解未知蛋白及设计提纯过程都是非常重要的。

SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于单链ＤＮＡ、寡核苷酸片断以及蛋白质亚基，膜蛋白、肽类等物质的分析，还可以用于研究大分子的折叠结构等方面。

●基本操作

SDS-PAGE的基本操作和聚丙烯酰胺凝胶电泳相近，其支持介质都是聚丙烯酰胺凝胶，因此在制胶、加样和电泳仪器都都相同或相近，区别的是SDS-PAGE需要有标准蛋白溶液及供试品溶液的制备，样品预先需要用SDS处理。一般采用取标准蛋白，加水制成每1ml中含2～5mg的溶液，与水解液(取尿素21.6g和十二烷基硫酸钠0.04g，溶于40ml水中)1∶3混合，置冰箱中过夜。供试品照上述方法配制。此外，在电泳结束以后，需要对相对迁移率和分子量进行计算将电泳脱色后的区带用卡尺或用扫描定位法测量染料移动的距离、染色前胶条长度、蛋白移动距离和脱色后的胶条长度。

2、质粒是基因工程中最常用得载体，为获得某种质粒(如pUC18)DNA，请你设计一个简单得实验过程(步骤)。

大肠杆菌质粒DNA的提取（碱裂解法）

此方法适用于小量质粒DNA的提取提取的质粒DNA可直接用于酶切PCR扩增。

1. 取1.5ml细菌培养物于EP管中，4000rpm离心1分钟，弃上清液，使细菌沉

淀尽量干燥；

2. 将细菌沉淀重悬于用冰预冷的100 µl溶液I (50 mmol/L葡萄糖，10 mmol/L

EDTA pH 8.0，25 mmol/L Tris-HCl pH 8.0) 中，剧烈振荡；

3. 加入200 µl新配制的溶液II(0.2 mol/L NaOH，1％SDS（m/v）)，盖紧EP

管口，快速颠倒离心管5次，以混合混合物，确保离心管的整个内表面与溶液II接触，不要涡旋，置于冰浴中；

4. 加入150 µl预冷溶液III(每100 ml 的溶液III中含60 ml 5 mol/L 乙酸

钾，11.5 ml冰乙酸，28.5 ml H2O)，盖紧EP管口，反复颠倒数次，使溶液III在粘稠的细菌裂解物中分散均匀，之后将管置于冰上3~5分钟；

5. 在最大转速下离心5min，取上清液于另一新EP管；

6. 用两倍体积的乙醇室温沉淀双链DNA，振荡混合于室温放置2分钟，最大转

速离心5分钟；

7. 小心吸去上清液，将离心管倒置于滤纸上，以使所有液体都流出，在将附于

管壁的液滴除尽；

8. 加1ml 70％乙醇洗涤沉淀，振荡混合，用12,000g离心2分钟，弃上清，将

开口的EP管置于室温使乙醇挥发，直至EP管中内没有可见的液体存在（5～10分钟），用适量的ddH2O溶解；

9. 用0.5µl的RNase 37℃温育5~10分钟；

10. 电泳鉴定。

3、谈谈你所了解的生物化学近年来的新进展。

自己发挥，比如：蛋白质结构与功能，RNA领域（RNA干扰），酶工程，分子病和遗传病的研究等等。

没有再出过，相当于送分题

4、DNA双螺旋模型是哪年由谁提出的？请简述其基本内容。为什么说该模型的提出是分子生物学发展史上的里程碑，具有划时代的贡献？

DNA的双螺旋结构模型是在1953年由Watson和Crick两个人提出的。

按Watson-Crick模型，DNA的结构特点有：两条反相平行的多核苷酸链围绕同一中心轴互绕；碱基位于结构的内侧，而亲水的糖磷酸主链位于螺旋的外侧，通过磷酸二酯键相连，形成核酸的骨架；碱基平面与轴垂直，糖环平面则与轴平行。两条链皆为右手螺旋；双螺旋的直径为2nm，碱基堆积距离为0.34nm，两核酸之间的夹角是36°，每对螺旋由10对碱基组成；碱基按A=T，G≡C配对互补，彼此以氢键相连系。维持DNA结构稳定的力量主要是碱基堆积力；双螺旋结构表面有两条螺形凹沟，一大一小。

DNA双螺旋结构的提出开始, 标志着生物科学的发展进入了分子生物学阶段.分子生物学使生物大分子的研究进入一个新的阶段,使遗传的研究深入到分子层次,"生命之谜"被打开,

人们清楚地了解遗传信息的构成和传递的途径.在以后的近50年里,分子遗传学,分子免疫学,细胞生物学等新学科如雨后春笋般出现,一个又一个生命的奥秘从分子角度得到了更清晰的阐明,DNA重组技术更是为利用生物工程手段的研究和应用开辟了广阔的前景.在人类最终全面揭开生命奥秘的进程中,化学已经并将更进一步地为之提供理论指导和技术支持.

该题太小，以后不大会再出

5、何谓变性？哪些因素可以引起蛋白质的变性？何谓别构(变构)？举一例说明之。

蛋白质受到某些物理或化学因素作用时，引起生物活性的丧失，溶解度的降低以及其它性质的改变，这种现象称为蛋白质的变性作用。变性作用的实质是由于维持蛋白质高级结构的次级键遭到破坏而造成天然构象的解体，但未涉及共价键的断裂。有些变性是可逆的，有些变性是不可逆的。

引起蛋白质的变性的因素有：热、紫外线照射、高压和表面张力等物理因素，及有机溶剂、脲、胍、酸、碱等化学因素。

别构效应（allosteric effect）某种不直接涉及蛋白质活性的物质，结合于蛋白质活性部位以外的其他部位（别构部位），引起蛋白质分子的构象变化，而导致蛋白质活性改变的现象。可分为同促效应和异促效应两类。以氧与血红蛋白的结合为例。

该题出现多次，应引起重视。

6、试述三羧酸循环是如何沟通糖类、脂类、以及蛋白质三大有机物的代谢的？

一方面，TCA是糖、脂肪、氨基酸等彻底氧化分解的共同末端途径，另一方面，循环中生成的草酰乙酸、α-酮戊二酸、柠檬酸、琥珀酰CoA和延胡索酸等又是合成糖、氨基酸、脂肪酸、卟啉等的原料，因而TCA将各种有机物的代谢联系起来。TCA是联系体内三大物质代谢的中心环节，为合成其它物质提供C架。

重要，会是大题中的一个知识点

2004、真题解析

1、名词解释

1)埃德曼降解：

埃德曼降解是一种蛋白质或肽的氨基末端分析法,也是一种氨基酸序列测定法。其原理是在弱碱性条件下使N末端游离的α-氨基与苯异硫氰酸酯(PITC)偶联反应，然后用酸处理，经环化断裂、转化从多肽链上仅使氨基末端残基以氨基酸的苯基乙内酰硫脲衍生物(PTH-氨基酸)的形态从肽链上断裂下来，然后进行分析。

2)抗体：

抗体是机体在抗原物质刺激下，由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白，是一种可溶性的血清糖蛋白。其具有高度特异性和庞大的多样性两个特点。对保护人类和脊椎动物的抗御外来物种入侵的重要武器。

3)诱导契合学说：

诱导契合学说是一种解释酶催化活性的假说。它是指酶的活性部位并不是和底物的形状正好互补的，而是在酶和底物结合的过程中，底物分子或酶分子，有时两者的构象同时发生了一定的变化后才互补的，这时催化基团的位置也正好在所催化底物键的断裂和即将生成新键的合适位置。

4)热力学第二定律：