蛋清中胆固醇含量的测定

蛋清中胆固醇含量的测定

一、实验目的

1.查阅相关文献资料，了解测定蛋清中胆固醇含量的方法。

2.学习实验方案设计的基本方法和步骤，设计出用分光光度法测定蛋清胆固醇的实验方案。

3.用分光光度法测出鸡蛋中胆固醇的含量。

4.巩固分光光光度法的基本原理和分光光光度计的使用方法。

二、实验原理

1、胆固醇的基本性质

胆固醇含量的测定方法目前已经超过200种，可分为化学试剂比色法、酶分析法、荧光法、气相和高效液相法等五大类。临床实验室最常用的方法为化学试剂法和酶法。

化学试剂比色法有三种。其中之一是胆固醇及其酯在硫酸条件下与邻苯二甲醛作用，生成紫红色物质，此物质在533mm有最大吸收，可用分光光度法定量测定。胆固醇含量在400mg/100ml之内与吸光度呈良好线性关系。此法的优点是操作简单（无需将样品中的胆固醇抽提出来或取出样品中的蛋白质），灵敏，稳定。

鸡蛋清是富含胆固醇的食物之一，因材料取用方便所以选用鸡蛋清为实验材料，分光光度法

Lambert-Beer定律A = εbc 根据Lambert-Beer定律，吸光度A与溶液浓度c和液层厚度b之间的关系，其中ε为摩尔吸光系数。因此把透过溶液的光经过测光系统中的光电转换器，将光能转化为电能，就可以在测光系统的指示器上显示出相应的吸光度。

是不同波长的单色光分别透过某一有色溶液，并测定其不同波长时的吸光度A，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，即可会出一条吸收曲线。不同物质的吸收曲线各不相同，用已知纯物质的吸收曲线和样品的吸收曲线相对照，即可推测出样品。另一方面，测定一系列不同浓度的某一纯物质溶液的吸光度，可会出吸光度—浓度的工作曲线，再测得含有该物质的溶液的吸光度后，即可确定其物质含量。

三、仪器和试剂

仪器：电子分析天平，分光光度计，容量瓶，移液管，量筒

试剂：邻苯二甲醛，冰醋酸，浓硫酸，无水乙醇，鸡蛋清，胆固醇

四、实验步骤

1、吸收曲线的测定

（1）标准胆固醇溶液

准确称取胆固醇100mg，以冰醋酸定容至100ml。

（2）混合酸

25ml浓硫酸+25ml冰醋酸

（3）邻苯二甲醛试剂

称取邻苯二甲醛50mg，以冰醋酸定容至50ml

（4）绘制标准曲线：取六支试管，编号后按下列表格中的用量加入试剂，加毕，混匀。20~40摄氏度水浴10min，在550nm下观测吸光度。以总胆固醇量为横坐标，A值为纵坐标绘制标准曲线。

待测鸡蛋清溶液取1.0g煮熟的蛋清，溶于冰醋酸，转移至容量瓶中，定容至100ml，混匀。

样品测定：取10ml待测鸡蛋清溶液，用冰醋酸定容至100ml，取四支试管，分别如下

五、实验记录

测定及蛋清中胆固醇含量

最终测得的蛋清中的胆固醇含量为_______mg/50g.