香菇 香菇多糖 提取 纯化 检测 含量测定及表征

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各种提取方法的比较

综合上述所有提取方法，其中酶解法、微波法、 超声波法有较高的提取效率，明显优于热水提取法， 但实际生产中还存在许多问题，需进一步改进提高； 深层培养法生产周期短，但易招致杂菌污染，所以各 种方法均有其优缺点。实际生产中，为降低成本，提 高效率，以上方法可结合应用，如热水浸提结合超声 波、复合酶法结合微波提取、深层发酵培养结合稀酸 (碱)法等等，这样提取效率比单一方法高许多。

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(3) 高压电泳法 多糖在电场作用下，按其分子大小、形状和所带电荷

的不同而移动不同的距离。可用聚丙烯酰胺凝胶电泳、醋 酸纤维素薄膜电泳和玻璃纤维纸电泳进行测定。中性多糖 虽不带电荷，但其分子中若有顺式的邻二醇，就能与硼砂 形成复合物而带电荷。如电泳只出现一条带，则表示产品 纯度较高; (4)纸层析或薄层层析 单一组分在层析后呈单一斑点; (5)凝胶色谱法 凝胶是具有一定大小孔径的多孔性物质，不同大小或 形状的多糖分子在凝胶层析柱中的移动速度不同，小分子 多糖能进入凝胶孔内，大分子多糖不能进入孔内，因此多 糖流过凝胶柱时，大分子移动得较快，小分子移动得较慢， 检测流出液中多糖的浓度，以多糖浓度对时间作图，如只 有一个对称峰则表明该多糖为均一组分.
菌中之秀---香菇
09级应用化学
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目录流程图
香菇简介 香菇多糖含量测定 香菇多糖组成的测 定 结束
营养成分及药用价 值
香菇多糖提取方法 及比较
香菇多糖结构的鉴 定
营养成分及药用价 值
香菇多糖的应用
香菇多糖的纯化
主要参考文献
地理分布
香菇多糖的生物活 性
香菇多糖纯度鉴定
市场分布
香菇多糖简介
香菇多糖的脱色
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5.7.3生物学方法包括
免疫学方法: 抗原和抗体会相互结合，一定结构的多
糖会抑制抗原一抗体的结合，不同的多糖会有不同的 抑制常数。当某种未知结构的多糖对抗原和抗体的结 合产生了抑制，测定其抑制常数，再与己知结构多糖 的抑制常数相比较，有相近抑制常数的多糖其结构也 相似，从而大致判断多糖的结构; 酶法免疫学方法: 测定多糖结构的基本原理：酶学方 法主要用来分析糖链中糖甙键的连接方式，利用酶的 专一性，使用Q糖甙酶或B糖甙酶对多糖底物的催化反 应来确认多糖链中糖甙键的类型，Q糖甙酶只催化反 应具有Q糖甙键的多糖，而6糖甙酶只催化反应具有B 糖甙键的多糖.
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5.2香菇多糖的生物活性
(1)香菇多糖的抗肿瘤活性[1]
(2)香菇多糖的免疫调节[2]
(3)香菇多糖的抗病毒活性[3] (4) 香菇多糖抗感染作用
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5.3香菇多糖的应用
广泛应用应用于医药领域和保健食品领域
Fra Baidu bibliotek
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5.4香菇多糖提取方法
1. 热水浸提法
这是最早采用的一种传统方法，香菇多糖溶于水，热水浸提时，香菇 组织细胞膨胀破裂，多糖成分浸出； 2. 酸(碱)浸提法 从香菇中提取多糖的提取剂有：酸液碱液酶及热水等，提取剂为酸碱 时，即所谓的酸(碱)提取法； 3. 酶解法 香菇细胞壁主要由纤维素、果胶等组成，细胞膜主要由蛋白质和磷脂 组成，因此我们可以用具有专一性和高效性的酶，如纤维素酶、果胶酶、 蛋白酶等来提取香菇多糖；
1.香菇不但具有清香的独特风味，而且含有丰富的对
人体有益的成分。据分析，每百克鲜香菇中含蛋白质 12～14克，碳水化合物59.3克，钙124毫克，磷415毫克， 铁25.3毫克，还含有多糖类、维生素Ｂ1、维生素Ｂ2、 维生素Ｃ等。干香菇的水浸液中含有多种氨基酸、乙 酰胺、胆碱、腺嘌呤等成分。香菇中还含有丰富的食 物纤维，经常食用能降低血液中的胆固醇，防止动脉 粥样硬化，对防治脑溢血、心脏病、肥胖症和糖尿病 都有效
(2) 滴定法

(3)葸酮一硫酸法[5]

测定原理和苯酚一硫酸法类似，反应生成蓝绿色化合物，该化合物 在620nm波长处有最大吸收，其颜色深浅与多糖浓度成正比。但该法 相对苯酚一硫酸法测定步骤比较烦琐；
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(4) 3，5一二硝基水杨酸法
该法用来测定多糖中还原糖含量，在碱性溶液中，3，5---硝基水杨 酸与还原糖共热后生成棕红色氨基化合物，在一定浓度范围内，还原 糖的量与反应液的颜色成线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖 量；

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(3)Smith降解
Smith降解是将高碘酸氧化产物还原后进行酸水解 或部分酸水解。由于糖基之间以不同部位缩合，用高 碘酸氧化后生成不同的产物，将氧化产物用硼氢化钠 还原成稳定的多羟基化合物，经水解后由气相色谱鉴 定水解产物，由降解的产物可以推断糖甙键的位置; (4)甲基化反应 将多糖中各种单糖残基中的游离羟基全部甲基化， 进而将甲基化多糖水解，水解后得到的化合物其羟基 所在的位置即为原来单糖残基的连接点。根据不同甲 基化单糖的比例，可以推测这种连接键型在多糖重复 单元中所占的比例。
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4. 微波法提取香菇多糖
微波提取法是一种新型提取法，由于溶剂及细胞液吸收微波能， 微波射线辐射于溶剂并透过细胞壁内部时，细胞内部温度升高压力 增大，当压力超过细胞的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部 的多糖就从细胞中释放出来； 5. 超声波提取法 香菇多糖的超声波(20KHz一50MHz)提取一利用超声波的空化作 用分散破坏植物组织，加速植物多糖成分的浸出提取；另外超声波 产生的机械振动、乳化和击碎效应 等也能加速多糖成分的扩散释放 并充分与溶剂混合，提高香菇多糖的得率； 6.深层发酵培养提取法 目前，香菇多糖主要从香菇子实体中提取。人工培养香菇子实体， 生产周期长达半年以上，而深层培养发酵法获得香菇菌丝体和香菇 多糖，生产周期将缩短至一周左右；一般从鲜香菇中提取多糖，得 率为6.9％左右，从干香菇中提取多糖，得率是6.72％左右，差异不 大；而香菇菌丝体的多糖得率却明显高于香菇子实体，达7.3％左右。 因此在工业生产中，此法很具竞争优势；
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五．主要活性成分—香菇多糖
5.1香菇多糖简介
英文名称： Lentinan，香菇多糖为白色
粉末状固体, 对光和热稳定, 在水中最大 的溶解度为3 mg/ mL, 能溶解于0.5mol/L 氢氧化钠，溶解度可达50g/L—l00g/L； 不溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂中。 香菇多糖具有吸湿性，在相对湿度为 92．5％。温度为25％的环境中放置15天， 吸水量可达40％。从香菇实体或菌丝中 分离的一种多糖，以β-1,3葡聚糖为主， 有免疫激活和抗肿瘤活性，香菇多糖是 从优质香菇子实体中提取的有效活性成 分，香菇多糖中的活性成分是具有分支 的β— (1—3)—D—葡聚糖，主链由β— (1—3)—连接的葡萄糖基组成，沿主链随 机分布着由β—(1—6)连接的葡萄糖基， 呈梳状结构。研究表明香菇的活性多糖 成分β—(1—3)—D— 葡聚糖对抑制异源 的、同源的、甚至是遗传性的肿瘤都有 效。
(5)高效液相色谱法
以不同分子量标准右旋糖酐(Dextran)为标准，采用凝胶色谱柱， 示差折光检测器。样品经过色谱分离后，根据浓度与峰面积关系绘制 标准曲线，待测样品经分离后得到不同分子量峰的保留时间值，通过 标准曲线计算出多糖分子量分布，选择与待测样品分子量接近的标准 右旋糖酐为基准物质，用外标法定量测定。该法最大优点是快速、准 确，但需使用昂贵精密仪器。
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三．地理分布
生态环境：冬春季生于阔叶树倒木上,群生,散生或单
生。 分布地区：山东、河南、浙江、福建、台湾、广东、 广西、安徽、湖南、湖北、江西、四川、贵州、云南、 陕西、甘肃。
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四．市场分布
随着人们生活水平的不断提高、交流不断广泛，香菇
的营养价值逐步全球人们所熟知并喜爱，近几年来全 国范围内广大农户开始大规模种植，很多地区充分利 用自身的有力天然自然条件广泛的种植香菇，逐步形 成规划化生产，通过农户合作，公司集中收购，统一 销售的方式经行对外推广，全国最大香菇生产种植基 地是河南的西峡和卢氏，西峡是最大的香菇种植基地， 卢氏是全国香菇品质最好的种植地，卢氏拥有得天独 厚的自然条件它不仅孕育了卢氏黑木耳，而且香菇鲜 美品质也逐步得到市场的广泛认可并出口海外，卢氏 县成规模的香菇生产公司如卢氏绿之源特产有限公司， 其充分利用卢氏天然的自然条件和政府支持，发展规 划越来越大，其产品已经出口韩国、日本等国家。
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5.7香菇多糖结构的鉴定
化学法
香菇多糖的结构测定方法主要有
仪器法
生物学方法[6]
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5.7.1化学法主要包括
(1)水解法
通过水解将多糖链分解成单糖，是分析多糖链组成 成分的主要方法，水解法包括完全酸水解、部分酸水 解、乙酰解和甲醇解等; (2)高碘酸氧化 高碘酸可以选择性的断裂糖分子中连二羟基或连三 羟基处，生成相应的多糖醛、甲醛、甲酸，反应定量 进行。每开裂一个C—C键消耗一分子高碘酸，通过测 定高碘酸的消耗量和甲酸的生成量，可以判断糖甙键 的位置、连接方式、支链状况和聚合度等结构信息;
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5.7.2主要的仪器分析方法主要有

高分辨率的核磁共振技术[7] 快速原子轰击质谱技术 电喷雾质谱 基质辅助激光解吸飞行时间质谱 串联质谱技术及各种色质联用技术[8] 紫外分光光度法 红外光谱法[9] 气相色谱法[10] 液相色谱法[11] 电泳法[12] 比旋光度法等
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二．营养成分及药用价值
2.近年来，美国科学家发现香菇中含有一种“β－ 葡萄糖苷酶”，试验证明，这种物质有明显的加
强机体抗癌的作用，因此，人们把香菇称为“抗 癌新兵”。香菇还能抗感冒病毒，因香菇中含有 一种干扰素的诱导剂，能诱导体内干扰素的产生， 干扰病毒蛋白质的合成，使其不能繁殖，从而使 人体产生免疫作用。香菇中含不饱和脂肪酸甚高， 还含有大量的麦角甾醇，在紫外线照射下可被转 化为维生素D2对于增强抗疾病和预防感冒及治疗 有良好效果
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5.5香菇多糖含量测定
(1)苯酚—硫酸比色法[4]

糖类物质在浓硫酸作用下脱水，生成糠醛或糠醛的衍生物，糠醛能 与芳香族化合物缩合生成红色化合物。该有色化合物在490nm有最大 吸收，测定490nm处的吸光度，就能转化为多糖浓度，这是苯酚一硫 酸法测定多糖的基本原理；
在去除蛋白质后，加入稀盐酸，加热使多糖水解转化为还原糖， 然后用高锰酸钾法进行滴定测定，总糖含量以转化糖计算其含量；
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金属络合物法: 常用的络合剂有费林溶液、氯化铜、氢氧化钡和醋 酸铅等; 层析法: 有纤维素柱层析、纤维素阴离子交换树脂柱层析、 凝胶柱层析，高压液相柱层析； 超滤法； 制备性区域电泳法[13].

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5.9香菇多糖纯度鉴定
目前常用于多糖纯度鉴定的方法通常有五种方法:
(1)比旋光度法 (2) 超离心法
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5.8香菇多糖的纯化
多糖的纯化有以下方法: 分级沉淀法:
用不同浓度的沉淀剂如甲醇、乙醇、丙酮等来分部沉 淀纯化多糖;

季铵盐沉淀法: 常用的季铵盐是十六烷基三甲基胺溴化物( CTAB) 及 其碱( CTAOOH) 和十六烷基吡啶;

盐析法: 常用的盐析剂有硫酸铵、氯化钠、氯化钾、醋酸钾等;
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5.6香菇多糖组成的测定 多糖组成的测定主要采用完全酸水解法
首先用酸将多糖水解成单糖，用来水解的酸主要 有硫酸、三氟乙酸，温度控制在100～110℃。然后直 接用纸层析、薄层层析分析单糖的组成，以标准单糖 进行对照。或对水解的单糖进行衍生化处理，采用气 相色谱或液相色谱进行测定. 1. 三甲基硅醚衍生法 衍生化方法主要有： 2.糖腈乙酰酯衍生法 3.糖醇乙酸酯衍生法
香菇多糖分子量 的测定
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一．香菇简介
香菇，又名冬菇、花菇、香菌、香 信、学名Lentinas edodes (CBrk)sing等，为侧耳科植物香蕈
的子实体。香菇是我国传统的著名
食用菌，营养丰富，味道鲜美，被 视为“菇中之王”，为“山珍”之 一。在日本，香菇被称为抗衰延年
的“妙药”。
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二．营养成分及药用价值
(3) 高压电泳法
(4)纸层析或薄层层析
(5)凝胶色谱法
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(1)比旋光度法
不同多糖具有不同的比旋光度，它们在不同浓度 的乙醇溶液中溶解度不同。多糖水溶液经不同浓度的 乙醇沉淀，如所得沉淀物具有相同比旋光度，则证明 该多糖为均一组分; (2) 超离心法 微粒在离心力场中沉降的速度与微粒的密度、大 小和形状有关，如果某一多糖在离心力场作用下形成 单一区带，说明该多糖具有相同的沉降速度，表明其 分子的密度、大小形状相似;