三磷酸腺苷检测法
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三磷酸腺苷检测法(ATP法)
1.ATP反应液(Bio-Orbit)是粉末状混合物,含有荧光素、荧光素酶、0.5mmol 醋酸镁、50mg BSA和0.1μmol无机焦磷酸。
在4℃可以保存1个月。
用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸缓冲液稀释。
稀释液分装后可在-20℃长期保存。
2.在已经完成促增殖或抑生长试验后的96孔细胞培养板中(每孔含100μl细胞培养液),每孔加0.1ml ATP释放因子,室温中反应5分钟。
取另一块96孔细胞培养板,从第一块板的各孔中吸0.1ml细胞溶解物到第二块板的相应各孔。
3.在低于25℃中,将第二块板置自动多孔荧光检测仪中。
用自动加样器,每孔加入20μl ATP反应液,立即检测10秒钟的荧光强度。
温度升高,检测敏感性就下降。
4.用RLU(Y轴)对细胞因子标准品的稀释度(X轴)作标准曲线,根据标准曲线确定待测样品中细胞因子的含量。