免疫磁珠分选原理及应用 ppt课件

autoMACS分选仪
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MACS 微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺 磁化微粒，可用于目的细胞的磁性标记。
• 特性：
50nm大小 对细胞没有毒性 可生物降解 不影响细胞特性
MACS技术分选的CD8+ T 细胞
微珠
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MACS微珠
直标微珠 多选微珠
间标微珠
MACS技术
设备与试剂
• MACS分选柱：
》填充有不同规格的铁珠。 》铁珠表面有亲水包被，不损伤细胞。 》无菌包装。 》可用于分选多种细胞及亚细胞物质、
• LD分选柱：1盒25个，5100元
• uMACS与u或者M分选柱：分子生物学分选
• VarioMACS分选仪
• autoMACS自动分选仪、CliniMACS分选仪
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MACS几种畅销磁珠与抗体
• 专利产品：CD133、CD303、CD304
• 特殊产品：人类DC系列：BDCA-1(CD1c)、BDCA-2(CD303)、 BDCA-3(CD141)、BDCA-4(CD304)
细菌、病毒、mRNA和蛋白质。
• 专利产品 • 将磁场扩大1000－10000倍—
—高纯度，高回收率
在MS柱中产生的强大磁场
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MACS技术
设备与试剂
• MACS分选柱：
MACS技术
设备与试剂
• MACS分选器：从手动到自动，从实验室到临床
MACS技术
设备与试剂
• MACS分选器
MACS技术主要优势
• 小磁珠: 50 nm（快速、不活化细胞、不沉淀）
• 保留细胞功能（直接进行后续实验；无毒性；氧化 铁和多聚糖组成，可生物降解）
• 与流式细胞仪兼容（不影响细胞光学特性、不影响荧 光抗体标记、与流式细胞仪分选联合使用可以缩短流 式分选时间）
• 快速、简便、无菌
• 适用范围广（磁珠种类多、从少量到大量、适用于分 选各种细胞、亚细胞物质）
免疫磁珠分选原理及应用
Miltenyi Biotec: 免疫磁珠分选技术及应用
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内容
• MACS技术原理 • MACS技术设备及分选策略 • 几种特殊的MACS分选
分选和分析DC细胞 分选各种T细胞 分选和分析细胞因子分泌细胞 分选造血干细胞 分选人类肿瘤细胞 分选和分析凋亡和死亡细胞 分选转染细胞 分子生物学和蛋白生化的分选
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去除后再阳性分选CD4+CD25+双阳性细胞
1. 去除非CD4+ T 细胞。 用生物素化抗体混合物和抗生物素微珠间接磁性标 记非CD4+ T 细胞 磁性分选去除标记细胞
先行流出为 CD4+ T 细胞
2. CD25微珠直接磁性标记CD25+细胞
阳性分选靶细胞
CD4+ CD25+ 调节性T滞留在分选柱上，离开磁场后 洗脱下来
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阳性分选策略
MACS® 微珠磁性 标记
未标记细胞先行流出
将分选柱移 出Fra Baidu bibliotek场，洗 脱阳性分选
细胞
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MACS细胞分选策略
2、去除分选：
• 去除分选是磁性标记非目的细胞，并将其从细胞混合物中去
除，即未磁性标记的细胞为目的细胞。
• 去除分选策略适用范围：
》去除不需要的细胞 》缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤细胞） 》不需要抗体和目的细胞结合 》需进一步通过阳性选择分选细胞亚群
MACS微珠进行 磁性标记
洗脱阳性分 选的细胞
未标记的细胞 先行流出
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分选前标本制备：过滤
MACS预选滤器： 30m
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MACS 技术
设备与试剂
» MACS微珠 » MACS分选柱 » MACS 分选器 » 详细分选方案*
MD0197.02
MACS技术
设备与试剂
• MACS微珠：
• Mini&MidiMACS starting kit：1个分选架、1个MiniMACS分选器、 1 个MidiMACS分选器、1盒MS分选柱、 1盒LS/LD分选柱、1支价值7500元试剂 （27838元）：可做阳性分选和去除分选
• MS分选柱：1盒25个，2763元
• LS分选柱：1盒25个，4356元
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MACS技术原理
MACS(Magnetic Activated Cell Sorting)： =免疫学+细胞生物学+磁力学
• 基于抗体对抗原的特异性识别 • 磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连 • 在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性分离的目的
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MACS® 磁性分选
MACS细胞分选策略
4、多选微珠：
多选微珠标记
MACS 分选
磁性颗粒的酶解离
终止解离反应
根据第二标志 进行磁珠标记
MACS 分选
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MACS畅销机器与分选柱
• MiniMACS starting kit：1个分选架、1个MiniMACS分选器、1盒MS 分选柱、1支价值7500元试剂（15088元）：可做阳性分选、小量标本、间标去 除分选、分子生物学分选
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去除分选
磁性标记
分选未磁性标记细胞
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MACS细胞分选策略
3、去除分选后再阳性分选：
• 即先去除非目的细胞，再进行阳性分选。 • 适用范围：
》非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原。 》要分选非常稀有细胞，先去除非目的细胞再行阳性分选，
可获得高纯度的目的细胞。
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MACS® 细胞分选策略
• 阳性分选 • 去除分选 • 去除分选后再阳性分选 • 多重分选
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MACS细胞分选策略
1、阳性分选：
• 根据特异性标志分选细胞: 阳性分选是指目的细胞磁性标记
后，作为阳性的标记组分直接分选出来。
• 优点：
》高纯度，尤其是富集稀有的细胞 》高回收率 》操作简便、迅速
小鼠DC系列：mPDCA微珠与抗体 干细胞产品： CD133、CD271微珠与抗体 细胞因子分泌细胞：CSA分选与分析 TH2细胞： CD294(CRTH)微珠与抗体 分选人类肿瘤细胞：上皮肿瘤：CK、HEA