猪链球菌的检测和鉴定技术

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猪链球菌的检测 及鉴定技术
链球菌的分类
根据各自的种名,如猪链球菌、肺炎链球菌、化脓链球菌等 • 1986,38种;2002,60种,从链球菌属成员中划分出去新
成立了6个属Abiotrophia , Granulicatella , Dolosicoccus , Facklamia, Globicatella , and Ignavigranum • 鉴定不易:常见的、 β溶血链球菌相对容易,新发现、不 常见、非β溶血链球菌非常困难 • VITEK COMPACT 2,35种,包含了新成立的4个属,领先水 平
开(真空充填时除外),装载仓门常处 于电子锁闭状态
– 两个仓门旁均有独立的LED指示灯
• 此外仪器包含废物收集仓,仓门可随时
打开进行清理
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系统组成
仪器主机: • 仪器还包含两个用户门可打开——顶端
用户门和正面用户门 – 在用户操作界面进行控制 – 两个门打开后可抵达内部的孵育箱和光
学读数组件,可进行维护清理
• 虚拟卡架(Virtual Cassette)模式
– 用户必须设置完虚拟卡架斱可进行充填加载,通过扫描条形码将卡
架、卡片信息传输至计算机,补齐样本信息,建立虚拟卡架
– 仪器装载孵育后,读取条形码,不事先输入的信息做比较 – 保证了可溯源性,减低误差保证信息的安全
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基本操作
常用工作流程(Virtual Cassette)可概括为:
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工作原理
读数仪内部光路利用滤光片来 发变换读数斱方式: • 4个有色滤光片(橙、紫、蓝、
绿)检测比色试条各反应孔在不 同波长下的透光率
• 1个无色的光路利用透光强度T和
散射强度S检测比浊试条各反应 孔的透光率(散射测浊)
试条
26Leabharlann 基本操作结果判读仍基于生物编码原理: • 试条可借助读数仪迚行判读 • 大部分试条也可肉眼迚行判读(除ID32 GN外)
2021/5/2
API系统
API微生物鉴定系统以微生物生化理论为基础,借助微生物信 息编码技术,为微生物检验提供了简易、方便、快捷、科学的 鉴定程序。
: API鉴定原理 根据微生物对各种生理条件(温度、pH、氧气、渗
透压)、生化指标(唯一碳氮源、抗生素、酶、盐碱性)代谢反应进行 分析,并将结果转化成软件可以识别的数据,进行聚类分析,与已知的 参比菌株数据库进行比较,最终对未知菌进行鉴定的一种技术。
革兰染色
卡片准备
信息连接
真空充填
报告结果
装载孵育 42
基本操作
不断升级的系统软件:
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系统特色
VITEK 2 Compact系统的优点包含: • 采用“金标准”基础上开发的智能型试卡,增强了比色和比浊方
法、更多类型底物的融合
• 极好的(Excellent)鉴定:id%>99.9,T>0.75
• 非常好的(Very good)鉴定:id%>99.0,T>0.50
• 好的(Good)鉴定:id%>90.9,T>0.25
• 可接受的(Acceptable)鉴定:id%>80.0,T>0
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猪链球菌的API鉴定结果
API STREP-20生化鉴定
Ref.21343:YST酵母菌鉴定卡
可用于鉴定酵母样真菌(念珠菌、丝孢酵母)及部分隐球菌
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工作原理
光学读数组件分为2个,同步读数可对试卡每个孔的透光 率迚行检测: • TX1覆盖1个波长,适合试卡比浊反应孔(鉴定卡的同化反应及
药敏卡)
• TX3覆盖2个波长,适合鉴定卡的比色反应孔
660nm 428-568nm
– 2个光学读数组件可覆盖3个波长,在孵
育的过程中每15min进行一次光学读数
• 主机右侧有独立的开关,控制主机的通
电状态 – 主机的运行状态可在用户操作界面进行
关闭
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条形码
试卡组成
光学排列标记
预先插好 的接种管
路轨
风干底物
半透膜密封设计 37
试卡组成
鉴定卡类型及适用菌群:
Ref.21342:GP革兰氏阳性细菌鉴定卡
可用于鉴定革兰氏阳性球菌(葡萄球菌、链球菌和肠球菌)及短杄 菌(李斯特菌)
Ref.21341:GN革兰氏阴性细菌鉴定卡
可用于鉴定革兰氏阴性杄菌(肠杄菌科细菌、非发酵菌、弧菌和假 单胞菌等)
Ref.21347:ANC厌氧菌及棒状杄菌鉴定卡
可用于鉴定厌氧菌(梭菌、乳杄菌、双歧杄菌)、部分棒状杄菌及 放线菌
2021/5/2
2021/5/2
全Windows操作界面,多种语言。
2021/5/2
API结果
两个重要概念:
• 鉴定百分率(id%):根据分类单位在数据库中近似程度进行分
类,最接近100%。
• 典型T值:表示实际生化反应与最典型反应的近似程度,最接近
1。
反应结果X
典型反应
A
B
C
根据id%与T值的组合,作出结果的正确评价:
读数仪
比浊仪 电子加样枪
计算机 打印机
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试条组成
试条种类:
24h常规鉴定试条
Ref.32400,ID32 E Ref.32100,ID32 GN Ref.32500,ID32 Staph Ref.32200,ID32 C
4h快速鉴定试条
Ref.32700,rapid ID32 E Ref.32300,rapid ID32 A Ref.32600,rapid ID32 Strep
Ref.21345:BCL芽孢菌鉴定卡
可用于鉴定芽孢杄菌
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试卡组成
鉴定卡类型及适用菌群:
Ref.21348:CBC棒状杄菌鉴定卡
可用于鉴定革兰氏阳性无芽孢的杄菌(棒状杄菌、乳杄菌)、短杄 菌及部分放线菌
Ref.21346:NH奈瑟菌、嗜血杄菌鉴定卡
可用于鉴定苛养的革兰氏阴性双球菌(奈瑟球菌)、杄菌(嗜血杄 菌)及弯曲菌
• 电子比浊仪DensiCHEK Plus • 盐水分配器 • 配套充填卡架 • 配套加样枪
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系统组成
仪器主机: • 包含用户操作界面的屏幕和按键
– 可显示仪器的日常状态 – 可进行卡架的充填和一部分仪器设置、
日常维护
• 最主要的功能集中于两个仓——充填仓
和装载仓 – 分别有独立的仓门,充填仓门可随时打
– 微生物分类变化 – 新菌种的生物学描述 – 已知菌种生化特点的变化
• 基于数码参照的可靠结果(id%、T)
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系统组成
VITEK 2 Compact是一套全自动的系统,用于鉴定细菌 和酵母菌,并检测微生物对抗生素的敏感性。 • 仪器主机 • 条码扫描枪 • 计算机(显示器、键盘、鼠标) • 打印机 • 稳压电源UPS
分析
电子比浊仪 DENSIMAT
电子连续 加样枪
自主孵育
数读仪判读 软件数据库
分析
电子比浊仪 DensiCHEK
Plus
仪器整合的 充填仓
仪器整合的 培养箱
仪器整合阅读 软件数据库
高级报告工具
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微生物鉴定全面解决方案
手工革兰氏染液
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系统组成
ATB New是一套半自动的系统,用于鉴定细菌和酵母菌 ,并检测微生物对抗生素的敏感性。
羊血平板均为α溶血 马血平板为α溶血或β溶血 • 革兰氏阳性球菌,成对或成链 • 过氧化氢酶试验阴性 过氧化氢酶试验是链球菌与葡萄球菌区别的重要反应
猪链球菌的血清型
• 血清学的方法对其进行分型。根据荚膜 多糖抗原的差异,用凝集试验等方法可 进一步将猪链球菌分为35个血清型,用 阿拉伯数字表示,即1~34和1/2 型。
链球菌的分类
溶血性分类: 1903 Shottmuller
• α溶血 不透明的草绿色溶血环。红细胞不完全溶 解,过氧化氢使血红素氧化成为草绿色的正铁血 红素。这类细菌致病力不强,多为条件性致病菌 。甲型
• β溶血 完全透明的溶血环,红细胞完全溶解。 这类菌致病力强 ,常引起人及动物各种疾病。乙 型
粪肠球菌
7143711 (98.7%)
猪链球菌的API鉴定结果
TRE(海藻糖)、RAF(棉子糖)等几个的试验与API 菌种库有些不符,但 都属于SS2型或1型,数值分类
相对于双歧分类的优点
ATCC43765
HA9801
ATCC35246
32210 化脓链球菌
粪肠球菌
编码 4641427(92%) 4651427(80%) 0461607(99.9%)0161415(99.9%)7143711(98.7%)
猪链球菌的API鉴定结果
API STREP-20检测结果
特 性 Character
乙酰甲基甲醇 VP 马尿酸盐 HIP 七叶灵 ESC 吡咯酮基芳胺酶 PYRA α-半乳糖甙酶 α-Gal β-葡萄糖醛酸酶 β-Gur β-半乳糖甙酶β-Gal 碱性磷酸酶 Pal 亮氨酸芳胺酶 Lap 精氨酸双水解酶 ADH 核糖 Rib L-阿拉伯糖 Ara 甘露醇 Man 山梨醇 Sor 乳 糖 Lac 海藻糖 Tre 菊根粉 Inu 棉子糖 Raf 淀 粉 Amd 糖 原 Glyg β-溶血 β-Hem 编码
8孔
对 齐
TX1
TX3
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基本操作
有两种工作模式供选提高灵活性: • 装载即走(Load and Go)模式
– 用户只需在打印表中记彔样本信息后,直接完成充填和装载 – 仪器装载孵育时,通过条形码记彔卡片类型、批号等相关信息,并
传输至计算机
– 用户可在空闲时输入补齐样本信息 – 分流处理更灵活,节约劳劢力
ATCC43765
+ + + + + + + + + + 4641427 (92%)
HA9801
+ + + + + + + + + + + 4651427 (80%)
ATCC35246
+ + + + + + + + + 0461607 (99.9%)
32210 化脓链球菌
0161415 (99.9%)
无污染病料
污染病料
触片镜检
动物产品 选择性 THB 增菌液
普通琼脂羊血平板
选择性普通琼脂羊血平板
氧化酶和触酶阴性、G+球菌
乳糖+、海藻糖+,七叶苷+、 甘露醇-、山梨醇-,马尿酸钠-
鉴定为链球菌 2 型血清凝集试验 鉴定为猪链球菌 2 型
荚 摸 基 因 PCR 检测
溶血素、MRP、EF 等毒力因子检测
• γ溶血 菌落周围无溶血现象。一般为非致病菌。 丙型
• 溶血性分类在鉴定链球菌的致病性方面有一定的 意义,但初步分类,意义有限;
• 区分α溶血和γ溶血意义也很有限,现可分为β溶血 和非β溶血
• 溶血性受多种因素的影响,特别是猪链球菌
猪链球菌的特性
• 兼性厌氧 • 血平板上菌落较小(受基础培养基影响) • 血平板上溶血性较弱
– 根据颜色或浊度发化,在产品插页的记彔表格中填入+或者-,通
过代码获得11位的数值谱,而后输入ATB New软件
+ -+ + - … 1 24 1 2 4…
1 04 1 0 0

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系统特色
ATB New系统的优点包含: • 采用“金标准”基础上开发的即用型试条,传承了标准化的方法 • 借助配件实现自动化配制、自动化接种和自动化判读 • 完整并不断完善的数据库,针对如下几方面进行定期升级:
• SS2型是临床上分离率最高的一种,其次 为SS1型。
• SS2型:人畜共患
猪链球菌2型分离鉴定操作规程 GB/T 19915.2-2005
– 范围
• 本规程规定了猪链球菌2型分离鉴定的操作方法。 • 本标准适用于猪及其产品中猪链球菌2型的分离鉴定,也
可用于送检菌株的鉴定。
菌株
猪链球菌 2 型检验程序
2021/5/2
API试条组成
•API 20E /RapiD 20E革兰氏阴性杆菌鉴定 •API 20NE非发酵菌鉴定 •API STAPH葡萄球菌及微球菌 •API STREP链球菌鉴定 •API 20C AUX酵母菌 •API 20A厌氧菌 •API LISTERIA李斯特菌 •API CAMPY弯曲菌属 •API CORYNE棒状杆菌 •API CH芽胞杆菌/乳酸杆菌
•根据国标,以猪链球菌为例(参照GB/T19915.2-2005) •猪链球菌2型分离鉴定操作规程:
a. 样品采集 b.分离培养 c.初步鉴定 (菌落形态,革兰氏染色,过氧化氢酶试验) d.生化鉴定 (经初步鉴定后,做海藻糖,七叶苷,甘露醇等糖发酵试验或应用法国 生物梅里埃公司API20strep生化鉴定系统进行生化鉴定) e.玻片凝集试验 f.实验结果分析判定
4641437(79%) 4651437(57%)
4641423(35%)
TRE,RAF,HEM TRE,RAF,HEM
RAF,HEM
RAF,HEM
TRE,RAF
微生物鉴定全面解决方案
系统名称 自动化程度
手工
自动
全自动
菌悬液配制
试条/试卡 接种
手工比浊管
手工加样
培养条件 自主孵育
判读分析
肉眼判读 软件数据库
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