高效液相色谱法测定蔬菜与水果中拟除虫菊酯类农药残留量

高效液相色谱法测定蔬菜与水果中拟除虫菊酯类农药残留量

摘要：本实验采用超声分散，液相萃取，柱子吸附分离技术，结合高效液相色谱法测定蔬果中拟除虫菊酯类农药的含量可以取得较满意的结果。此方法操作便捷可广泛应用于蔬果中农药含量的测定。

关键词：拟除虫菊酯高效液相色谱农药含量

引言

农药是当前农业生产用于防治病、虫、杂草对农作物危害不可缺少的物质，对促进农业增产有极重要的作用。随着农业科学技术的发展，化学农药的品种和数量不断增加，已成为防治病虫害的主要手段。农药施用到农作物上以后，一部分因多种原因而转移到环境水体中，对人、畜产生一定的危害。鉴于此，为保障我国人民的身体健康、有效对农药在环境水体中的残留量进行监控，大力开展农药残留量检测技术以及相关的前处理技术的研究是非常必要的。拟除虫菊酯类农药具有高效、低毒以及生物降解快的特点，广泛用于蔬菜、茶叶等农作物种植中害虫的防治。已报道的拟除虫菊酯类农药残留量测定方法主要有气相色谱法( G C ) [ 1 - 4 3 ，由于一些拟除虫菊酯具有热不稳定性，而 G C法需要较高的汽化温度，它们会发生一定的分解，从而对分析产生影响。因此，我们考虑采用高效液相色谱法 ( HP L C ) 分析拟除虫菊酯类农药。

在我国制定的蔬果中拟除虫菊酯类的农药最高残留量国家标准为：氯氰菊酯0.2mg/kg(GB 4829.4-1994);氰戊菊酯0.2mg/kg（ＧＢ14928.5-1994）；溴氰菊酯0.2mg/kg （GB4828.4-1994）本实验直接采集新鲜的的蔬菜与水果样品，样品经过制备提取，净化和浓缩等预处理过程制备成为样品测试液以后，用液相色谱外标法（标准曲线法)测定以上三种拟除虫菊酯类农药的残留量。

正文

1 实验部分

1.1 仪器

高效液相色谱仪，马弗炉，剪刀，电子天平，超声波提取器，离心机，恒温水浴槽。

1.2 试剂

l)有机溶剂:丙酮(农残级)，正己烷(农残级)。

2)层析剂:无水硫酸钠(A. R. )，层析中性氧化铝(A. R.),60~100目佛罗里(Florisil)硅藻土，玻璃棉。以上层析剂均在650℃马弗炉中灼烧4h 后保存在干燥器中备用。

3)农药标准品与纯度:氯氰菊酯(cypermethrin) 96%氰戊菊酯(fenvalerate )94. 3%，溴氰菊酯(deltamethrin)97.5%。

4)农药标准溶液的配制。

①单标准储备液:以市售的氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯农药标准品以正己烷为溶剂配制成适当浓度的单标准储备液。

②单标准中间液:用正己烷将单标准储备液稀释成适当浓度的单标准中间液。

③单标准使用液:用正己烷分别将3个单标准中间液稀释成含氯氰菊酯200μg/mL 。氰戊菊醋100μg/mL 和溴氰菊酯200μg/mL 的单标准使用液。

④混合标准使用液:用正己烷将3个单标准中间液混合稀释成含氯氰菊酯20.0μg/mL,氰戊菊酯10.0μg/mL 和溴氰菊酯20. 0μ5g/mL 的混合标准使用液。

1.3 实验步骤

1.3.1 样品的制备与提取

称取经剪刀绞碎的新鲜蔬菜与水果样品10g 于50mL 带盖塑料离心管

中，根据样品含水量多少加入适量的无水硫酸钠除水。然后向离心管样品中加入13mL 丙酮:正己烷((3:10，体积比)混合溶剂，混匀后在超声波提取器中提取大于10min ，将离心管上层提取液转移至l00mL 烧杯中。逐次向离心管样品残渣中加入5mL,3mL 混合提取剂，重复以上萃取、离心分离操作两次，合并离心管上层提取液至同一烧杯中。若合并提取液中还存在水分，再加适量无水硫酸钠除水。

1.3.2 柱层析净化与浓缩

在30cm(长)X lcm(内径)玻璃管层析柱底部加少许玻璃棉按顺序分别装上无水硫酸钠、中性氧化铝和60~100目佛罗里硅藻土各约1. 0cm 高度，轻轻敲实（也可在实验之前预先做好）先用3 mL 丙酮预洗层析柱，弃掉淋洗液。再将烧杯中的祥品提取液全部转移至柱内用3mL 丙酮:正己烷((1:2，体积比)混合洗脱剂洗脱3次，收集洗脱液于接液管中。

将接液管置于50℃恒温水浴中用氮气吹脱至洗脱液体积少于0. 30mL ，再转移浓缩后的洗脱液至2ml 的样品瓶中，用正己烷定容至1mL ，加盖密封，置于冰箱（0~4℃)中保存。(如果时间比较紧的话，低温保存这一步可以省略）

1.3.3 测定

1）色谱操作条件

色谱柱 ODS-18C （250mm*4.6mm,5L )

检测波长 230nm

流动相 乙腈

流速 1ml/min

进样 20L

并且设位置好其它工作条件还有如柱温，进样口温度，检测其温度，升温速度等。

2）操作方法

♤仪器开机预热运行稳定后你，在色谱工作站上设置色谱仪参数空运行一次，待色谱基线平稳后即可进样测定。

♤外标法(标准曲线法)系列溶液的测定

在实验前先准备三个标准系列溶液的测定数据，在实验时，再测定本次实验的数据，记下对应时间下的积分面积。

♤摇匀待测液体，先用待测液清洗进样器，用进样器吸取10μL的待测液，待色谱就绪后，打开进样阀，将进针头插入进样阀，稳定均匀进样后，拔出针头，扳下进样阀，待绘制完整的色谱图。

3）注意事项

1.新鲜蔬菜与水果样品的含水量较大，因此预处理过程中要注意除水，切不可将含水分的样品制备液进样。

2.在开启色谱仪之前，要先开通载气几分钟。实验结束后要先关仪器，再关闭载气。

2 结果与讨论

2.1数据记录与处理

浓度/10^-7mol/L 保留时间/min 峰面积/A 工作曲线10^5 1.131 26309.9

氯氰菊酯10^3 1.108 1825.10472

正己烷溶液10 1.146 78.71239

根据上表绘制氯氰菊酯（正己烷溶液）的工作曲线