A群轮状病毒检测操作规程

1．检验目的

轮状病毒是在全世界范围内造成婴幼儿急性肠胃炎的主要因素。在我国，每年春秋冬季均有一个婴幼儿腹泻的发病高峰，病原学研究证实，这些病例的40%-60%是由轮状病毒引起的。通过检测粪便标本中A群轮状病毒抗原，适用于临床婴幼儿腹泻患者A群轮状病毒感染的辅助诊断。

2．方法原理

以抗A群轮状病毒多克隆抗体包被硝酸纤维素膜、以胶体金标记的小鼠抗A群轮状病毒VP6单克隆抗体为结合物，利用免疫层析原理来检测粪便标本中的轮状病毒抗原。（胶体金法）

将试纸条插入用稀释液稀释好的标本中后，胶体金结合物与标本一起移动，当移动至硝酸纤维膜上的抗轮状病毒多抗时，如果标本中含有轮状病毒，则胶体金-轮状病毒结合物会与抗轮状病毒多抗结合，5-10分钟出现红色的检测线。多余胶体金结合物继续移动，将与包被在膜上的羊抗鼠IgG抗体结合，形成另外一条红色的对照线。

3．标本采集与处理

3.1在症状出现以后尽快收集粪便标本，无特殊要求。

3.2样本应该当天立即检测，如果不立即检测可在2-8℃冰箱保存1-2天。长时间保存需要于-20℃冷冻，使用前彻底解冻并回复到室温再检测。

4．分析系统

4．1分析试剂：北京万泰生物药业股份有限公司提供的配套的A群轮状病毒诊断试剂盒，规格为10test/盒，2-30℃干燥贮存，有效期18个月；在效期内使用试剂。

5．操作方法

如果在冰箱保存试剂盒，在使用前将试剂盒回复至室温。

5.1旋开滴管，取出采便勺，收取粪便1勺（100mg），放入有样本稀释液（生理盐水0.5ml）的滴管中，旋紧。

5.2振荡混匀，折断滴管上的盖帽。

5.3垂直而缓慢滴加2-3滴混匀后的样本（80ul）至测试卡加样中心。

5.4 5-10分钟内判读结果，不可超过10分钟。

6．结果判定

质量控制：出现对照线试验有效，反之，试验无效，应重新检测。

6.1阳性：出现两条红色线。

6.2阴性：只出现一条对照线。

7. 结果解释

7．1对于检测结果阳性的标本，临床医生须结合临床信息和试验结果综合评价。

7．2由于反应原理的限制，对于阴性结果不排出A群轮状病毒感染可能。8．注意事项

8.1本试验仅能检测粪便标本中A群轮状病毒抗原，不能检测其他轮状病毒；仅能定性检测，不能定量检测；

8.2仅供体外诊断用；

8.3 开启后要放置在干燥的环境中贮存，尽量在15周内用完；

8.4 不同批号的组分不要混用；

8.5 操作标本时请遵照GLP的要求进行。

8.6不要使用放置时间过长，长菌或反复冻融的样本，以避免这些非特异性的反应。

8.7采样过量，过稠，导致稀释后的样本堵塞检测卡，请取上清液检测。

8.8在规定的时间内，即使检测线的色带非常弱也判为阳性。

8.9试剂盒，在使用前将试剂盒回复至室温。

8.10测试卡在打开包装20分钟内使用，过长会影响结果。

8.110分钟后的结果无临床意义。

8.12样本视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

9．安全防护

9．1对任何一份标本（包括质控品、标准品及检测试剂等）都应视其为具有传染性，操作人员在工作时应戴乳胶手套、穿工作服。

9．2一旦发生标本容器划破手或身体、液体溅进眼睛等粘膜处，应立即用大量的水冲洗，同时向上级医师或科领导报告，必要时施以丙种球蛋白预防。10．常见的误差源

10．1试剂原因：试剂过期等。

10．2标本原因：标本处理、收集不符合要求等。

10．3人为原因：结果填写错误等。

11.引用文件

北京万泰生物药业股份有限公司提供的配套的A群轮状病毒诊断试剂盒说明书。

【操作规程修改规定】

本操作规程自制定之日起开始实施,各实验人员必须严格按照本规程操作,若本仪器,实验方法更新或有新仪器,新方法,新技术应用于临床,则对本操作规程进行修改。