第21章 临床生化检验方法与试剂盒评价

第27页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（四）线性试验
线性试验用来评价剂量和反应之间的线性关系，并把呈直 线部分确定为线性范围（linear range）。线性范围指检 测信号与被测物浓度呈线性时的被测物浓度范围。 1.样品浓度 线性评价至少应有5个不同浓度，可选择低值 和高值样品各一份，低值样品和高值样品分别按体积3：1 混匀、等份混匀、1:3 混匀，形成5个不同浓度。 2..试验方法 将不同浓度的样品（X），随机排列，每个样 品重复测定4次（Y），并要求在当天完成所有分析。
源自文库
第 9页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
标准品与校准品
大多数定量的方法（分光光度法、电化学、免疫定量） 都需要用标准品校准，即通过标准比较来计算。校准 是这些方法定量必经的过程。
用什么“标准”来校准？
罗氏公司的C.f.a.s （calibrator for automation system），属于多项校准品，因使用方便，很多实验室都在 使用。但前提是“指定的测定系统”。
第12页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
测量不确定度
测量不确定度是指表征合理地赋予被测之值的 分散性。是与测量结果相联系的参数，可理解 为排除系统误差之外的所有随机误差的合成方 差。
第13页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
图21-2 量值溯源和量值传递途径
第14页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（三）干扰试验 干扰是指在测定某分析物时，受其他非分析物的影响而导致测 定结果增高（正干扰）或降低（负干扰）。根据干扰的产生原 因分为：基质效应、非特异反应、外部干扰物等。
干扰试验的设计同回收试验，即将不同浓度的干扰物代替纯标 准品。一般规定只对胆红素、血红蛋白、脂类做干扰试验。 干扰值＝加入干扰物后的测定值－基础测定值
第29页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（六）检测限
检测低限通常是指能与适当的“空白”读数相区别的待测物的最小 量。方法是做空白平行试验（一般 20 次），以蒸馏水调零，读取各 次吸光度，计算均值（Ab）和标准差(S)。以Ab+3S表示与“空白” 读数相区别的最小吸光度，将其换算成浓度，作为该法的检测低限。
第 5页
决定性方法 `
参考方法 `
常规方法 `
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
决定性方法（definitive method）也称为一级参 考方法（primary reference method) 参考方法（reference method）也称为二级参考 方法（secondary reference method） 常规方法（routine method）；推荐方法 （recommended method）
第25页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（二）回收试验
所谓回收即评定方法正确测定加入常规样品中的
纯分析物的能力。即在未知浓度的常规样品中加入一
定量的待测组分，检测加入前后该组分的增加量，实 际增加量与理论加入量的比值就是回收率。目的是测 定比例系统误差 。
第26页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
双缩脲法
苦味酸法、酶法 二乙酰一肟法、酶法 磷钨酸比色法 J-G 法、钒酸盐氧化法 葡萄糖氧化酶法 酶法 酶法
第 7页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
二
临床生化检验的参考物质和校准品
原级参考物质 `
（primary reference materials）也称一级标准品， 与决定性方法平行，用于验证决定性方法、评价与 校准参考方法，以及为二级标准品定值。
次级参考物质 `
（secondary reference materials ）也称二 级标准品 ，二级标准品的定值源于一级标准 品和参考方法，主要用于评价常规方法，也可 为质控物定值。
校准（calibration）指的是对由仪器、方法和试 剂所组成的检测系统的校准过程。 电解质、酶类、其他生化指标应合理选择校准品
第 4页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
一
临床生化检验方法分级
是指准确度最高，系统误差最小，经过详 细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些 方面不够明确的方法。 是指准确度与精密度已经充分证实的分 析方法，干扰因素少，系统误差与重复测定的 随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、 特异性及较宽的分析范围。 是指性能指标符合临床或其他目的 需要，有足够的精密度、准确度、特异性和 适当的分析范围，而且经济实用。
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
教学目标与要求
` 掌握
校准品的分类和正确使用；测定系统的 概念和比对；试剂盒的性能指标和评价 方法。 方法学性能指标和评价；量值溯源和量 值传递的概念；液体双试剂的优点。
` 熟悉
` 了解
试剂盒的分类和发展趋势。
第 2页
钾
钠 清蛋白
ID-MS、中子活化法
中子活化法 -
火焰光度法
火焰光度法 免疫化学法
离子选择电极法、火焰光度法
离子选择电极法、火焰光度法 溴甲酚绿法
总蛋白
肌肝 尿素 尿酸 胆红素 葡萄糖 胆固醇 甘酒三脂
ID-MS ID-MS ID-MS ID-MS ID-MS ID-MS
凯氏定氮法
离子交换层析法 尿素酶法 尿酸酶法（紫外） 重氮反应法 已糖激酶法 Abell-Kendall 法 变色酸显色法
2
3
保证仪器良好的工作状态、严格的操作规程和质量 控制、实验室内部测定系统的比对、实验室间的比 对
第19页
第19页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
第二节
一 二 三 四
临床生化检验方法的性能评价
方法学的性能指标
方法学性能评价的内容 方法学评价试验
临床生物化学方法学性能判断
第20页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
第23页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
三 方法学评价实验
回收试验 干扰试验 线性试验 对比试验
检测限与检测范围 度 确
准
重 复 性 试 验
批内 批间 日内 日间 总不精密度
第24页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（一）重复性试验
1.试验样品 一般选择2个，一个在参考区间附近，另一个为异常值
第10页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
图21-1 各级参考物质和校准品的关系及其量值传递过程
第11页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
三
量值溯源 溯源性
溯源性(traceability）是指通过一条具有规定不确 定度（uncertainty）的不间断的比较链，使测量 结果或测量标准的值能够与规定的参考标准（通 常是国家或国际测量标准）联系起来的特性，称 为溯源性。其不间断的比较链称为溯源链。
第28页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（五）对比试验 对比试验是指分别用两种方法测定一组临床不同浓度和病 理情况的样品，测定结果进行回归分析。 比较方法应选择参考方法或公认的常规方法，测定偏差主 要来源于评价方法。 1.试验样品 应收集新鲜的正常和异常的临床样品，应有足够 宽的浓度范围，各浓度样品数量应有合适的比例。 2．样品测定 样品数至少为40个，每个样品用2种方法分别作 双份测定。每天测定8个样品，双份测定时第一次按顺序1， 2……7，8，第二次8，7……2，1，共测试5天。
自建检测系统
实验室自行建立的检测系统，如A制造商的试剂盒、 B制造商的校准品、C制造商分析仪的组合。
第16页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（二）检测系统比对的实施步骤
①制订分析质量目标 ②仪器性能评价 ③确定对比检测系统
④初步评价检测系统 允许不精密度、允许偏倚和 允许总误差 准确度和精密度
标准品(standard）可用做校准品（calibrater），考虑 血清成分复杂、难以避免基质效应 ，建议用与新鲜血清 相似的介质做校准品，一般由试剂盒供应商提供和赋值。 校准品的量值应有溯源性，不同测定系统赋值不同。
质控品
质控品多是成分相对稳定的混合血清，分为定值和非定值、冻 干或液体，添加了防腐剂和保护剂等。定值往往由试剂盒供应 商委托几家实验室在特定测定系统上测得的均值和标准差。
第 6页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价 表21-1 临床生化检验项目的决定性方法、参考方法、常规方法 项目
钙
氯 镁
决定性方法
ID-MS
ID-MS、中子活化法 ID-MS
参考方法
原子吸收分光光度法
电流滴定法 原子吸收分光光度法
常规方法
邻甲酚酞络合酮法、MTB法
硫氰酸汞法、选择性电极法 MTB 法
参考系统或 公认的测定系统
步 内
性能指标
骤 容
⑤比对
40-100例
可接受性判断
第17页
测定系统的关键要素
方法学 试剂配方 和来源
测定系统
操作程序
校准品 仪器
第18页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
全球性可比性战略实施
1
统一方法：以方法学评价为基础，提出参考方法或 推荐方法。统一试剂的主要成分和测定条件。实施 机构：国际临床化学学会、临检中心 逐级溯源：常规校准品应向二级标准品、一级标准 溯源。实施机构：ISO、国家标准计量局、参考实验 室、试剂盒供应商、临床实验室
系统误差 误差分类
比例系统误差 恒定系统误差 比例系统误差 恒定系统误差
评价试验
回收试验 干扰试验 方法对比试验 Y=a+bX
评价指标
回收率 干扰值 b a
理想结果
95-105% 接近0 接近1.0 接近0 <3%
随机误差
重复性试验
（批内、批间、 日间）、总不精 密度
CV
表21-3
临床生化检验方法的误差及评价方法
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
主要内容
临床生化检验方法分级和标准品
临床生化检验方法的性能评价
临床生化检验试剂盒的性能评价
第 3页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
第一节 临床生化检验方法分级和标准品
一
临床生化检验方法分级
二 三 四
临床生化检验的参考物质和校准品 量值溯源
检测系统的比对
正确度 `
果得到的均值与“真值”的接近程度。通常以 偏倚（bias）来表示
精密度 `
精密度（precision）是指在规定条件下，相互独 立的检测结果间的一致程度。不精密度 （imprecision）通常用标准差（S）和变异系数 （CV%）来表示
第22页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
二 方法学性能评价内容
一 方法学性能指标
准确度
可靠性
精密度
实用性
方便性 安全性 可测范围
经济性 简单快速
第21页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
准确度 `
准确度（accuracy）的传统定义是指测定值 与“真值”的接近程度。是指一次测定的结果 与被测物真值的接近程度。
“正确度”（trueness），是指一系列测定结
第 8页
常规校准品 `
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
一级标准品用高纯化学物质（纯度>99.98%）直接通过称重
标准品
配制的溶液，是唯一值。一般由国家标准计量局出具证书。 二级标准品某种成分的浓度可用公认的参考方法测定。由参 考实验室或权威学术组织出具证书，如SRM、BCR、IFCC。
校准品
临床实验室以生物检测限更为重要，需采用接近检测 低限的生物检测限样品来确定，能更真实地反映实际 检测限水平样品测定的不确定度。
第30页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
四 方法学性能判断
系统误差 误差分类
比例系统误差 恒定系统误差 比例系统误差
评价试验
回收试验 干扰试验 方法对比试验 Y=a+bX （批内、批间、日 间）、总不精密度
四
检测系统的比对
（一）检测系统的概念
完成一个项目检验所涉及的仪器、试剂、校准品 、质控品、操作程序、质量控制、保养计划等的 组合称为检测系统（testing system）。常规检 测系统有配套检测系统和自建检测系统。
第15页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（二）检测系统的分类
.配套检测系统 整个检测系统涉及的各个部分完全按照指定厂商要求配 套使用。若该系统已经国家法定部门认证,则使用这样 的检测系统对临床样品进行检验，其结果具溯源性。
2.初步的批内精密度评价：即一个样品重复测定20次，计算出均值， 标准差和变异系数。
用2个样品每天测定 2批，批间测定间隔不得少于 2h，每批平行测定2 份，至少共测定20天，80个数据。每对结果间的差（共40个）代表批
内差；2批均值之间的差（共20个）代表批间差；每天4个结果的均值
（共20个）代表日间差。每批测定至少做一个质控。