精子冷冻保存技术及研究进展

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【 e od 】 S em cypeevt n rort tn; reigta igea ao K yw rs pr rorsra o ;Cypo cat Fez - wn vl t n i e n h ui
精 子 冷冻是 一 个 复 杂 的过 程 , 响 冷 冻 效果 的 影 因素 主要包 括精 子 的来 源 、 冻稀 释 液 和 防 冻剂 的 冷 选 择 、 冻 和解 冻 方法 的选 择 。在 精 子 的 冷 冻 过程 冷 中外来 的压 力 , 冷休 克 、 如 防冻 剂 的毒性 、 晶的形 冰 成、 渗透 压 的 改 变 , 会 造 成 精 子 结 构 和 功 能 的损 都 伤, 其损 伤程 度则 由精 子 自身 对 外 来 压力 的 耐受 能 力 来决 定 。不 同物 种 或 同 物 种 不 同个 体 的 精 子 在 大小、 态 、 形 生物 化 学等 方 面 不 同 , 外来 压 力 的承 对 受 能力 也就 不 同 , 要 对 每一 个 保 存 处 理 环 节进 行 需 适宜 的选 择 , 综 合 考 虑 多 个 因 素 的 作 用 , 并 以此 优
内 , 到保 护 精 子 免 受 损 伤 的 作 用 ; 防 冻 剂 表 现 达 对
出毒 性 的精子 , 常先 用 无 防 冻剂 的冷 冻 稀 释液 稀 通
释精 液 , 添加 一 定 浓 度 的 卵 黄 或 脱 脂 奶 , 低 温 并 在
条 件下 加入含 防冻 剂 的冷冻 液 , 在 低 温 环 境 中平 并
种: 活体 采精 和离 体 附睾取 精 。
1 1 活体 采精 .
活体 采 精 是 借 助 于外 来 诱 导 刺 激 或 自然 情 况
下让 动 物 自主 排 精 。该 方 法 能 够 有 效 地 减 少 动 物
[ 金 项 目] 基 国家 自然 科 学 基 金 ( 17 29 。 3 0 17 )
t i e iw lo fc s n vau to c i ra f rpo tta h sr ve as o u o e l ai n rt i o s—h w s e m ao o e p r t z a, pr p sn r s c n a tc p to a o t e e r h o o i g p o pe to n ii ai n b u rs ac o i na in o pe m r p e e v t n a d isa plc to re tto fs r cyo r s r ai n t p i ain. o
m eh doo is,c y pr tca ts l cin a me h d o t a d to n e o a o pe m c y p e evain. I d ii n, to l ge r o oe tn ee to nd t o s f is d ii n a d r m v l n s r r o r s r to n a d to
[ 者 简 介 ] 述 煌 (9 5一) 男 , 士 生 , 要 从 事 动 物 辅 助 生 殖技 术 的研 究 。E ma :ighh ag9 5 13 cm。 作 平 18 , 硕 主 - i pn suun 1 8 @ 6 .o l [ 讯 作者 ] 世 华 (9 2一) 教 授 , 要 从 事 动 物 生 殖生 物 学研 究 , ・ i sh 通 杨 17 , 主 E ma :yh m@ 13 cr。 l 6 .o n
3 1 冷冻 稀释液 .
可 以从屠 宰 场动物 尸 体 上 分 离 、 宠物 收 容 站 的 流 或
浪 宠物 去势 、 或为 了 疫 苗生 产 牺 牲 的非 人 灵 长 类 动 物 中分 离 附睾及 睾丸 , 并可 以在 4C保存 ,  ̄ 清洗 处 理
后 从 附睾 中分离 精子 。 2 冷 冻前 精液预 处 理 2 1 精子 的优选 .
12 附睾 离体取 精 .
的冷休 克损伤 , 而起到 抗冻保 护作 用 。 进
目前 , 常采 用 的方 法 是 水 浴 平 衡 法 , 般 从 室 一 温降到 4C或 5 , 于 精子 以改变 质膜结 构来 适 应  ̄ ℃ 便 低温环 境 。对 防冻剂 毒 性 不 太 敏感 的精 子 , 接 将 直 防冻 剂加 入到稀 释 液 中 , 证 防冻 剂 充 分进 入 细 胞 保
衡 一定 的 时间 , 以保 证 防冻剂 充分 进入 细胞 。
3 冷 冻 液 和 防 冻 剂
在野 外状 态 下 采 集 濒 死 或 死 亡 时 间 不 长 的雄 性 尸体 内附睾 精பைடு நூலகம் , 者 活 体 采 精无 法 完 成 采精 的 或 动 物也 可 以 通 过 手 术 或 致 死 后 获 取 附 睾 精 子 。也
渗透 进精 子 细 胞 内发 挥 作 用 , 少 、 至 避 免 精 子 减 甚
用于 已经 完 全 驯 化 的家 畜 和 实 验 动 物 。 而 对 于 育
种价值 高 而失去 爬 跨 能力 、 明原 因不 育 等不 适 宜 不 常规 方法 采 精 的 家 畜 、 生 动 物 , 野 阴茎 或 直 肠 电刺 激采 精方 法就 很重 要 。 此外 , 鸟类 精 子 的采 集 方 法 主要 是 腹 按 摩 或 推 拿诱 导 射 精 法 ; 类 精 子 的采 集 方 式 主 要 是 洗 提 鱼 法; 爬行 类 动 物 精 子 的 采 集 方 式 主 要 是 腹 部 按 摩 法; 两栖 类 动物 的精 子 的 采集 方 法 主 要是 腹 部 挤 压 法或精 囊 穿刺法 。
Pr g e s o pe m y pr s r a i n o r s n S r Cr O e e V t0
PI NG u h a g, Sh ・ u n YANG hih S — ua
( a ut o i c n ea dT c n lg , u m n nvri f c n ea dT c n lg , u m n 5 2 4 F c l f f S i c n e h oo y K n igU i s yo S i c n e h o y K n ig 0 2 ) y Le e e t e o 6
化 冷冻 程 序 。本 文 就 精 子 的 来 源 、 冻 前 预 处 理 、 冷 冷冻/ 冻方 法 、 解 防冻 剂 对 冷 冻 效 果 的 影 响 和 解 冻 后精 子 的质 量评估 这 两方 面做综 述 。
1 精 液 的 采 集
根据 供精 动 物 的睾 丸 状 态 , 集 精 子 主要 有 两 采
除高度稀 释对 精子 的负 面影 响 , 给精 子 适 应 外 界 环
境 创造 有利 条件 。 稀 释液 不仅是 精 子 冷 冻 的介 质 , 而且 直 接 影 响 着精子 的冷 冻成 活 率 。 目前 常 用 的冷 冻 稀 释 液 有 :
主要 包 括 两 性 离 子 、 糖 、 r 果 Ti 黄 缓 冲 液 、 s卵
Ti T s 黄缓 冲液 、 檬 酸盐 、 E T柠檬 酸 盐 卵黄 r —e 卵 s 柠 TS 缓 冲液等 。其 主要 作 用 是 优 化 精 子 所 处 环 境 的渗 透压 与 p H值 , 为精 子提 供能 量 , 防止精 子 细 胞 内磷 脂 的流失 并 起 着 防冻 剂 的作 用 , 防止 细 菌 污 染 , 去
高 精液 品质 ] 。相 比离 心 去 除精 浆 和 死 精子 而 言 ,
上 游法 具有 不造成 精子 亚致 死性 损伤 的优点 。
2 2 预 冷 处 理 .
冷冻前 进行 预 冷处 理 , 目的是 保证 精 子 有 一 其
段适 应低 温 的过程 , 同时 又 能使 渗 透 性 防冻 剂 充 分
efc ie wa o p e e v v l a l e tc e o r e . Ths e iw c na n d i fr ain r ltng t h r p e e v t n f fe tv y t r s r e a u b e g nei r s u c s i rv e o ti e n om to e ai o t e cyo r s r ai o o a ma e e tr ug a s m may f sg ii a c r s a c r s ls b utdo si a fr i n p r ni ls m n h o h u r o in fc n e e e r h e u t a o me tc nd o eg s e m cy p e evain n ro r s r to i
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中 国 比较 医学 杂 志 2 1 0 1年 3月 第 2 卷 第 3期 1
C i C m d, rh2 1 ,o. 1 N . hnJ o pMe Mac 0 1V 12 . o3
损伤 , 有 很 好 的 实 验 重 复性 。特 别 对 濒 危 、 贵 具 珍 动物 , 活体 采 精 是 获 取 精 液 的 主 要 方 法 , 大 大 提 能 高动 物 的利用 价值 。 对 于哺乳 动物 , 常采 用 的采 精方 法 有 人 工假 阴 道诱 导 排 精 、 握 阴 茎 刺 激 排 精 、 刺 激 排 精 。前 手 电 两 种方 法 比较简 单 、 捷 , 设 备投 入 较 少 , 便 且 主要 实
平 述 煌 , 世 华 杨
( 明理 工 大学 生命 科 学 与 技 术 学 院 , 明 昆 昆 602) 5 2 4
【 摘要 】 精子冷冻是辅助生殖技术的基础 , 能够有 效的保存有价值的基 因资源 。文章 回顾 了近些年来 国 内外
精 子 冷 冻 保 存 的 重 要 研 究 成 果 , 析 了 精 子 的 来 源 、 冻 预 处 理 、 冻 和 解 冻 方 法 、 冻 剂 的 选 择 及 其 加 入 去 除 方 分 冷 冷 防 式 的 选 择 等 因 素 对 精 子 冷 冻 效 果 的影 响 。文 章 还 总结 了精 子冷 冻效 果 的 评 价 方 法 , 望 精 子 冷 冻 技 术 的发 展 方 向 展
21 0 1年 3月
中 国 比较 医学 杂 志
C NE E J HI S OURNAL OF COMP ARATI VE MEDI I C NE
Mac r h,2 01 1
第 2 1卷
第 3期
V0 . NO 3 12l .
精 子 冷 冻 保 存 技 术 及 研 究 进 展
r c n y a s a d t e t p c d s use t t h ef c f s m e c le t e e t e r , n h o is ic s d ha t e fe to e n ol ci on,  ̄e zn p e r t n , fe zng n t wi e i g r teame t r e i a d ha ng
和应用前景。
【 关键词 】 精子冷冻 ; 防冻剂 ; 冷冻评估 【 中图分类号 】¥ 1. R 3 84 8 32 【 文献标 识码 】A 【 文章编号 】17 —86 2 1 )30 6 - 6 1 5 (0 1 0 -0 7 5 7 0
d i1 . 9 9 jis . 6 1—7 5 2 1 . 3 01 o :0 3 6 / .sn 1 7 8 6. 0 1 0 . 7
【 btat S em c orsra o a eo t nzd tef l fas td r rd co ,n tcn poie a A s c】 p r r pee t n hsrvl i ie h i d o s s e out n ad i a rvd l r y vi uo e ie p i l
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