蝴蝶兰组织培养培养基组成的初步研究

沈阳农业大学学报,2004-02,35(1):10-12

Journal of Shen y an g A g ricultural Universit y,2004-02,35(1):10-12

蝴蝶兰组织培养培养基组成的初步研究

王平,吴海红,赵兴华,闫立萍

(辽宁省农业科学院设施农业工程技术中心,辽宁沈阳110161)

摘要:以圣诞红(Christm as R ose)为试材,研究了蝴蝶兰花梗腋芽组织培养使芽萌发的适宜培养基和BA浓度,诱导培养基中BA 和NAA的最佳组合,以及生根培养中NAA的最佳浓度。结果表明:花梗腋芽培养以1/2MS为基本培养基,加入3m g・L-1BA效果最好,原球体的诱导以1/2MS为基本培养基,激素以2m g・L-1BA+0.2m g・L-1NAA时效果最佳,生根培养时NAA以0.8 m g・L-1效果最好。

关键词:蝴蝶兰;组织培养;培养基;植物生长调节剂

中图分类号:S682.31文献标识码:A文章编号:1000-1700(2004)01-0010-03

Studies on Medium for Tissue Culture of Phalano p sis s p.

W ANG P in g,WU Hai-hon g,ZHAO X in g-hua,Y AN Li-p in g

(A g ricultural Facilit y&T echnolo gy C enter,Liaonin g Academ y o f A g ricultural Sciences,Shen y an g110161,China)

Abstract:Christm as R ose w as used to p robe the m othed of tissue culture.T he result show ed that the m ost suitable m edium for p edi2 cel ax illar y bud is:1/2MS+3m g・L-1BA.F or inducin g s p herosone the best m edium is2m g・L-1BA+0.2m g・L-1NAA,for shootin g the best m edium is0.8m g・L-1NAA.

K e y w ords:Phalano p sis;tissue culture;m edium;p lant g row th re g ulater

蝴蝶兰(Phalaeno p sis s p.)是兰科蝴蝶兰属多年生常绿附生草本植物。原产于中国台湾省、菲律宾、印度尼西亚、泰国、马来西亚等地。蝴蝶兰原生种有70多种,属于热带气生兰,栽培容易。其花形似蝴蝶,姿态优美,色彩丰富,花期颇长,是最受欢迎的洋兰品种之一。蝴蝶兰是单茎性气生兰,植物极少发育侧枝,对其进行常规的无性繁殖,增殖速度慢,远远不能满足人们的需求。通过组织培养,进行大量繁殖,推行工厂化生产已成为培育蝴蝶兰、形成产业化的重要手段。利用茎尖、茎节、叶片等作为外植体,诱导原球体产生,通过继代培养,无性快繁,然后诱导生根,继而培育成苗是蝴蝶兰组织培养的一般程序。在组织培养中基本培养基配方和植物生长调节剂是决定其成功与否的关键所在。本研究旨在找出适合蝴蝶兰组织培养的基本培养基和植物生长调节剂种类、水平及适用比例。

1材料与方法

1.1外植体选择及处理

本研究以圣诞红(Christm as R ose)为试材。将开花和未开花的蝴蝶兰花梗剪下,用75%酒精棉球擦拭,切成约5cm的每节带芽小段,仔细除去苞片,防止伤及嫩芽,然后用2%次氯酸钠溶液消毒20m in,其间不停地摇动。消毒后用无菌水冲洗3～5次,放到培养皿中。用4号解剖刀将两端各切去0.5cm,芽体朝上插接在培养基A上。

1.2培养基设计

1.2.1花梗腋芽培养基(A)基本培养基分别设置为MS,1/2MS,1/3MS,苄基腺嘌呤(BA)浓度分别为1,3, 5m g・L-1共3种浓度,共9个组合,以筛选出促使腋芽萌发过程中最为适宜的培养基和BA浓度。各培养基组合均加入糖20g・L-1,水解乳蛋白1g・L-1,琼脂8g・L-1,活性炭1g・L-1,调p H值为5.6。

1.2.2原球体诱导培养基(B)以1/2MS为基本培养基,设置BA浓度分别为2,3,4,5m g・L-1,荼乙酸(NAA)浓度分别为0.2,0.4,0.6,0.8m g・L-1,共16个组合,以筛选出诱导培养基中BA和NAA的最佳浓度以及BA与NAA的最佳比例。各配方中均加入糖20g・L-1,琼脂8g・L-1,调p H值5.6。

1.2.3生根培养基(C)以1/2MS为基本培养基,设置0.4,0.6,0.8, 1.0, 1.2m g・L-1NAA共5种浓度,

收稿日期:2003-12-03

作者简介:王平(1954-),男,辽宁省农业科学院副研究员,从事花卉组培、花卉育种研究。

第1期王平等:蝴蝶兰组织培养培养基组成的初步研究・11・

以研究生根培养基中NAA的最佳浓度。各培养基均加入糖20g・L-1,琼脂8g・L-1,水解乳蛋白1g・L-1,香蕉150g・L-1,调p H值为5.6。

1.3培养与移栽

各种培养,接种后均放在温度(25±2)℃,光照强度为2klx的光照12h条件和无光12h条件下培养。1.3.1继代培养新接的外植体在40～60d之间陆续萌发出花梗苗。利用花梗苗的叶片和茎段接种在诱导培养基(B)上诱导原球体。原球体的继代培养基与诱导培养基相同。

1.3.2生根培养在继代培养过程中,不断产生长出叶芽的原球体。将这些长出叶芽的原球体切下,移入生根培养基(C)上,进行生根培养。

1.3.3小苗移栽小苗经2～3个月的生根培养,叶片长度达到4～5cm,根长亦达到4～5cm时移栽,先移入温室中炼苗1～2d,然后冲洗干净根部培养基,栽入苔藓基质中生长。

2结果与分析

2.1不同的基本培养基和不同浓度的BA对花梗苗分化株数的影响

表1表明,1/2MS培养基的花梗苗分化株数高于另2种培养基处理,随着BA浓度的提高,花梗苗株数趋于增多,但3m g・L-1及5m g・L-1之间差别不大。试验表明,高浓度的BA条件下,花梗苗株数趋于增多,但幼苗质量不好。综合分析认为,基本培养基以1/2MS,BA浓度以3m g・L-1效果为最佳。

表1不同培养基和不同浓度的BA对花梗苗分化株数的影响

T able1The effect of different mediums and BA on seedlin g

MS分化株数N o.of seedin g

1m g・L-1BA3m g・L-1BA5m g・L-1BA 1111215

1/2183233

1/3132130

2.2不同浓度的和NAA组合对蝴蝶兰原球体诱导率的影响

表2表明,原球体的诱导不仅取决于BA和NAA的绝对数量,而且取决于二者的相对比例。本研究中,在BA/NAA比值最大的条件下,诱导率处于最低状态;在BA/NAA比值最小条件下,诱导率也接近于最低。当BA/NAA比值接近于10∶1时诱导率较大。综合分析认为,在本试验设计的范围内,当取得2m g・L-1BA+ 0.2m g・L-1NAA配比时效果较佳。但由于本试验所设计的处理中,BA和NAA均为最低浓度,没有对照。因此,更经济、更佳的BA和NAA浓度比例需要进一步研究。

表2不同浓度的BA和NAA组合对蝴蝶兰原球体诱导率的影响

T able2The effect of different formulas of BA and NAA on the rate of inducin g Ph alano p sis s p herosone BA诱导率Rate of inducin g p lalano p sis s p herosone(%)

(m g・L-1)0.2m g・L-1NAA0.4m g・L-1NAA0.6m g・L-1NAA0.8m g・L-1NAA 259282522

346452926

429544230

523524741

2.3不同浓度NAA对蝴蝶兰原球体生根的影响

表3不同浓度NAA对蝴蝶兰原球体生根的影响

T able3The effect of different NAA on rootin g of p halano p sis s p herosone

NAA生根率Rate of roofin g根数N o.of roots根长Len g th of root开始生根天数Da y s before rootin g (m g・L-1)(%)(条/p iece)(cm)(d)

0.458.7 2.1 6.216

0.686.4 3.0 5.913

0.898.2 4.1 5.510

1.090.5 4.8 3.89

1.289.6 5.4

2.78