药用植物组培技术之一---配制母液
植物组织培养基母液的配制
植物组织培养基母液的配制
植物组织培养基是培养植物细胞、组织和器官的基础培养介质。
配制
植物组织培养基的母液可以按照以下步骤进行：
1. 准备所需的化学品和试剂，包括无机盐、有机添加剂、维生素和其
他辅助物质。
这些化学品可以根据不同的植物种类和培养目的进行选择。
2. 称取所需的化学品，并依次加入无菌蒸馏水中。
搅拌溶解，直到所
有化学品完全溶解。
3. 调节pH值。
使用pH计测量溶液的pH值，如果需要，可以使用酸
或碱来调节pH值，直到达到所需的pH范围。
4. 向溶液中添加琼脂糖或琼脂糖替代物，作为凝胶剂。
溶解并搅拌直
到完全溶解。
5. 过滤溶液，以去除悬浮固体和杂质。
使用无菌滤纸或滤器进行过滤。
6. 灭菌。
将过滤后的溶液装入无菌烧瓶或容器中，使用高压灭菌器或
自动压力锅进行灭菌，通常在121℃高压下灭菌20-30分钟。
7. 灭菌后，将培养基倒入无菌培养瓶中，密封并保存在冰箱中或低温
环境中。
以上是植物组织培养基母液的配制步骤，具体的操作和配方可以根据
不同的要求和实验目的进行调整。
培养基母液的配制
培养基母液的配制植物在自然状态下生长时，具有完整的营养体，是属于自养型的，很多营养物质可以自制，对外界营养条件的要求比较简单,而在离体条件下生长的植物器官、组织和整体植物不同，属于异养型,要求的营养条件十分复杂,因此在人工合成养基的组成和制备上必须全面考虑，满足供应。
一、实验目的配制培养基母液是植物组织培养的基本技术。
当需要连续和大量配制培养基时,如果每次都称量药品、溶解并定容，工作将十分繁琐，因此需要将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成适当的浓缩液。
要求拿握植物组织培养培养基母液的配制方法。
二、实验材料仪器冰箱、电子天平(0.0001g)容量瓶: 1000 ml, 500ml、250 ml、100 ml、25 ml广口储液瓶: 500 ml、250ml、50 ml、25 ml烧杯: 1000ml、500ml 、250m、100ml 、50 ml.数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺、标签纸、胶水、记号笔药品50%酒精、95%酒精、1N盐酸(1N盐酸(HC1)的配制:取浓盐酸825ml,加入蒸馏水1000ml,即为IN的HCI)、1 N Na0H(1N氢氧化钠(或氢氧化钾)的配制:称40 gNa0H (或氢氧化钾57.1g)加入蒸馏水100ml ,即为1N的Na0H( IN的K0H)几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品、蒸馏水三、实验步骤按照培养基配方，把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类，每一类中各种药品分别称量。
如Ms培养基各种母液的配制步骤如下:1、大量元素母液:包括用量较大的几种化合物，按表中排列顺序，将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解,然后按照顺序混合在一-起。
如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容。
最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。
在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃棒以减少误差。
定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养基需吸取该母液100 m或502、微量元素母液:因用量少,为了称量精确和方便,常配成100倍或100倍的母液,即每种药品扩大100倍或者1000倍。
植物组培1-培养基配制
植物组织培养-培养基配制一 、【实验目的】1、掌握培养基的配制，灭菌等基本实验操作技术二 、【实验原理】植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。
而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。
植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。
三、【实验仪器和试剂】仪器：培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，棉线，接种箱或超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸试剂：乙醇、2 ，4 – D （生长素类似物）、次氯酸钠、6- 苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ）、MS 培养基、0.1 mol/L NaOH与 0.1 mol/L HCl 四、【实验步骤及内容】培养基的配制用于配制培养基的水最好是三蒸水。
所用的各种化学药品：分析纯级别的试剂，避免药品的交叉污染和混杂。
配制培养基最方便的方法是预先配制好不同组分的培养基母液，存放在2～4℃冰箱内，使用时按比例稀释配用即可。
1、 MS培养基的配制1）按照配方配制培养基时,先将储存母液按顺序摆放好，根据欲配制的总体积，量取各种不同体积的母液，加入2，4-D(2mg/L)，先加三蒸水至大约400ml2）称取加入蔗糖(浓度3%)，调节pH至5.7-5.83）加入琼脂（8-9g/L）加热搅拌溶解，沸腾后立即端离火源（第一个大气泡从缸底上升顶破泡沫层），分装在100ml的三角培养瓶中（一般以容器的1/3～1/4体积为宜），拧紧瓶盖。
4）培养基的pH值直接影响培养物对离子的吸收，过酸或过碱不仅影响到培养材料的生长，而且还影响到琼脂的凝固。
母液配制
植物组织培养母液配置一、实验目的学习配置培养基的母液，掌握配制方法，了解母液存储方法二、实验原理配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。
三、实验器材、试剂1器材电子天平烧杯（50ml 100ml 500ml 1000ml）量筒（1000ml 100ml 25ml）容量瓶（100 500 1000）2试剂NH4NO3,KNO3,KH2P O4,CaCl2·2H2O,MgSO4·7H2O,FeSO47H2ONa2-EDTA,MnSO4·4H2O,ZnSO4·7H2O,H3BO3,KI,Na2MoO4·2H2OCuSO4·5H2O,CoCl2·6H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水四、实验步奏：一、母液的配置1、MS大量元素母液的配制一般将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。
按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 、KNO3 ,KH2PO4 、MgSO4.7H2O 、CaCl2.2H2O的量，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至1000ml，转入1000ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期，置于冰箱中保存备用。
2、MS微量元素母液的配制一般将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。
按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O 、H2BO3 、NaMoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O扩大100倍的量，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至1000ml，转入1000ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期，置于冰箱中保存备用。
药用植物组培技术之一---配制母液
组织培养 技术
植物组织培养：
• 在无菌和人为控制外因条件下，将离体器官、组 织、细胞、胚胎或原生质体培养在人工配制的培养基 上，使其脱分化产生愈伤组织，进而分化出器官并长 成完整植株的方法。
组织培养 技术
组织培养 技术
实验一 培养基母液的制作
实验目的：
• （一）掌握培养基的化学组成；掌握MS培养基的配方组 成；
• • 主要是生长素和细胞分裂素，有时用GA3，ABA。
a. 生长素类： 诱导细胞分裂和根的分化
组织培养 技术
1）吲哚类：IAA（吲哚乙酸）、 IBA（吲哚丁 酸）、IPA（吲哚丙酸） 2）萘酸类： NAA（萘乙酸） 3）苯氧羧酸类：2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、 2,4,5-T（ 2,4,5-三氯苯氧乙酸）、 2,4,5-TP （ 2,4,5-三氯苯氧丙酸）等。
b、悬浮剂 Ficoll（聚蔗糖）
组织培养 技术
（三）、培养基的配制 试验课上讲
1.贮备液（母液）的配制 为什么要配制母液？
1）、方便 2）、准确（有些成分量太小）
以MS培养基配制为例，包括大量元素、微量元素、铁盐、 有机物质、生长调节物质母液。
组织培养 技术
组织培养 技术
组织培养 技术
组织培养 技术
组织培养 技术
如何控制植物细胞分化
• 分裂素/生长素的比例是控制芽和根形成的 一个重要条件
• 比例高时——产生芽,比例低时——产生根
组织培养 技术
c.赤霉素（GA3） 1、诱导茎的细胞伸长，对矮生型植物恢复成高生型特别有效， 对根无效 2、对生长素和细胞分裂素的活性有增效作用
注：不耐热，应采用过滤灭菌加入
组织培养技术实验药用植物组织培养技术实验一培养基母液配制实验二诱导愈伤培养基配制和灭菌实验三外植体接种技术实验四接种效果观察分化培养基配制实验五分化接种组织培养技术在无菌和人为控制外因条件下将离体器官组织细胞胚胎或原生质体培养在人工配制的培养基上使其脱分化产生愈伤组织进而分化出器官并长成完整植株的方法
植物组织培养基的配制—母液的配制
• 大量2：2水氯化钙）
•
2、配制铁盐母液250mL，母液倍数100倍
• 三、实训材料：1、实训设备
•
2、实训药品
• 四、实验步骤
• 五、注意事项
• 3、MS培养基配制有机物母液时，已知母液浓缩倍数为50倍，母液体积为 2000ml，则有机物中，烟酸、肌醇的称取量分别为多少克？
计算：
• 1、MS培养基配制大量元素母液时，已知母液浓缩倍数为50倍，母液体积为 500ml，则大量中，KNO3、NH4NO3、MgSO4•7H2O的称取量分别为多少克？
（2）称量 电子天平注意事项： 干净、干燥、水平、校正、量程、归零、读数 电子天平使用方法：
开机-检查-放烧杯-归零-放药品-读数-关机
• （3）溶解 • 将蒸馏水或去离子水倒入烧杯中，用玻璃棒轻轻搅动使其溶解，使其沉淀后
将上清液倒入容量瓶，反复操作，直至全部药品完全溶解。
• 注意事项： • 用温水、酸、碱或醇等助溶 • 加水宜少不宜多 • 多次反复溶解
配置体积根据生产产量来定。 计算时带单位 如：七水硫酸亚铁(FeSO4.7H2O)称取量=27.8mg/L*100*1L
=2780mg =2.78g 乙二胺四乙酸二钠（EDTA）的称取量=37.3mg/L*100*1L
=3730mg 3.73g
计算：母液各成分称取量=培养基配方用量 （mg/L）*浓缩倍数*所配制母液体积(L)
• （4）定容： • 将已完全溶解的药品倒入容量瓶定容至所配制母液的体积（1L）。 • 母液成分比较多时要注意顺序， • 容量瓶定容后要充分摇匀再倒入广口瓶内保存 • 注意容量瓶的使用：干净、平视凹液面
• （5）保存：
• 将定容好的母液充分摇匀后倒入干净棕色瓶或无色试剂瓶内，贴上标签放入 试剂柜或冰箱内保存。
母液的配制实训报告
一、实验目的1. 掌握母液配制的基本原理和操作流程。
2. 熟悉MS培养基母液、微量元素母液等不同类型母液的配制方法。
3. 了解母液在植物组织培养中的重要作用。
4. 培养实验操作技能和严谨的科学态度。
二、实验原理母液是植物组织培养中常用的一种浓缩溶液，将培养基中的各种成分按照一定比例配制成高浓度的储备液。
在配制培养基时，只需按比例稀释母液即可，这样可以简化操作、减少误差，提高实验效率。
三、实验材料与仪器1. 材料：MS培养基各成分试剂、植物生长调节剂（如2，4-D、6-BA、IAA、NAA 等）、洗涤剂、蒸馏水等。
2. 仪器：电子天平、药匙、玻璃棒、称量纸、吸水纸、滴管、洗瓶、标签纸、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量杯、量筒、移液管、移液枪、洗耳球、电炉、冰箱等。
四、实验步骤1. 大量元素母液的配制（1）按照MS培养基配方的需要量，将各种化合物称量扩大10倍。
（2）用电子天平称取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。
（3）完全溶解后，按表4-1顺序依次混合已溶解的化合物。
（4）将混合液转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
（5）将配制好的大量元素母液转移至棕色试剂瓶中，贴上标签，置于冰箱中保存。
2. 微量元素母液的配制（1）按照微量元素母液的配方，将各种化合物称量扩大10倍。
（2）用电子天平称取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。
（3）完全溶解后，将混合液转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
（4）将配制好的微量元素母液转移至棕色试剂瓶中，贴上标签，置于冰箱中保存。
3. 生长调节物质母液的配制（1）按照生长调节物质母液的配方，将各种化合物称量扩大10倍。
（2）用电子天平称取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。
（3）完全溶解后，将混合液转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
（4）将配制好的生长调节物质母液转移至棕色试剂瓶中，贴上标签，置于冰箱中保存。
五、实验结果与分析1. 本实验成功配制了MS培养基的大量元素母液、微量元素母液和生长调节物质母液。
植物组织培养母液的配制与保存
植物组织培养母液的配制与保存目的熟练掌握植物组织培养中各种成分或成分组的母液（比需要量大若干倍）的配制方法。
实验仪器电子天平（感量为0.0001g）、一般天平（感量为0.1g）、烧杯100mL 50 mL 25mL）、量筒（1000 mL 100 mL 50 mL）、容量瓶200 mL 100 mL 50 mL 25 mL）、细口瓶（500 mL 200 mL 100 mL 50 mL）、药勺、玻棒、电炉等。
实验试剂按培养基配方准备实验原理一）培养基的组成培养基是植物组织培养中的“血液”，血液的成分及其供应状况直接关系到培养物的生长与分化，因此了解培养基的成分、特点及其配制至关重要。
自然状态下生长的绿色植物由于自身能进行光合作用，并且能合成植物生长发育所需的几乎所有有机成分，加上土壤中含有较全面的无机和有机营养成分，所以只需在适当的时候施加少量的无机和有机肥（复合成分），植物就可良好的生长。
目前所使用的培养基有10余种之多，大部分都是在前人研究的基础上经过分析综合和改进而成的。
例如，White培养基是Uspenski和Uspenskaia（1925）的藻类培养基演化的结果，被广泛用于根的培养；Cautheret培养基是建立在Knop营养液(1865)基础上的。
以后的培养基大部分是在White和Cautheret培养基的基础上改进而成。
就目前所使用的各种培养基而言，可将它们的成分划分为几大类，常用的有MS、B5 、和White培养基等。
1．水水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。
配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程发霉变质。
大规模生产时可用自来水。
但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。
2．无机营养成分：大量元素，主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种微量元素：培养基的微量元素主要包括铁（Fe）、锰（Mn）、铜（Cu）、锌（Zn）、氯（Cl）、硼（B）和钼（Mo）等。
实验1 培养基母液的配制
实验1、培养基母液的配制一、实验目的1、了解植物组织与细胞培养基的基本类型和组成。
2、掌握植物组织与细胞培养基各种母液的配制方法。
二、实验原理离体植物组织和细胞的生长、分化所需要的营养物质都是由培养基供给。
基本培养基通常包括大量元素、微量元素、有机物以及糖和水，完全培养基是在基本培养基的基础上，附加植物生长调节剂、椰乳、香蕉汁、番茄汁等天然提取物。
迄今为止，基本培养基的配方已有几百种，但较常用的有一二十种，如MS、White、N6、B5等。
实验用的培养基一般是先配成10-100倍的母液，用时再按配方配制培养基。
二、实验用品1、实验器材：冰箱、电炉、电子天平、移液管、量筒、烧杯（1000mL、500mL、50mL）、容量瓶、玻璃棒、试剂瓶（1000mL）、标签纸等。
2、实验试剂：MS培养基配方中的19种试剂，2,4-D，KT，NaOH，HCl，95%乙醇，HgCl2，次氯酸钠，蒸馏水等。
三、实验方法1、大量元素母液的配制按表1-1计算并称取各试剂，用蒸馏水依次溶解，最后定容到1000mL，即为10倍的大量元素母液，倒入试剂瓶，贴好标签，保存于4℃冰箱里。
表1-1 MS培养基大量元素母液试的配制注意1: ①称取量的值（mg）=规定量(mg/L)×扩大倍数×母液体积(L)②每称量一种试剂，都要在备注栏中相应的部分做好标记，比如写上日期和划出“√”。
注意2：①为避免沉淀现象发生，应将Ca 2+、SO42-、Mg 2+和H 2PO 4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合；②CaCl 2·2H 2O 要在最后单独加入，在溶解CaCl 2·2H 2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO 2，以防沉淀。
另外，CaCl 2·2H 2O 放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。
③如遇沉淀，缓慢加入（注意搅拌）1mol/L 的Hcl 将其溶解。
2、微量元素母液的配制按表1-2计算并用分析天平称取各试剂，用蒸馏水依次溶解，最后定容到1000mL ，即为100倍的微量元素母液，倒入试剂瓶，贴好标签，保存于4℃冰箱里。
母液的配制
（3）CaCl2·2H2O要在最后单独加入（因为氯化钙易与磷 酸二氢钾形成磷酸三钙、磷酸钙之类不溶于水的沉淀）。
（4）然后，倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制 日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
2.微量元素母液的配制
将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍， 用电子天平分别依次称取MnSO4·4H2O 22.3g， ZnSO4·7H2O 8.6g , H3BO3 6.2g，KI 0.83g， Na2MoO4·2H2O 0.25g，CuSO4·5H2O 0.025g， CoCl2·6H2O 0.025g，并用重蒸水逐个溶解，待全部溶解再依 次混合后用容量瓶定容至1000ml，后倒入细口磨砂试剂瓶中， 贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃ 冰箱保存备用。
（1）维生素母液的配制 按培养基配方用量的100倍，用电子分析天
平分别称取后放入l烧杯中，加蒸馏水直接溶解， 然后混合定容于100ml容量瓶中，转移到储液瓶 中保存于4℃冰箱。
药品名称
规定用 扩大倍 称取量mg 量mg/L 数
母液定容体 积 ml
烟酸（维生素B5）
5
100 50
盐酸吡哆醇(维生素B6) 5
理论知识：
培养基：是植物组织培养的物质基础，也是组织培养 能否成功的重要因素之一。
培养基的主要成分是植物生长发育所必需的各种营养元素。
成分：水分（主要成分） 无机盐类：大量元素、微量元素、铁盐 有机营养成分：维生素、肌醇、氨基酸等 植物生长调节剂：细胞分裂素类、 生长素类： IAA（吲哚乙酸）、 萘乙酸 （NAA）
19000
1650 10 16500
370
10 3700
二植物组织培养培养基母液的配制
在配制吲哚乙酸（IAA）母液时，先用几滴95%酒精 溶解完全后，加蒸馏水定容，否则会发生沉淀。而配制6BA母液时，要用少量的1 mol/L NaOH溶解；而配制2,4-D 时，可先用少量的95%酒精溶解。
各种母液配制好后，要贴好标签，注明 母液的名称，配制1 L培养基需要的吸取量、 母液配制的日期，然后放入冰箱中储存。 一般无机物质的母液在冰箱中可保存半年 以上，有机物质的母液保存时间在半年以 内，但若发现有沉淀或霉变，应立即重新 配制。
实验二
植物组织培养培养基 母液的配制
简 介
植物在自然状态下生长时，具有完整的营养 体，是属于自养型的，很多营养物质可以 自制，对外界营养条件的要求比较简单， 而在离体条件下生长的植物器官、组织和 整体植物不同，属于异养型，要求的营养 条件十分复杂，因此在人工合成培养基的 组成和制备上必须全面考虑，满足供应。
2、如药品所带结晶水不同，应进行换算。
3、称量必需准确，一般用1-4/万的分析天平称量，特别如微 量元素及激素等，但有些药品不影响基本反应过程的如 蔗糖、琼脂等可用1/100粗天平称取。 4、所用的水必须纯净，一般用全玻璃蒸馏器二次蒸馏的重 蒸水或者达到一定标准的无离子水。
5、制备好的浓缩液应保存于冰箱中，储备液配置量要依据 使用频度而定，一般所制备的储备液最好于1-2个月内使 用完，不宜过长时间保存。
植物组织培养基的配制
植物组织培养基的配制一、母液的配制和保存在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。
为简便起见，通常先配制一系列母液(stockso1utlon)，即贮备液。
所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但刊以侏让各物质成分的精确性及配制时的迅速移取，而且还便于低温收藏。
普通母液配成比所需浓度高10～100倍。
母液配制时可分离配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。
配制时注重一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042-、Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。
配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。
药品应选职等级较高的化学纯或分析纯。
药品的称量及定容都要精确。
各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。
普通配成大量元素、微量元素、铁盐、维生索等母液，其中维生素、氨基酸类可以分离配制，也可以混在一起。
母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。
下面以MS培养基制备为例，概述其制备办法，为MS基本培养基4种母液成分配制。
(1)大量元素母液可配成浓度10倍母液。
用分析天平按表25称取药品，分离加100mL左右蒸馏水溶解后，再用磁力搅拌器搅拌，促进溶解。
注重Ca2+和PO3-4易发生沉淀。
然后倒入1000mL定容瓶中，再加水定容至刻度，成为10倍母液。
(2)微量元素母液可配成100倍的母液。
用分析天平按表精确称取药品后，分离溶解，混合后加水定容至1000mL。
(3)铁盐母液可配成100倍的母液，按表称取药品，可加热溶解，混合后加水定容至1000mL。
(4)有机物母液可配成l00倍的母液。
按表分离称取药品，溶解，混合后加水定容至1000mL。
(5)激素母液每种激素必需单独配成母液，浓度普通配成1mg／mL。
用时按照需要取用。
由于激素用量较少，一次可配成50mL或100mL。
另外，多数激素难溶于水，要先溶于可溶物质，然后才干加水定容。
激素的配法如下：将IAA、IBA、GA等先溶于少量的95％的酒精中，再加水定容至一定浓度。
母液的配制
烟酸（维生素B5） 盐酸吡哆醇(维生素B6)
盐酸硫胺素(维生素B1)
甘氨酸
5
20
100
100
50
200
（2）肌醇母液的配制 按培养基配方用量的100倍，用电子分析天 平分别称取后放入l烧杯中，加蒸馏水直接溶解， 然后定容于100ml容量瓶中，转移到储液瓶中保 存于4℃冰箱。
（3）CaCl2· 2H2O要在最后单独加入（因为氯化钙易与磷 酸二氢钾形成磷酸三钙、磷酸钙之类不溶于水的沉淀）。
（4）然后，倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制
日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
2.微量元素母液的配制
将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍， 用电子天平分别依次称取MnSO4· 4H2O 22.3g， ZnSO4· 7H2O 8.6g , H3BO3 6.2g，KI 0.83g， Na2MoO4· 2H2O 0.25g，CuSO4· 5H2O 0.025g， CoCl2· 6H2O 0.025g，并用重蒸水逐个溶解，待全部溶解再依 次混合后用容量瓶定容至1000ml，后倒入细口磨砂试剂瓶中， 贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃
药品名称 规定用 量ml/L 扩大倍 称取量mg 数 母液定容体 积 ml
肌醇
100
100
1000
100
5.植物生长调节剂的配制
常用的激素如生长素和细胞分裂素等配制 成母液使用起来方便、准确。 配制前需先用相应的少量有机溶剂进行溶 解，然后再定容。贴好标签，写明配制激素的 浓度，存放于冰箱中。
药用植物组培快繁培养基及配制技术
培养基的配制步骤
▪ 4.按顺序用量筒或 移液管按照计算结 果吸取各种营养成 分的母液放在干净 的烧杯中混合。
培养基的配制步骤
▪ 5.把所取的各种 营养成分的混合 母液倒入煮好溶 化的琼脂液中， 再加水至需配制 培养基的最终容 积。
培养基的配制步骤
▪ 6.调整培养基的pH 值为6.0。
▪ ※ 培养基高温灭 菌后pH会下降0.2个 单位，因此在调整 培养基的pH时适当 提高0.2个单位。
成分名称 药品 名称
原配方量 (mg)/ L
MS
NH4NO3
1650
KNO3
1900
大量元素 CaCl2·2H2O
440
MgSO4 ·7H2O
370
（
KH2PO4
170
二
MnSO4·H2O
22.3
）
ZnSO4·7H2O
8.6
CoCl2·6H2O
0.025
培 养 基
微量元素
CuSO4·5H2O H3BO3 Na2MoO4·2H2O KI
培养基的配制步骤
▪ 7.把培养基分装到 所选用的培养容器 中并盖好盖子。
▪ 8.灭菌。
▪ ⑵生长调节剂母液吸取量计算
▪ 吸取量=配方浓度×培养基配制数/母液浓度
▪ ⑶琼脂和糖称取量的计算
▪ 称取量=配方浓度 ×培养基配制数
根据下面培养基配制单进行计算并写出培养基配制步骤
配方 MS+6-BA2.0mg/L+ NAA0.1mg/L+糖3%+ 琼脂0.4%，
母液
倍数 （浓度）
大量元素 20
微量元素 1000
有机物 50
铁盐
100
植物培养基母液的配制
实验1 培养基母液的配制一、实验目的掌握培养基母液的配制方法。
二、实验原理配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
以MS培养基为例，所需配制的母液可分为MS 大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。
另外，还要配制生长调节物质母液，在不同类型的培养基中使用。
三、实验器具和药品电子分析天平、扭力天平、烧杯（50mL、100mL、500mL、1000mL）、量筒（1000mL、100mL、25mL）、容量瓶（1000mL、500mL、100mL）、磨口试剂瓶（500mL、1000mL）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉（1000W）、冰箱。
配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。
植物生长调节物质2，4-D、NAA、6-BA 等。
四、培养基母液的配制过程首先，按书中MS培养基的配方，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后分别进行药品称取和母液配制。
具体操作如下：（1）MS大量元素母液（20倍）的配制。
按照MS培养基的用量扩大20倍，将大量元素配制成20倍的母液。
配制时先用量筒量取蒸馏水大约800mL，放入1000mL的烧杯中，依次分别称取：NH4NO3 33g 、KNO3 38g、KH2PO4 3.4g、MgSO4.7H2O 7.4g 、CaCl2.2H2O8.8g,按顺序先后倒入烧杯中，用玻璃棒搅动，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入1000mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至1000mL，然后倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名，置于4摄氏度冰箱保存备用。
配制培养基时每升MS培养基吸取该母液量为50mL。
（2）MS微量元素母液（100倍）的配制。
植物营养液母液的配制方法和步骤
植物营养液母液的配制方法和步骤
植物营养液母液的配制是植物生长的关键环节，它能为植物提供必要的养分。
以下是配制植物营养液母液的方法和步骤：
1.确定配方
首先，根据植物的种类和生长阶段，选择适合的营养液配方。
可以参考专业的植物营养液配方或研究资料来确定所需的各种营养元素的比例。
2.准备原料
按照选定的配方，准备所需的原料。
通常需要硝酸钙、磷酸二氢钾、硫酸镁、硼酸、硫酸锌、硫酸铜、硫酸铁等无机盐类，以及适量蒸馏水。
注意确保原料纯净、无杂质。
3.计算用量
根据选定的配方和所需的营养液体积，计算各种营养元素的用量。
注意要精确称量，以保证营养液的浓度和比例。
4.溶解肥料
将计算出的各种肥料分别溶解在蒸馏水中，注意要充分搅拌，以保证肥料完全溶解。
如果使用固体肥料，可先将肥料研碎，然后溶解。
5.混合搅拌
将已溶解的各种肥料混合在一起，用搅拌器充分搅拌，确保各种营养元素均匀混合。
搅拌时要小心，避免产生泡沫。
6.调节酸碱度
根据选定的配方要求，用酸或碱调节营养液的酸碱度。
可以使用
稀盐酸或氢氧化钠溶液进行调节，注意要精确测量和控制浓度。
调节后的营养液应呈中性或微酸性。
7.检查澄清度
检查配制好的营养液的澄清度，确保没有悬浮物和杂质。
如有必要，可以过滤或静置一段时间后取上清液使用。
8.储存和使用
将配制好的营养液母液储存于密封的容器中，避免阳光直射和高温。
使用时，根据需要稀释一定比例的营养液，并注意定期更换以保证养分充足。
植物组织培养基母液配制的若干关键环节
植物组织培养基母液配制的若干关键环节植物组织培养（plant tissue culture）是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化形成完整植株的过程.植物组织培养具有取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制等特点.因而被广泛应用于各种植物的快速繁殖之中.培养基母液，也叫浓缩贮备液.它是以培养基配方配制成的高倍的浓缩液，不同组分母液，它的浓缩倍数不同，一般最低为10倍，高的有50倍、100倍、200倍，甚至1000倍.母液是一个方法比较简便、用量比较准确且被广泛采用的配制方法.本文就如何掌握培养基母液配制的操作要领作一阐述，以供参考.以MS培养基为例，其母液的配制包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、氨基酸、植物生长调节物质和有机附加物等种类.(见表1)表1 MS培养基母液的配制成分规定用量/mg.L-1 扩大倍数称取量/ mg 母液定溶体积/ml配1LMS培养基吸取量/ml大量元素KNO3NH4NO3MgSO4·7H2O KH2PO4CaCl2·2H2O微量元数MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2OH3BO3KINa2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O 1900165037017044022.38.66.20.830.250.02520202020201000100010001000100010003800033000740034008800223008600620083025025100010001000100010001000100010001000100010005050505050111111CoCl2·6H2O 铁盐Na2-EDTA FeSO4·7H2O 维生素和氨基酸甘氨酸Vit.B1Vit.B6肌醇0.02537.327.82.00.10.51001000100100505050502537302780100525500010001000100050050050050011010101010101 大量元素和微量元素母液的配制按规定用量,称取所需的各种药品，在配制时为减少工作量，可以把几种药品（如大量元素或微量元素）配在同一母液中（见表1）.但由于各种药品的混合，可能发生反应，生成沉淀物，以致母液失效.为避免类似现象发生，在大量元素、微量元素和维生素及氨基酸的母液配制时，可采用如下2种做法加以解决：①将要配在同一母液的大量元素、微量元素和维生素及氨基酸等化合物，按“表1”所列药品的先后顺序溶解药品，待前一种药品完全溶解后再加入后一种化学药品，以此类推；②使每种成份分别完全溶解，再把它们彼此混合.2 铁盐母液的配制铁盐的成份含硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA）.这两种化合物的溶解和混合较为严格，必须按如下方法配制，否则将会产生沉淀.该方法是：分别溶解FeSO4·7H2O和Na2-EDTA，加热并不断搅拌，使之完全溶解，冷却，将2种溶液混合，调P H至5.5，用蒸溜水加至所需容积，棕色瓶保存于冰箱之中.3 植物生长调节物质母液的配制植物生长调节物质是培养基的重要组分之一，一般是植物激素类物质，如生长素类的IAA、IBA、NAA，赤霉素类的GA3，细胞分裂素类的2，4-D、KT和6-BA等.由于大多数生长调节物质难溶于水，因此配制方法也各不相同：①IAA，IBA和GA3先用少量95%酒精溶解，再加水定容，摇匀后贮于试剂瓶中、贴上标签后，存放在冰箱中；②NAA可用热水或少量95%酒精溶解，再加水定容至所需容积；③2，4-D可溶于少许1mol·L-1的NaOH溶液中，然后加水定容；④KT和6-BA可用少量1mol·L-1的HCl溶解，再加水定容；⑤玉米素先溶于少量95%酒精中，然后加水定容.植物生长调节物质浓度通常用ppm（mg·ml-1）和mol·L-1表示，在配制母液时，常以ppm较为方便，一般配制成0.5ppm的母液，这个浓度既便于计算，也可避免冷藏时形成结晶.4 有机附加物母液的配制在植物组织培养时，培养基中往往要加入一些有机附加物，如椰子汁，以促进组织培养活性.由于椰子汁的活性成分是耐热的，在配制时，要先把由果实中采集到的汁液加热煮沸以除去其中的蛋白质，过滤，然后置塑料瓶中贮存于的-200c的低温冰箱内.。
植物组培母液实验报告
一、实验目的1. 理解植物组织培养母液在植物细胞培养中的重要作用。
2. 掌握植物组织培养母液的配置、保存及使用方法。
3. 通过实验验证不同植物组织培养母液对植物细胞生长和分化效果的影响。
二、实验材料1. 材料：拟南芥叶片、MS培养基、琼脂糖、葡萄糖、琼脂、植物激素（生长素、细胞分裂素、赤霉素等）。
2. 仪器：无菌操作台、超净工作台、显微镜、移液器、培养箱、冰箱、天平等。
三、实验方法1. 植物组织培养母液的配置（1）称取一定量的MS培养基母液，加入去离子水溶解，配制成一定浓度的母液。
（2）将母液加入适量的琼脂糖，溶解后倒入培养皿中，制成固体培养基。
（3）将固体培养基放入培养箱中，于适宜温度下固化。
2. 植物细胞培养（1）将拟南芥叶片表面消毒后，剪成小块，接种到固体培养基上。
（2）将培养皿放入培养箱中，于适宜温度下培养。
（3）观察细胞生长和分化情况，记录实验数据。
3. 植物组织培养母液对细胞生长和分化效果的影响（1）将不同浓度的植物激素加入植物组织培养母液中，制成实验组。
（2）将对照组和实验组进行对比，观察细胞生长和分化情况。
（3）记录实验数据，分析不同植物组织培养母液对细胞生长和分化效果的影响。
四、实验结果与分析1. 植物组织培养母液的配置成功配制了不同浓度的植物组织培养母液，并制作了固体培养基。
2. 植物细胞培养在适宜的条件下，拟南芥叶片细胞在固体培养基上成功生长和分化。
3. 植物组织培养母液对细胞生长和分化效果的影响实验结果表明，不同浓度的植物组织培养母液对细胞生长和分化效果有显著影响。
（1）生长素浓度对细胞生长和分化有促进作用，但过高浓度会导致细胞死亡。
（2）细胞分裂素浓度对细胞生长和分化有促进作用，但过高浓度会导致细胞分化不良。
（3）赤霉素浓度对细胞生长和分化有促进作用，但过高浓度会导致细胞畸形。
五、实验结论1. 植物组织培养母液在植物细胞培养中起着重要作用，其浓度和成分对细胞生长和分化效果有显著影响。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
组织培养 技术ຫໍສະໝຸດ 1. 无机化合物大量元素 所需浓度大于0.5mmol/L大量元素包括N, 0.5mmol/L大量元素包括 所需浓度大于0.5mmol/L大量元素包括N, P, S , Mg。培养基中加入量最多的是N Ca, K, Mg。培养基中加入量最多的是N，一般以硝酸盐或氨 盐。
组织培养 技术
b. 细胞分裂素 分裂素
是一类腺嘌呤衍生物。主要有激动素（ 糠基氨 是一类腺嘌呤衍生物。主要有激动素（ 6-糠基氨 基嘌呤KT）、 苄基氨基嘌呤（ ）、6-苄基氨基嘌呤 基嘌呤 ）、 苄基氨基嘌呤（6-BA）和玉米素 ） 其中最常用的是 常用的是6—BA。 （ZT）等。其中最常用的是 ） 。 • 功能： 功能： 1、促进细胞的分裂和分化 、 2、诱导芽的分化 、 3、促进侧芽的萌发和生长 、 4、抑制衰老 、 •
组织培养 技术
A
B
A：6-BA(0mg/L) ，芽（减少），根（增多）愈伤组织（一定量） ： 减少）， ），根 增多）愈伤组织（一定量） B：6-BA(0.1mg/L)，芽（适量），根（适量）愈伤组织（一定量） 适量）， ），根 适量）愈伤组织（一定量） ： ，
组织培养 技术
如何控制植物细胞分化
• 植物生长调节剂是外源的调节植物生长发育的物质。植物激素是在植 植物生长调节剂是外源的调节植物生长发育的物质。植物激素是在植 是外源的调节植物生长发育的物质 物体内合成的，对植物生长发育有显著调节作用的微量有机物。 物体内合成的，对植物生长发育有显著调节作用的微量有机物。
• • 主要是生长素和细胞分裂素，有时用GA3，ABA。 主要是生长素和细胞分裂素，有时用GA3，ABA。 GA3
分裂素/生长素的比例是控制芽和根形成的 分裂素/ 一个重要条件 • 比例高时——产生芽,比例低时——产生根 比例高时 产生芽,比例低时 产生根 产生芽 •
组织培养 技术 c.赤霉素（ c.赤霉素（GA3） 赤霉素 诱导茎的细胞伸长，对矮生型植物恢复成高生型特别有效， 1、诱导茎的细胞伸长，对矮生型植物恢复成高生型特别有效， 对根无效 2、对生长素和细胞分裂素的活性有增效作用 不耐热， 注：不耐热，应采用过滤灭菌加入 脱落酸（ABA） d. 脱落酸（ABA） 生理作用： 生理作用： 1、抑制蛋白质的合成 抵消和抑制生长素、细胞分裂素、GA的作用 2、抵消和抑制生长素、细胞分裂素、GA的作用 诱导休眠、 3、诱导休眠、促进衰老和脱落
组织培养 技术
生长素类： a. 生长素类： 诱导细胞分裂和根的分化 IBA（ 1）吲哚类：IAA（吲哚乙酸）、 IBA（吲哚丁 吲哚类：IAA（吲哚乙酸） ）、IPA 吲哚丙酸） IPA（ 酸）、IPA（吲哚丙酸） 萘酸类： NAA（萘乙酸） 2）萘酸类： NAA（萘乙酸） 苯氧羧酸类：2,42,4-二氯苯氧乙酸） 3）苯氧羧酸类：2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、 2,4,52,4,5-三氯苯氧乙酸）、 2,4,52,4,5-T（ 2,4,5-三氯苯氧乙酸）、 2,4,5-TP 2,4,5-三氯苯氧丙酸） （ 2,4,5-三氯苯氧丙酸）等。 其中IBA和NAA广泛用于生根， 其中IBA和NAA广泛用于生根，并能与细胞分裂素 IBA 广泛用于生根 互作促进芽的增殖。2.4互作促进芽的增殖。2.4-D 对于愈伤组织的诱导 和生长有效。 和生长有效。
组织培养 技术
组织培养 技术
组织培养 技术
组织培养 技术
注意： 注意： 所有母液都要贴上标签，注明名称、配制倍数、日期， 所有母液都要贴上标签，注明名称、配制倍数、日期， 所有的母液都应保存在0~4 冰箱中， 0~4℃ 所有的母液都应保存在0~4℃冰箱中，若母液出现沉淀或 霉团则不能继续使用。 霉团则不能继续使用。
组织培养 技术
（4）固化剂和悬浮剂 a、固化剂 琼脂、琼脂糖（用于原生质体、 琼脂、琼脂糖（用于原生质体、细胞培养及某些作物的花 药培养） 药培养） 琼脂的用量一般在4 10g/L 琼脂的用量一般在4-10g/L。 琼脂以颜色浅、透明度好、洁净的为上品。 琼脂以颜色浅、透明度好、洁净的为上品。 b、悬浮剂 Ficoll（聚蔗糖） Ficoll（聚蔗糖）
组织培养 技术
组织培养 技术
实验一 培养基母液的制作
实验目的： 实验目的：
• （一）掌握培养基的化学组成；掌握MS培养基的配方组 掌握培养基的化学组成；掌握 培养基的配方组 成； • （二）熟练掌握常用培养基母液的制备方法。 熟练掌握常用培养基母液的制备方法。
组织培养 技术
实验原理
培养基提供植物生长所需的营养成分， 培养基提供植物生长所需的营养成分，满足植物正 常生长发育的需要。 常生长发育的需要。主要包括
组织培养 技术
（四）作业 • （一）简述各种母液的配制方法与注意事项； 简述各种母液的配制方法与注意事项； • （二）熟悉 熟悉MS基本培养基的配方组成。 基本培养基的配方组成。 基本培养基的配方组成
硫胺素（VB1）与愈伤组织的产生和生活力有关， 硫胺素（VB1）与愈伤组织的产生和生活力有关，是所有植 物组织培养初期需要的维生素。 物组织培养初期需要的维生素。 盐酸吡哆醇（VB6）促进根的生长。 盐酸吡哆醇（VB6）促进根的生长。 烟酸（VB3，又称维生素PP 促进胚的发育。 PP） 烟酸（VB3，又称维生素PP）促进胚的发育。 泛酸钙（VB5）、生物素（VH）、钴胺素（VB12）、叶酸 泛酸钙（VB5）、生物素（VH）、钴胺素（VB12）、叶酸 ）、生物素 ）、钴胺素 ）、 VBc），Vc等 ），Vc （VBc），Vc等。
组织培养 技术
实验 药用植物组织培养技术
• • • • • 实验一 实验二 实验三 实验四 实验五 培养基母液配制 诱导愈伤培养基配制和灭菌 外植体接种技术 接种效果观察， 接种效果观察，分化培养基配制 分化接种
组织培养 技术
植物组织培养： 植物组织培养： •
在无菌和人为控制外因条件下，将离体器官、组 在无菌和人为控制外因条件下，将离体器官、 细胞、 织、细胞、胚胎或原生质体培养在人工配制的培养基 使其脱分化产生愈伤组织， 上，使其脱分化产生愈伤组织，进而分化出器官并长 成完整植株的方法。 成完整植株的方法。
组织培养 技术
（三）、培养基的配制 ）、培养基的配制
试验课上讲
1.贮备液（母液） 1.贮备液（母液）的配制 贮备液 为什么要配制母液？ 为什么要配制母液？ 1）、方便 ）、方便 ）、准确 有些成分量太小） 准确（ 2）、准确（有些成分量太小） 大量元素 以MS培养基配制为例，包括大量元素、微量元素、铁盐、 MS培养基配制为例，包括大量元素、微量元素、铁盐、 培养基配制为例 有机物质、生长调节物质母液。 有机物质、生长调节物质母液。
微量元素 Mo Co
植物所需的微量元素有Fe、Cu、Zn、 Mn、 植物所需的微量元素有Fe、Cu、Zn、B、 Mn、Al Fe
组织培养 技术
2. 有机化合物
有机物质主要指维生素类物质、糖类物质。 有机物质主要指维生素类物质、糖类物质。 a、维生素类物质 维生素类物质在酶系统中有催化功能。 维生素类物质在酶系统中有催化功能。
组织培养 技术
b、糖类 糖在培养基的作用： 糖在培养基的作用： ）、为细胞提供合成新物质的碳骨架 1）、为细胞提供合成新物质的碳骨架 ）、为细胞的呼吸代谢提供底物和能量 2）、为细胞的呼吸代谢提供底物和能量 ）、维持渗透压 3）、维持渗透压 蔗糖是广泛应用的一种碳源，一般浓度1 5%。 蔗糖是广泛应用的一种碳源，一般浓度1-5%。 是广泛应用的一种碳源 葡萄糖和麦芽糖也是常用的碳源。 葡萄糖和麦芽糖也是常用的碳源。
组织培养 技术
C.天然有机物 C.天然有机物 一些天然的有机物如椰乳、番茄提取物、酵母提取物、 一些天然的有机物如椰乳、番茄提取物、酵母提取物、 马铃薯煮汁也常用于植物组织培养， 马铃薯煮汁也常用于植物组织培养，并表现出了良好的 促进作用。 促进作用。
组织培养 技术 3、植物生长调节物质
• 无机元素和有机营养构成的培养基仅保证培养物的生存与 最低生理活动，只有加入植物生长调节物质， 最低生理活动，只有加入植物生长调节物质，才能诱导细 胞分裂、脱分化和再分化。 胞分裂、脱分化和再分化。
组织培养 技术
A
B
C
0mg/L， ），根 A：NAA 0mg/L，芽（少），根（无） 0.1mg/L， ），根 ），愈伤组织 少量） 愈伤组织（ B：NAA 0.1mg/L，芽（少），根（无），愈伤组织（少量） 5.0mg/L， ），根 ），愈伤组织 一定量) 愈伤组织（ C：NAA 5.0mg/L，芽（少），根（多），愈伤组织（一定量)