脂质体的应用与制备

√逆相蒸发法
准确称取卵磷脂以及胆固醇于圆底旋蒸瓶中，加入乙醚将其溶解， 取龙胆苦苷溶液与之混合，并用超声波细胞粉碎仪进行超声处理， 形成 W/O 型乳化液，将其置于旋转蒸发仪上，在水浴、真空条件下 旋转蒸发至生成反胶束凝胶，继续维持真空度旋蒸至反胶束凝胶塌 陷生成水混悬液，定容。即得到脂质体悬液。
然后使用公式：EE（%）=（C总-C游离）/ C总×100% 6.储存—水相的选择。 脂质体通常以静脉注射作为给药途径，合适的水相选择是必要的。
影响脂质体制备的因素：药液浓度，胆固醇与卵磷脂质量比，
有机相与内水相体积比，超声功率，水浴温度， 减压蒸发时间等。
结语
新型脂质体的研究已从单一脂质体向多功能脂质体如pH敏感免疫脂 质体、热敏感长循环脂质体等方向发展.这些脂质体在稳定性、靶向 性和疗效方面都比传统脂质体有明显改善,但成本，简化完善制备工 艺仍是脂质体在药物载体应用上的关键问题。
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以龙胆苦苷为例制备龙胆苦苷脂质体。 龙胆具有利胆、抗炎、健胃、降压等作用。龙胆中主含环烯醚萜苷 类成分，龙胆苦苷为其中主要有效成分。
实验步骤：
1.提纯龙胆苦苷 2.制龙胆苦苷标准溶液，作标准曲线 （为包封率的测定做准备） 3.检测龙胆苦苷的稳定性以及仪器的精密度 4.选择了复乳法、薄膜水化法、逆相蒸发法等三种脂质体常见制备 方法进行制备龙胆苦苷脂质体。
5.包封率的测定 分别量取相同体积脂质体悬液置于两支离心管中。向其中一支 离心管加入的曲拉通溶液并置于水浴中进行破乳，按标准曲线测定 方法进行测定，并根据标准曲线计算溶液中龙胆苦苷的总浓度C总。 向另一支离心管中加入的鱼精蛋白溶液，混匀后静置，用台式冷冻 离心机进行离心，取上清液定容，按标准曲线测定方法进行测定， 根据标准曲线计算溶液中游离的龙胆苦苷的浓度 C游离。
磷脂分子具有一个亲水的极性头部和一个 疏水的非极性尾部，因此在组成脂质体时， 磷脂的亲水极性头部位于脂质体双分子层 的外部，疏水的非极性尾部朝向脂质体双 分子层的中间。
脂质体( liposome)是单层或多层脂质双分 子膜以同心圆的形式包封而成,类似细胞膜 的微球体。
脂质体按照不同的直径大小以及内囊数目可分为以下几种类 型： √直径小于100nm 的小单层脂质体(SUV) √直径大于100nm 的大单层脂质体(LUV) √多层同心的多层脂质体(MLV) √非同心多囊泡脂质体(MVL)
脂质体包封率的测定 评价脂质体质量的指标有粒径、粒径分布和包封率等。 其中脂质体的包封率是衡量脂质体内在质量的一个重要指标。 脂质体包封率是指被包裹物质（如某药物）在脂质体悬液中占药物 总量的百分量。决定其包封率的因素为药物与磷脂膜的作用力、膜 材的组成、脂质体的内水相体积、脂质体数目及药脂比(药物与磷脂 膜材比)等。 常见的包封率测定方法有分子筛法、超速离心法、超滤法、阳 离子交换树脂法。 “阳离子交换树脂法”是利用离子交换作用，将荷正电的未包 入脂质体中的药物(即游离药物)，通过阳离子交换树脂吸附除去， 包封于脂质体中的药物，由于脂质体荷负电荷，不能被阳离子交换 树脂吸附，从而达到分离目的，进而测定包封率。 原理示意图见下图。
√复乳法： 准确称取卵磷脂以及胆固醇于圆底旋蒸瓶中，加入乙醚将其溶解， 量取的龙胆苦苷溶液 与之混合，用超声波细胞粉碎仪进行超声处理， 形成 W/O 型乳化液，加入超纯水作为外水相，继续超声处理，形成 W/O/W 型乳化剂，将其置于旋转蒸发仪上，在水浴、真空的条件下 旋转蒸发除去有机溶剂，定容。即得到脂质体悬液。 √薄膜水化法 准确称取卵磷脂以及胆固醇于圆底旋蒸瓶中，加入乙醚将其溶解置 于旋转蒸发仪上，在水浴、真空的条件下旋转蒸发除去有机溶剂直 至圆底旋蒸瓶的瓶壁上形成均匀的脂质薄膜，量取龙胆苦苷溶液与 之混合，在漩涡混合器上振摇后，并用超声波细胞粉碎仪进行超声 处理，定容。即得到脂质体悬液。
脂质体应用及其制备
卢铭辉 20110006015
脂质体—结构
英国科学家庞汉姆等在 1965 年进行生物膜 研究时，发现磷脂分子在水中分散后能够自 发的形成一种囊泡体，这种囊泡体具有类似 于细胞膜的双分子层结构，他将这种囊泡体 称为脂质体。 20世纪70年代初用脂质体作为药物载体包 埋淀粉葡萄糖苷酶治疗糖原沉积病首次获 得成功后, 脂质体便引起了广泛关注。
参考文献：
[1]姚新武. 脂质体的制备及应用研究[D].北京化工大学,2012. [2]杨彤. 新型脂质体的研究进展[J]. 医药导报,2009,03:336-338. [3]朱斌,许时婴,夏书芹. 薄膜水化法制备辅酶Q_(10)脂质体[J]. 食品与机械,2006,06:39-41+79. [4]陈淑花,詹世平,张晶,陈理. 超临界逆向蒸发法制备葡萄糖脂质 体实验及性能表征[J]. 大连大学学报,2012,06:37-40. [5]蒲宝婵,赵骏,邱超,张雪. 复乳法制备龙胆苦苷脂质体[J]. 药物 评价研究,2011,06:428-431. [6]叶鹏,宋金春,郭咸希. pH梯度法结合逆向蒸发法制备氟尿嘧啶脂 质体[J]. 中国药师,2009,03:308-311.
脂质体—分类应用
作用：脂质体的囊泡结构能够充当药物分子或其他物质等的载体。
亲脂性的药物可以储存在磷脂双分子层中，亲水性的药物可以存储在脂 质体的内囊中。
√长循环脂质体
长循环脂质体是指经过修饰作用的具有一定空间稳定性的脂质体， 常见的修饰物有聚乙二醇（PEG）、神经节苷脂（GM1）等。因其具有空 间稳定性，所以长循环脂质体可在体内长时间驻留，进而使药物的作用 时间得到延长，发挥出长效作用。 GM1能够增强脂质体膜的刚性，减少单核吞噬细胞系统（MPS）对长 循环脂质体的吞噬率。 PEG可以在脂质体的表面产生空间位阻层，以使长循环脂质体不被内 皮网状系统（RES）吞噬，进而延长药物作用时间。
2.实验方法
在制备含药脂质体时，根据药物装载的机理不同，可分为“主动载 药”与“被动载药”两大类。 所谓“主动载药”，即通过脂质体内外水相的不同离子或化合物梯 度进行载药，主要有K+-Na+梯度和H+梯度(即pH梯度)等。 传统上，人们采用最多的方法是“被动载药”法。“被动载药”即 首先将药物溶于水相或有机相(脂溶性药物)中，然后按所选择的脂质体 制备方法制备含药脂质体。
√热敏脂质体
热敏脂质体又叫温度敏感脂质体，其所使用的磷脂具有比人体体温 稍高的相变温度，在当环境温度达到相变温度时，脂质体双分子层会由 “胶晶态”转变为膜流动性更强的“液晶态”，从而促使脂质体所包封 药物的释放率加大。 在研究中，有学者提出将肿瘤等病灶部位升温，使局部温度能够高 于热敏脂质体的相变温度，可以使抗肿瘤药物在肿瘤病灶部位快速释放， 来提高脂质体的靶向治疗作用。 热敏脂质体已被广泛的应用于核酸、抗生素和抗肿瘤药物等的载体 研究，尤其在抗肿瘤药物载体方向的研究已经取得了较深入的成果。
谢谢！
inside acid pH
DH+ H+
DH+ H+
D
D
被动载药 (1)薄膜分散法 将磷脂溶解于适量的氯仿或乙醚等有机溶剂中，在 旋转蒸发仪上旋转蒸发使磷脂干燥，使磷脂在瓶壁上形成一层脂质 薄膜。使用合适的溶液来水化已干燥的脂质薄膜，并根据磷脂的浓 度，通过振摇、超声或涡旋震荡等方式进行处理，得到的主要是大 多室脂质体的混悬液。 (2)复乳法 先将脂质体的膜材和脂溶性药物溶于适量有机溶剂中， 按比例加入少量水相溶液，通过超声或震荡等方法进行处理以得到 状态稳定的 W/O 乳化液，再加入大量水相溶液进行第二次乳化处理， 得到 W/O/W 乳化液，再通过减压蒸发除去有机溶剂，即得到脂质体 悬液。 （3）逆相蒸发法 将磷脂等脂溶性成分溶于有机溶剂，再按一定比 例与含药的缓冲液混合、乳化，然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂 质体。该法适合于水溶性药物、大分子活性物质，如胰岛素等的脂 质体制备，可提高包封率。
√免疫脂质体
脂质体的表面连接上抗体或受体，则可通过特异性结合作用，使脂 质体的移动具有靶向性，这样的脂质体叫做免疫脂质体。由于其具有运 载量大、靶向性强和毒副作用小等优点，也被学者研究来用于肿瘤靶向 治疗。
√磁性脂质体
磁性脂质体是在脂质体中掺入铁磁性物质制成, 在体外磁场的作用 下,把抗肿瘤药物选择性地输送和定位于靶细胞, 从而降低药量, 减少毒 性，提高疗效。 在交变磁场作用下, 到达靶区的磁场粒子能迅速升温至有效治疗温 度, 导致肿瘤组织坏死, 而无磁性脂质体的正常组织则不受损伤。
对于脂溶性的、与磷脂膜亲和力高的药物，“被动载药”法较为适 用。 而对于两亲性药物，其两相分配系数受介质的pH值和离子强度的影 响较大，包封条件的较小变化，就有可能使包封率有较大的变化，首选 “主动载药” 方法。 下图是“主动载药”中pH梯度法载药原理示意图。
oudside neutral pH
脂质体—制备
√实验原理 常见的磷脂分子结构中有两条较长的疏水烃链和一个亲水基 团。将适量的磷脂加至水或缓冲溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水 基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此相对缔和为双分子层，构成脂 质体。 用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如大豆卵磷脂、蛋黄卵 磷脂等；合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱等。 常用的附加剂为胆固醇。胆固醇也是两亲性物质，与磷脂混合使用， 可制得稳定的脂质体，其作用是调节双分子层的流动性，降低脂质体 膜的通透性。 其他附加剂有十八胺、磷脂酸等，这些附加剂能改变脂质体 表面的电荷性质，从而改变脂质体的包封率、体内外稳定性、体内分 布等其他相关参数。
√pH 敏感脂质体
pH 敏感脂质体是基于肿瘤间质处的pH 值比正常组织低的特点而设 计的一种具有细胞内靶向和控制药物释放作用的脂质体。目前常用的PH 敏感脂质体为二油酰磷脂酰乙醇胺( DOPE )。 当脂质体处于中性pH 环境时,DOPE的羧基离子可提供有效静电进行 排斥,使脂质体保持稳定, 当pH改变时, 双层脂质体可转变成六角相, 引 发脂质体膜不稳定、聚集、融合、释放内容物。从而将包封物导入细胞 质并主动靶向到病变组织,提高药物的靶向性。