两株东北红豆杉内生真菌的生理特性

（ ｎ ） ． ， 生 素 Ｂ １ ０ｔ ， 物 素 ５ ｇ 琼 脂 １ ， 馏 ｚ ０１ 维 ｇ 。０ ｇ 生 ｔ ， ５ｇ蒸
水 ｌ ０ ，Ｈ ． 。 ０ｍＬ ｐ ６ ０ ０
葡 萄 糖 在 距 离 紫 外 灯 下 ８ｅ 处 铺 成 薄 层 ， 紫 外 灯 照 射 ｍ 用 ６ ｉ 菌 ， 生 素 、 物 素 用 紫 外 灯 灭 菌 后 配 成 原 液 使 用 。 Ｏｍ ｎ灭 维 生 磷 酸 盐 用 ２ ０ｍＬ蒸 馏 水 溶 解 后 １ １ ×２ ａｉ 菌 。其 它 物 ０ ２℃ ０ｒ ｎ灭 质 溶 入 ８ ０ｍ ０ Ｌ蒸 馏 水 １ １ × Ｏｍ ｎ灭 菌 。 最 后 将 这 些 成 分 ２ ℃ ２ ｉ
在 改 变 维 生 素 种 类 和 无 维 生 素 的条 件 下 ， 光震 荡 培 养 。 避 每 １ 体 培 养 测 定 菌 落 生 长 的 直 径 （ ２ｈ固 ｍｍ） 液 体 培 养 或 测 定 菌 丝 干 质 量 ， 种 实 验 重 复 ３次 。 每
１ ２ ３ 茵 丝 生 长 量 测 定 ． ．
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第 ３ 卷 第 １期 ｌ
２０ ０ ３年 １月
东 北 林 业 大 学 学 报 Ｊ Ｕ Ｎ ＬＯ Ｏ Ｔ Ｅ Ｓ Ｏ Ｅ Ｔ Ｙ Ｏ Ｒ Ａ Ｆ Ｎ Ｒ Ｈ Ａ Ｔ Ｆ Ｒ Ｓ Ｒ Ｉ Ｅ 曼！ Ｖ 垦 ！
ＶＯＪ ３ｌ ． ＮＯ ．１
盐缓 冲剂 】在不 同 ｐ ， Ｈ值梯 度 条件 下 ， 光震 荡 培养 ； 、 源 避 氮 碳
测 定 ： 改 良后 的 Ｌｌ —Ｂ ｒｅ 液 体 培 养 基 ， 分 别 改 变 氮 碳 源 用 ｉｙ ａｎｔ ｌ ｔ 在 条 件 下 ， 光 震 荡 培 养 ； 变 培 养基 质量 浓度 测 定 ： 不 同 的 总 体 避 改 在 培养基质量浓度和葡萄糖 质量 浓度条件 下 ， 光震 荡培 养 ； 丝 避 菌
换算 成 干质量 （ ｍｇ／ Ｌ 。 ）
程 院 读 士粪 。 ’８ 生 阳 科 学 药 ２ 结 与 学 ， 硕 研 ’ ７ 月 ， 药 大 制 工 口 司 析 在 究 年 沈 生女 禾 刀 果 分Ｉ
Ｔｗｏ ｅ ｄｏ ｈｙｅ ｒ ｔｕ ｓ ｎ ｐ ｔｓ Ｅｕ ｏ ｉ ｍ ｐ．１ ａｎ ｐｅ ｇｉ ｓ ｐ．１ ０３ ｓ ｌ ｔｄ ｒ ｍ Ｔａ ｕ ｕ ｐｉ ｔ ｅｂ ｅ ００１ ｄ Ａｓ ｒ Ｕｕ ｓ ０ ｉｏ ａｅ ｆｏ ｘ ｓ ｃ ｓ ｄａ ａ Ｓｉ ｔＺｕｃ ． ａ－ ｈｅ ｓｕｄ ｃ ｌ ｔ ｔ ｙ ｅ
同进化 的机 制 ， 加深 了解 生物 体 之 间竞争 与 生存 的关 系 ， 以及
丰 富 真 菌 多 样 性 均 具 有 重 要 意 义 。 但 是 ， 关 内 生 真 菌 的 生 有 理 特性 的基 础研 究却 少见 报道 ， 此 ， 者对 两 种具 有代 表性 为 作 的东北 红 豆杉 内生 真菌 的生 理特 性进 行 了初 步研究 。
１ ２ ２ 茵 丝 生 长 条 件 实验 方 法 ． ．
１ 材 料 和 方 法
１ １ 材料 ． 菌 株 来 源 ： 长 白 山 ２ ０年 生 东 北 红 豆 杉 树 皮 中 分 离 出 从 ０
温 度 测 定 ： Ｐ Ａ 固 体 培 养 基 ， ２ 、５ ３ 、５Ｃ不 同 梯 度 用 Ｄ 在 ０ ２ 、０ ３ ￣ 条件下避光培养 ； 离子浓度测定 ： Ｐ 氢 用 Ｄ液 体 培 养 基 ， 用 磷 酸 再
培 养 基 ： Ｄ 培 养 基 （ 体 和 液 体 ） 改 良 后 的 Ｌｌ ＰＡ 固 ； ｉｙ— ｌ
Ｂ ｒｅｔ 养 基 ” — — 葡 萄 糖 １ ， 门 冬 氨 酸 ２ｇ 磷 酸 二 氢 ａｎｔ培 ０ｇ 天 ， 钾 ｌｇ 硫 酸 镁 ０ ５ｇ 铁 （ ｅ ） ． ， （ ０ １ｇ 锌 ， ． ， Ｆ ” ０ ２ｇ 锰 Ｍｎ’） ． ，
ｔ ｔ ｅ ｈａ ｔｍｐｅ ａｕｒ ｓ ｓｇ ｉ ｃ ｔｅｆ ｃ ｎ ｈ ｒ ｗｔ ｈ ｓ ｗｏ ｅｎ ｏ ｒ ｔ ｅ ｈａ ｉ ｎ ｆ ａ ｆｅ ｔｏ ｔ ｅ ｇ ｏ ｈ ｏ ｔ ｅ ｅ ｔ ｄ ｐｈｙｅ ｄ ｔ ｒ ｄｕ ｔｏ ｐ ｒ ｓ ｐＨ — ７ ｉ ｕ ｔ ｂｅ ｉ ｎ ｆ ｔ ｓａｎ ｈｅ ｐ ｏ ｃ ｉｎ ｏ ｓ ｏ ｅ ． ｆ ６ ｓ ｓ ｉａ ｌ ｆｒ ｔ ｒｗｔ ｆｅ ｏ ｙ ｅ ． Ｔ ｒ ｉｈｔｏ ｙ ｈａ ａ ｏ ｉｉｅ ｃ ｒｅａ ｉｎ ｗｉｈ ｔ ｅ ｃ ｎ ｎ￣ａ ｏ ｆ ｃ ｔ ｅ ｍ ｅ ｕ ． ｏ ｈｅ ｇｏ ｈ ｏ ｎｄ ｐｈ ｔ ｓ ｈｅ ｄ ｙ ｗｅ ｇ ｆ ｈ ｐ ｅ ｈ ｓ ｐ ｓｔｖ ｏ ｒ ｌｔｏ ｔ ｈ ｏ ｃｅ ｉ ｔ ｎ ｏ ｕｌ ｕｒ ｄ ｍ ｉ
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１ ２ １ 接 种 方 法 ．．
打 块 接 种 法 ： 直 径 为 １ 的 打 孔 器 在 固 体 培 养 基 上 用 ０ｍｍ
打 孔 ， 上 相 同 大 小 的 菌 块 ， 隔 １ 接 每 ２ｈ测 量 菌 丝 的 扩 张 情 况 。
们 的关 注 。内生 真菌 在 宿主体 外 的基 础研究 对 于 阐明 二者协
内 生 真 菌 （ ｎ ｏ ｈ ｔ ｕ ｇ） 是 指 在 其 整 个 生 活 史 或 生 Ｅ ｄｐ ｙ ｃｆｎ ｉ ｉ 活 史 的某个 阶段 生活 在 活体 植 物 组 织 内 ， 没有 引 起 明 显侵 却 染 的真 菌 ， 括那 些 在其 生 活 史 中 的 某 一 阶段 营表 面 生 的腐 包 生 菌 ， 宿 主 暂 时 没 有 伤 害 的 潜 伏 性 病 原 菌 和 菌 根 菌 … 。 由 对
ｓ ｂｅ ｔ ｉ ｉ ｐ ｐ ｒ ｈ ｅ ｅａ ｒ ，ｃｒ ｏ ｏ ｒｅ ，ｎｔ ｇｎ ｓｕ ｃ ｓ ｐ ｎ ｊｃ ｔ ｓ ａ ｅ ．Ｔ ｅｔ ｓｎｈ ｍｐ ｒ ｔ ｅ ａｂ ｎ ｓ ｕｃ ｓ ｉ ｏ ｅ ｏ ｒｅ ， Ｈ，ｔｅ ｃ ｎ ｅ ｔ ｔ ｎ ｏ ｅ ｍ ｄａ ａ ｄ ｓｃ ｈ — ｕ ｒ ｈ ｏ ｃ ｎｒ ｉ ｆｔ ｅ ｉ ｎ ａ ｃ ａ ａｏ ｈ
固 体 培 养 可测 定 培 养 皿 菌 落 生 长 的 直 径 （ ｍｍ） 液 体 培 养 ； 可取 一定体 积发酵 液 过滤 ， 自来 水 淋 洗 至 流 出 液 无 色 ， 入 离 倒 心 管 ， 入 适 量 自来 水 ， ０ ０ｒｒ ｎ离 心 至 上 清 液 不 再 带 有 发 加 ３ ０ ／ ｉ ａ 酵 液 的颜色 为止 ， ６ ￣ 温箱 中烘 干至 恒 质 量 ， 质 量 ． 在 ０Ｃ恒 称 再
液 体 接 种 方 法 ： １ 用 ５ｍＬ无 菌 水 洗 下 良 好 生 长 于 １ Ｌ ７ｍ Ｐ Ａ斜 面上 的菌丝 或 孢 子 ， 人 液 体 Ｐ Ａ培 养 基 中 ， 长 一 Ｄ 接 Ｄ 生 定 时 间 （ 般 为 ２ ） ， 人 各 种 液 体 考 察 培 养 基 中 ， 长 一 ４ｈ 后 接 生 到 一定 时 间后 测菌 丝 干质量 。
Ｊ ｎ． ２００ ａ ３
两 株 东 北 红 豆 杉 内 生 真 菌 的 生 理 特 性
史 小 凤 项 勇
（ 阳药 科 大 学 制 药 工 程 学 院 ， 阳 ，１０ ６ 沈 沈 １０ １ ）
王 晓 燕
（ 北林业 大 学） 东
吕安 国 吴 文 芳
（ 国科 学 院应用生 态研 究 所） 中
摘 要 采 用 接 种 法 ， 两 株 东 北 红 豆 杉 内 生 真 菌 散 囊 茵 （ ｕｏｉｍ ｓ ． １０ ） 和 曲 霉 （ ｓｅ ｉｕ ｐ ，０ ３ 对 Ｅ ｒｔ ｐ ，０ １ ｕ Ａｐｒ Ｕ ｓｓ ． １０ ） ｇ 在 不 同 温度 、Ｈ、 源 、 源 、 养 基 及 糖 质 量 浓 度 下 进 行 了 生 理 实 验 研 究 。 结 果 表 明 ： ｐ 碳 氮 培 温度 对 两 种 菌株 的 生 长 和 孢 子 的 产 生 具 有 明 显 的 影 响 ；Ｈ ｐ ６—７时 菌 株 生 长 良好 ， 可 以 保 持 较 高 的 茵 液 质 量 浓 度 ； 种 菌 株 均 以 蔗 糖 为 主 且 两 要 碳 源 ， 丝 干 质 量 与 培 养 基 质 量 浓 度 呈 正 向 关 系。 茵
于 内 生 真 菌 与 宿 主 之 间 的特 有 关 系 以 及 在 生 物 进 化 、 态 学 、 生 生 物 防 治 和 药 物 开 发 方 面 的 研 究 进 展 ， 生 真 菌 逐 渐 受 到 人 内
在 无 菌 的 条 件 下 混 合 。 培 养 基 灭 菌 后 ， ｌ ｌＬ的 盐 酸 和 ｌ 用 ／ ｍｏ ｍｏ／ ＬＬ的 氢 氧 化 钠 调 节 ｐ 值 至 ６ Ｈ 。 １２ 方法 ．
中 维 生 素 缺 乏 的 测 定 ： 良后 的 Ｌｌ —Ｂｒｅ 液 体 培 养 基 ， 别 改 ｉｙ ａ ｔ ｌ ｎ ｔ 分
来 的 菌 株 — — 散 囊 菌 （ ｔｏｉｍ ｐ １０ ． 和 曲霉 （ ｓｅｇｌ Ｅｔ ｔ ｓ ． ０ １ ） ｒ ｕ Ａｐ ｒｉ －
ｌｓｓ ． ０ ３） ｕ ｐ １ ０ 。
关 键 词 东北 红 豆 杉 ； 内生 真 菌 ； 理 实 验 生 分 类 号 ￥ ９ ．９ ７ ３ １ ７ １ ４ ；ｓ ６ ． ５ Ｐｈ ｓｏｏ ｉａ ａ ａ ｔｒｓｉｓｏ ｙ ｉｌ ｇｃ ｌＣｈ ｒ ｃ ｅ ｉｔｃ ｆＴｗｏ Ｅｎ ｏ ｈ ， ｓ ｆ ｒ Ｔ ｘ ｓ ｃ ｓ ｉａ ａ Ｓ ｉＸｉｏｅ ｇ，Ｘｉｎ ｎ Ｔ ｅ Ｉ ｓｉ ｔ ｆ ｄ ｐ ３ ｅ ｏ ａ ｕ ｕ ｐ ｄ ｔ ／ ｈ ａ ｆｎ ｔ ａ ｇ Ｙｏ ｇ（ ｈ ｎ ｔｕｅ ｏ ｔ Ｐ ａｍａ ｅ ｔ ａ ｇｎ ｅｉｇ，Ｓ ｅ ｙ ｎ ｈ ｒ ｃ ｕｉａ ｈ ｒ ｃ ｕ ｉ ｌＥｎ ｉｅ ｒｎ ｃ ｈ ｎ ａ ｇ Ｐ ａｍａ ｅ ｔ １ ｉｅ ｓｔ ｃ ．Ｕｎｖ ｒ ｉ ｙ，Ｓ ｅ ｙ ｎ ｌ ０ ６，Ｐ、 Ｒ、 Ｃ ｉａ）；Ｗａ ｇ Ｘｉｏ ａ ｈ ｎ ａ ｇ ０１ １ ｈｎ ｎ ａｙｎ （Ｎ ｒ ｅ ｓ ｏ ｅｔｙＵｎｖ ｒｉｙ ｏ ｔ ａ ｔＦ ｒ ｓｒ ｉｅ ｓｔ ）；Ｌ ｇ ｏ，Ｗｕ Ｗｅ ｆｎ （ ｎ ｔｕｅ ｏ ｐｉｄ Ｅ ｏｏ ｙ，Ｃｈｎ ｓ ａ ｅ ｆＳ ｉｎ ｅ ） ／ ｈ ａ Ａｎ ｕ ｎａ ｇ Ｉ ｓｉ ｔ ｆＡｐ ｌｅ ｃ ｌｇ ｔ ｉｅ ｅＡｃ ｄ ｍｙｏ ｃｅ ｃ ｓ ／ Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｏ ｒ ａ ｆＮｏ ｈ ａ ｔＦ ｒｓｒ ｉｅｓｔ．一２ ０ Baidu Nhomakorabea ｒ ｅ ｓ ｏｅ ｔ Ｕｎｖ ｒｉ ｙ ｙ ０ ３，３ｌ ） （１ ，一６ ９—７ｌ
Ｋｅ ｒ Ｔ ｚ ｓ ｃ ｓ ｉ ａ ａ Ｓ ｅ ｔＺ ｃ ． ｙ ｗｏ ｄｓ ａ ｕ ｕｐ ｄ ｔ ｉｂ ｅ ｕ ｃ ；Ｅｎ ｏ ｈ ｔ ｄ ｐ ｙ ｅ；Ｐ ｙ ｉｌ ｇ ｃ ｌｃ ａ ａ ｔ ｒｓｉ ｘ ｅ ｉ ｎ ｈ ｓｏ ｏ ｉ ａ ｈ ｃ ｅ ｔ ｅ ｐ ｒ ｒ ｉ ｃ ｍｅ ｔ