2.荧光显微镜的结构及荧光染色

思考题
1.影响荧光显微镜成像质量的因素 影响荧光显微镜成像质量的因素 2.激发滤色镜和阻断滤色镜的功能及区别？两者有 激发滤色镜和阻断滤色镜的功能及区别？ 激发滤色镜和阻断滤色镜的功能及区别 何关系？怎样选用？ 何关系？怎样选用？
开启光阀 . 开放孔径光阑和视场光阑至最大开度 ,即 即 “Min” - “Max” . 旋转物镜转换器 ,无物镜的空洞进入光路 无物镜的空洞进入光路, 无物镜的空洞进入光路 旋下防尘盖光线射向镜台 . 载物台上放一白纸 ,让汞灯电弧像投在其 让汞灯电弧像投在其 上. 使电弧像在白纸上聚焦， 用灯室外的聚焦杆 ,使电弧像在白纸上聚焦， 使电弧像在白纸上聚焦 调中汞灯。 并用调中螺钉 ,调中汞灯。 调中汞灯
四、观察动植物细胞的自发荧光和 继发性荧光
材料: 藻类, 鸭趾草下表皮, 材料 藻类 鸭趾草下表皮 动物结缔组 织, 血 细胞, 花粉 细胞 花粉. 染液: 0.01%丫啶橙染液 染液 丫啶橙染液. 丫啶橙染液 观察藻类， 观察藻类，鸭趾草下表面叶绿体的自发荧光 丫啶橙染花粉, 血细胞, 疏松结缔组织。 丫啶橙染花粉 血细胞 疏松结缔组织。
6.缩小光阑开度 缩小光阑开度
视场光阑(F)和孔径光阑 的开度 在观察样品 视场光阑 和孔径光阑(A)的开度 ,在观察样品 和孔径光阑 时应朝“ 时应朝“Min”向转动 ,使其适当缩小 . 向转动 使其适当缩小
7.光阀的使用 光阀的使用
在荧光观察暂短中止时 ,可用光阀阻断光路 ,勿 可用光阀阻断光路 勿 熄灭汞灯 ,以免减短其使用寿命 . 以免减短其使用寿命
荧光显微术
实验目的
1.了解荧光显微镜的基本构成和基本原理。 了解荧光显微镜的基本构成和基本原理。 了解荧光显微镜的基本构成和基本原理 2. 初步掌握荧光显微镜的调节步骤和使用。 初步掌握荧光显微镜的调节步骤和使用。
实验用品
Olympus荧光显微镜，载玻片，盖 玻片，擦镜纸，吖啶橙染料等实验 用材料。
来自百度文库
实验内容
一、荧光显微镜的成像原理 二、荧光显微镜的基本结构 三、荧光显微镜的使用方法 四、观察动植物细胞的自发荧光 和继发性荧光
一、显微镜的成像原理
荧光显微镜是利用一定波长的光使样品受到激发，产 生不同颜色的荧光，以用来观察和分辨样品中某些化学成 分和细胞组分的一种显微镜。 自发荧光: 组织、细胞不经荧光色素染色，在紫外光照射 自发荧光 下，某些成分所呈现的荧光，称为自发荧光 。 继发性荧光: 继发性荧光 组织、细胞经荧光色素染色，由于荧光色素 和组织细胞内的某种成分结合后而呈现的荧光为继发性荧 光。
二、荧光显微镜的基本结构和光路 图
1. 基本结构 基本结构: 光源： 光源：超高压汞灯,用以产生强光照(含大量紫外光 ,蓝紫 光) 滤片系统: 滤片系统 激发滤色镜，提供一定波长范围的激发光 . 阻断滤色镜 ,透过相应波长范围的荧光 ,阻断 或吸收 剩余激发光 . 二向分色镜，透射长波光线和反射短波光线的功能 . 荧光物镜 普通显微镜
荧光显微镜结构图
荧光显微镜的光路图
三 荧光显微镜的使用方法
（一）荧光显微镜的调整方法 1.汞灯的安装 汞灯的安装: 汞灯的安装
切断电源 ,从插座上拔下电源线 . 从插座上拔下电源线 开启灯室 ,将汞灯安装到灯架上 . 将汞灯安装到灯架上 特别是中心球状部分,以 严防手指触摸灯管 ,特别是中心球状部分 以 特别是中心球状部分 免污染 汞灯装入灯室 ,封上灯室盖后 ,方可按通电 封上灯室盖后 方可按通电 源.
（二）荧光镜检样品的制作
1. 不能使用本身能产生荧光的药剂 2. 切片标本不能太厚 3. 因石蜡可产生青色荧光，采用石蜡制片时，脱蜡 因石蜡可产生青色荧光，采用石蜡制片时， 必须彻底。切片进入水后，应充分水洗， 必须彻底。切片进入水后，应充分水洗，再经荧光 染料处理。 染料处理。 4. 最好采用萤石玻璃制成的载玻片、盖玻片。 最好采用萤石玻璃制成的载玻片、盖玻片。 5. 封片时可采用甘油等无荧光的封固剂。 封片时可采用甘油等无荧光的封固剂。
4.滤色镜系统的配合使用: 滤色镜系统的配合使用: 该荧光显微镜具激发滤色镜 ,阻断滤色镜和二向色 镜等。
样品聚焦: 5. 样品聚焦:
经荧光染料染色的样品放在载物台上 , 先用溴钨灯透 射照明 , 用低倍物镜聚焦 , 待寻找到最佳影像后 , 熄灭溴 钨灯改用汞灯 . 点亮汞灯 ,嵌入系统滤色镜 40X(Oil) X(Oil)和 100X(Oil) 使用 UVFL 40X(Oil) 和 UVFL 100X(Oil) 油浸物镜 , 应用无荧光浸油 , 物镜的内装可变光阑应适当缩小 , 以增 大影像反差和清晰度 . 40X(dry) X(dry)物镜内装有校正环 在UVFL 40X(dry)物镜内装有校正环 ,对较薄或较厚的 盖片进行球面校正 .
2. 汞灯的点亮 汞灯的点亮:
确信各连接部分皆处于正常状态 接通启动器电源开关 ,按下起动钮 ,汞灯 点亮 ,经2-3min ,电弧趋于稳定 . 点亮后 15min内 ,勿切断电源 ,一旦汞灯 熄灭 ,在5min或稍长时间内 ,不许重新点亮 , 待汞灯冷却后 ,始能再次点亮 .
3. 汞灯的调中 汞灯的调中: