病毒载量检测方法及其意义
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硅胶固相吸附 •异硫氰酸胍裂解，提纯效率高，核酸 纯度高，操作可见 •可与全自动核酸提取仪配套使用，提 纯效率高，操作简便
COBAS Amplicor HIV-1 Monitor 1.5
扩增：RT-PCR 检测：底物显色 先扩增再检测
普通方法：400-750,000 Copies/ml 超敏方法：50-75,000 Copies/ml 线性范围有限，高浓度 样本需稀释检测，超敏 方法需要用低温超速离 心机离心1个小时
COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR实验包括以下步骤： 样本制备 靶RNA的逆转录产生cDNA 用HIV-1特异互补引物进行靶cDNA PCR扩增 通过比色进行与探针结合的扩增产物的测定
COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR 试剂对HIV-1病毒RNA的定 量检测是采用HIV-1定量标准品来完成的。HIV-1定量标准品 是包括作为HIV-1靶RNA引物结合部位和HIV-1扩增子单一探 针结合区的非感染性RNA转录物。将已知拷贝数的HIபைடு நூலகம்-1定量 标准品加到每一个样本中和HIV-1靶序列一起共同进行样本 制备、逆转录、PCR扩增、杂交和检测。COBAS AMPLICOR 分 析仪根据HIV-1定量标准品的数据计算每一个样本的HIV1RNA 的含量。可扩增HIV-1 M组的A-H基因亚型。
贝/毫升。 高于500,000HIV-1 RNA拷贝/毫升的样本位于检测的最
高定量限以上，必须适当稀释以获得确切的量值。在人 血浆中稀释高浓度样本，稀释用血浆需经VERSANT HIV1 RNA3.0 Assay (bDNA) 检测鉴定不含HIV-1 RNA，按 照实验流程重新检测，得出的结果乘以稀释倍数以确定 初始样本的病毒载量。
扩增HIV-1 M组的A-H亚型。
本实验系统检测的定量范围为50至500,000HIV-1 RNA拷 贝/ml。
检测结果以如下形式报告： 低于最低定量限的值报告为“<50” HIV-1 RNA拷贝/毫
升。 在最低定量限和最高定量限之间的值报告为实际检测值。 高于最高定量限的值报告为“>500,000” HIV-1 RNA拷
bDNA 是一种夹心式的核算杂交反应过程，用于直接定量检测血浆中HIV-1 RNA 的含量。首先，通过离心将血浆中的HIV-1 富集起来。HIV-1 病毒基因组RNA从 病毒颗粒中释放出来后，首先会被一组合成的寡核苷酸探针又称捕获探针所结 合并连接在微孔板上，然后通过另外一些靶定探针使病毒RNA与预放大探针结合。 捕获探针包括十七个可与基因组特异结合的捕获位，靶定探针包括81个可与基 因组特异结合的靶定区，分别靶定在病毒RNA pol 基因的不同区段。放大探针 结合到预防大探针上，从而形成支链DNA复合体。随后多拷贝的碱性磷酸酶（AP） 标记的探针与该复合体杂交结合。与化学发光底物共同孵育，所产生的光强度 与样品中HIV-1RNA的量成正比，以相对光强度单位（RLUs）表示的光度值被分 析系统记录下来，试剂盒中含有已知浓度的经β-丙内酯（BPL）处理的HIV18E5/LAV病毒液作为标准品，根据标准品的光吸收值绘制标准曲线，样品中 HIV-1 RNA的量可对照标准曲线求得。
病毒载量检测方法及其意义
病毒载量（viral load）代表的是病毒的负荷，即体内 复制的病毒的数量。实际上，体内复制的病毒的数量是 不能直接测量的，一般用每毫升血浆中HIV RNA的拷贝 数代表HIV的病毒载量。
一、通常的病毒载量测定方法
bDNA方法(分枝DNA杂交试验) NASBA(核酸序列扩增试验) Cobas Amplicor HIV-1 Monitor(逆转录-聚合酶链反应) 荧光定量PCR
三种病毒载量检测技术比较
厂家
bioMerieux
Roche
Simens(Bayer)
商品名 扩增和检测原理 线性范围
核酸提取
Nuclisens Easy Q
扩增：NASBA 检测：Real Time. Molecular Beacon 实时扩增检测
50-3,000,000IU/ml(v1.1) 线性范围广，无需稀释标本重复检测， 报告国际单位，易于统一标准 25-10,000,000IU/ml(v2.0)
可扩增HIV-1 M组的A-G亚型。
NucliSens 核酸分析系统利用三项技术： 专利的BOOM核酸提纯技术:手 工 manual
半 自动miniMAG
自 动 easyMAG “扩增RNA”的NASBA技术 使用荧光分子信标（molecular beacon)对扩增产物的 实时检测技术
标准试验：能够定量400-750000拷贝/毫升的 HIV RNA， 需要0.2毫升血浆。
超敏试验：能够定量50-75000拷贝/毫升的HIV RNA,需 要0.5毫升血浆。
NucliSens EasyQ HIV-1实验 是使用NASBA技术的靶扩增试验。NASBA技术选择 性地直接扩增RNA而没有PCR步骤，用2个寡核苷酸引物、3个酶、三磷酸脱氧核 苷和合适的缓冲液进行一步夹心杂交。首先用异硫氰酸胍和氧化硅颗粒提取高 纯度RNA，RNA通过重复的合成和转录双链DNA中间体得到扩增。在AMV-RT的作用 下，HIV-1gag区的引物P1介导由标本RNA合成cDNA，RNA链被RNAse降解。引物P2 结合启动第二条DNA链合成，反义RNA通过T7多聚酶启动双链DNA合成，这个循环 不断重复，使得靶RNA在等温条件下大量扩增100万到1000万倍，然后直接用化 学发光法确定核酸量，通过HIV特异的gag和pol区的3个内标同时扩增而达到定 量目的。它具有高度敏感性和广阔的动态范围。 最近NucliSens HIV-1定量实 验有了较大改进，将NASBA核酸扩增技术与实时(real-time)检测技术结合起来, 能够对检测进行实时监控。结果表达方式由每毫升标本的拷贝数（cp/ml）改变 为每毫升国际单位（IU/ml）。
COBAS Amplicor HIV-1 Monitor 1.5
扩增：RT-PCR 检测：底物显色 先扩增再检测
普通方法：400-750,000 Copies/ml 超敏方法：50-75,000 Copies/ml 线性范围有限，高浓度 样本需稀释检测，超敏 方法需要用低温超速离 心机离心1个小时
COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR实验包括以下步骤： 样本制备 靶RNA的逆转录产生cDNA 用HIV-1特异互补引物进行靶cDNA PCR扩增 通过比色进行与探针结合的扩增产物的测定
COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR 试剂对HIV-1病毒RNA的定 量检测是采用HIV-1定量标准品来完成的。HIV-1定量标准品 是包括作为HIV-1靶RNA引物结合部位和HIV-1扩增子单一探 针结合区的非感染性RNA转录物。将已知拷贝数的HIபைடு நூலகம்-1定量 标准品加到每一个样本中和HIV-1靶序列一起共同进行样本 制备、逆转录、PCR扩增、杂交和检测。COBAS AMPLICOR 分 析仪根据HIV-1定量标准品的数据计算每一个样本的HIV1RNA 的含量。可扩增HIV-1 M组的A-H基因亚型。
贝/毫升。 高于500,000HIV-1 RNA拷贝/毫升的样本位于检测的最
高定量限以上，必须适当稀释以获得确切的量值。在人 血浆中稀释高浓度样本，稀释用血浆需经VERSANT HIV1 RNA3.0 Assay (bDNA) 检测鉴定不含HIV-1 RNA，按 照实验流程重新检测，得出的结果乘以稀释倍数以确定 初始样本的病毒载量。
扩增HIV-1 M组的A-H亚型。
本实验系统检测的定量范围为50至500,000HIV-1 RNA拷 贝/ml。
检测结果以如下形式报告： 低于最低定量限的值报告为“<50” HIV-1 RNA拷贝/毫
升。 在最低定量限和最高定量限之间的值报告为实际检测值。 高于最高定量限的值报告为“>500,000” HIV-1 RNA拷
bDNA 是一种夹心式的核算杂交反应过程，用于直接定量检测血浆中HIV-1 RNA 的含量。首先，通过离心将血浆中的HIV-1 富集起来。HIV-1 病毒基因组RNA从 病毒颗粒中释放出来后，首先会被一组合成的寡核苷酸探针又称捕获探针所结 合并连接在微孔板上，然后通过另外一些靶定探针使病毒RNA与预放大探针结合。 捕获探针包括十七个可与基因组特异结合的捕获位，靶定探针包括81个可与基 因组特异结合的靶定区，分别靶定在病毒RNA pol 基因的不同区段。放大探针 结合到预防大探针上，从而形成支链DNA复合体。随后多拷贝的碱性磷酸酶（AP） 标记的探针与该复合体杂交结合。与化学发光底物共同孵育，所产生的光强度 与样品中HIV-1RNA的量成正比，以相对光强度单位（RLUs）表示的光度值被分 析系统记录下来，试剂盒中含有已知浓度的经β-丙内酯（BPL）处理的HIV18E5/LAV病毒液作为标准品，根据标准品的光吸收值绘制标准曲线，样品中 HIV-1 RNA的量可对照标准曲线求得。
病毒载量检测方法及其意义
病毒载量（viral load）代表的是病毒的负荷，即体内 复制的病毒的数量。实际上，体内复制的病毒的数量是 不能直接测量的，一般用每毫升血浆中HIV RNA的拷贝 数代表HIV的病毒载量。
一、通常的病毒载量测定方法
bDNA方法(分枝DNA杂交试验) NASBA(核酸序列扩增试验) Cobas Amplicor HIV-1 Monitor(逆转录-聚合酶链反应) 荧光定量PCR
三种病毒载量检测技术比较
厂家
bioMerieux
Roche
Simens(Bayer)
商品名 扩增和检测原理 线性范围
核酸提取
Nuclisens Easy Q
扩增：NASBA 检测：Real Time. Molecular Beacon 实时扩增检测
50-3,000,000IU/ml(v1.1) 线性范围广，无需稀释标本重复检测， 报告国际单位，易于统一标准 25-10,000,000IU/ml(v2.0)
可扩增HIV-1 M组的A-G亚型。
NucliSens 核酸分析系统利用三项技术： 专利的BOOM核酸提纯技术:手 工 manual
半 自动miniMAG
自 动 easyMAG “扩增RNA”的NASBA技术 使用荧光分子信标（molecular beacon)对扩增产物的 实时检测技术
标准试验：能够定量400-750000拷贝/毫升的 HIV RNA， 需要0.2毫升血浆。
超敏试验：能够定量50-75000拷贝/毫升的HIV RNA,需 要0.5毫升血浆。
NucliSens EasyQ HIV-1实验 是使用NASBA技术的靶扩增试验。NASBA技术选择 性地直接扩增RNA而没有PCR步骤，用2个寡核苷酸引物、3个酶、三磷酸脱氧核 苷和合适的缓冲液进行一步夹心杂交。首先用异硫氰酸胍和氧化硅颗粒提取高 纯度RNA，RNA通过重复的合成和转录双链DNA中间体得到扩增。在AMV-RT的作用 下，HIV-1gag区的引物P1介导由标本RNA合成cDNA，RNA链被RNAse降解。引物P2 结合启动第二条DNA链合成，反义RNA通过T7多聚酶启动双链DNA合成，这个循环 不断重复，使得靶RNA在等温条件下大量扩增100万到1000万倍，然后直接用化 学发光法确定核酸量，通过HIV特异的gag和pol区的3个内标同时扩增而达到定 量目的。它具有高度敏感性和广阔的动态范围。 最近NucliSens HIV-1定量实 验有了较大改进，将NASBA核酸扩增技术与实时(real-time)检测技术结合起来, 能够对检测进行实时监控。结果表达方式由每毫升标本的拷贝数（cp/ml）改变 为每毫升国际单位（IU/ml）。