免疫磁珠技术在食品有害微生物检测中的应用

2.7 IMB技术在微生物检测应用时的主要影响因素
1
免疫磁珠的质量
2
目标菌、 杂菌及磁珠的比例
3
待测标本的性状
4
磁珠与待测标本的反应条件
2.8 IMB技术在食源性致病菌检测中应用进展
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IMB技术结合显色培养基 对食源性致病菌进行检测
IMB技术结合PCR技术 对食源性致病菌进行检测 IMB技术结合免疫学技术 对食源性致病菌进行检测 IMB 技术结合电化学技术 对食源性致病菌进行检测 IMB技术结合流式细胞仪 对食源性致病菌进行检测
直接法
间接法是先用羊抗鼠 IgG( 第二抗 体 ) 包被磁珠,使磁珠作为第二抗体 载体 , 当抗原与第一抗体结合后 , 加 入带有第二抗体磁珠 , 磁珠上第二 抗体便与第一抗体结合 , 形成磁珠第二抗体 - 第一抗体 - 抗原复合物 , 在磁力作用下,与其它物质分离。
间接法
第一抗体
第二抗体
1.5 IMB技术的优点
2.2 IMB技术对单增李斯特菌检测 (SN/T 0184.3-2008)
2.3 IMB技术对布鲁氏杆菌检验 (DB32/T-2016)
2.4 IMB对副溶血性弧菌检验(DB32/T -2010)
2.5 IMB技术对其余食源性致病微生物的检测应用
杜强等人利用“全自动免疫磁珠分选系统”检测食品中沙门氏菌， 与国标法相比，全自动免疫珠分选系统取消了 SC和 TTB增菌，经 BPW 增菌后直接使用系统富集目标菌并接种显色平板。结果免疫磁珠法阳性 检出率为32％，国标法阳性检出率为31％，二者无显著性差异(P>0.05)。 但磁珠法取消了二次增菌的步骤，检测时间比国标法节省24 h，且平板 上的单个菌落生长率和菌株特异性也更好。 刘琳琳等人利用“自制的金属螯合免疫磁珠”来检测食品中金黄色葡 萄球菌。该法能够在 30min 内富集检测金黄色葡萄球菌且检测低限可达 100 cfu。同时磁珠可保持活性达3周以上。此检测方法同传统鉴定和分离 金黄色葡萄球菌的方法相比具有速度快、灵敏性高、成本低的优点。
2.6 IMB技术在病毒检测中应用
研究者利用抗病毒表面蛋白的单抗或多抗，开发了能捕获病毒颗粒的免疫磁珠， 并对其应用时各个影响因素 (孵育温度，时间等)进行了初步评估，证明了利用免 疫磁珠技术可捕获病毒颗粒并用于各种检测的可行性。 如Park 等 制备了针对诺如病毒(norovirus)的GⅠ- 1和 GⅡ- 4 外膜蛋白的多克 隆抗体，与磁珠偶联获得了相应的免疫磁珠后，采用 IMBS 技术与荧光逆转录 PCR 联用(IMBS-real-time RT-PCR)，对人为污染已知量的诺如病毒的草莓进行 检测，结果表明其检出限可低至 3 ～ 7 个 RT-PCR 单位。
免疫磁珠技术在食品有害微生物 检测中的应用
小组成员：田理刚、张帅、田勇、朱林韬、赵建秋、董唯
目录
1 免疫磁珠技术的介绍 2 免疫磁珠技术在食品有害微生物检测中的应用
3 小结
免 疫 磁 珠 ( Immunomagnetic bead, IMB, 简称磁珠 ) 技术 , 是近年发展起来的 将固化试剂特有优点与免疫学反应高度 特异性结合于一体的一项新技术。 以免 疫学为基础,渗透到病理、生理、药理、 微生物、生化及分子遗传学等各个领域, 其在免疫检测、细胞分离、生物大分子 纯化和分子生物学等方面得到越来越广 泛应用。
苏惠玉等人应用 “ 山羊抗黄曲霉菌血清的免疫磁珠 ” 捕获食品中的黄曲 霉菌，不需要进行增菌培养，应用磁捕获-荧光聚合酶链式反应(LMC-FPCR) 技术快速检测鉴定食品中的黄曲霉菌。结果：IMC-FPCR方法检测黄曲霉菌的 最低检测值为2cfu／mL。结论：建立了黄曲霉菌的磁捕获-荧光聚合酶链式 反应法 (IMC-FPCR) ，该方法可用于食品中黄曲霉菌的快速检测及鉴定。
References:
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全自动免疫磁珠技术细胞分选系统AutoMACS Pro
1.2 免疫磁珠的结构
磁性微球
1.3 IMB技术的基本原理
特异性抗体
磁珠
免疫磁珠
加入待测液中
抗原-抗体-磁性免疫 复合物
磁 性 外 力
撤去磁场
抗原鉴定
复合物分离出来
以细胞分离为例图解免疫磁珠技术的原理
1.4 IMB技术作用方式
直接法是先用抗体包被磁珠,使 抗体与磁珠给合(物理吸附或化学 免疫磁珠分离 技术 结合),再加入抗原物质,二者结合 形成磁珠-第一抗体-抗复原合物, 在磁力作用下, 与其它物质分离。
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3、小结
IMB技术在微生物学检测领域中的应用越来越广泛，其方便有效性主要在于 代替了常规的选择性增菌培养过程，可特异地将目的微生物从样品中快速分离 出来。与其他先进检测技术结合使用，充分发挥二者优势，还能节约更多时间、 发挥更大的作用。 但目前在免疫磁珠的生产上还存在一些问题，其制备难度大，要获得均匀性 好、超顺磁性、粒度适中、易于结合蛋白质的磁珠很难。现今大部分的磁珠市 场被瑞士Dynal和德国的Miltenyi两大公司所占有，其产品价格昂贵，这极大地 限制了免疫磁珠技术在我国的普及及应用。因此，商业化生产优质的国产免疫 磁珠是今后研究的主要方向。相信随着研究的不断深入，免疫磁珠技术的应用 前景定会更加广阔。
支援 等 人 基于抗原抗体反应的免疫学特异性,以及量子点荧光标记的 高灵敏度,免疫磁珠磁性分离,免疫量子点荧光标记联合应用的检测方法, 对 阪 崎 肠 杆 菌 试验结果表明，能在2h内对乳制品样品中的食源性致病菌 （阪崎肠杆菌）进行检测，且方法特异性好，灵敏度高（达10²cfu/mL）， 其在食品检测领域的应用成为可能。
特异性强、分离速度快、效率高 可重复性好、操作简单 不需要昂贵的仪器设备,不影响被分离细胞或其它生物材 料的生物学性状和功能等
2、免疫磁珠技术在食品有害微生物检测中的应用
大肠杆菌
布鲁式菌Biblioteka Baidu
单增李斯特菌
副溶血性弧菌
沙门式菌
黄曲霉菌
金黄色葡萄球菌
阪崎肠杆菌
2.1 IMB技术对大肠杆菌O157H7的检测(GB/T 4789.36-2008)