紫外—可见分光光度法ppt

传统的分光光度计 适用于测量光谱中单点吸光度
二极管阵列分光光度计 比较：样品和色散元件的相对位置次序相反， 称为反向光路
按构型分
单光束设计：提供高的光通量，灵敏度高； 但光源漂移产生较大误差 双光束设计：矫正漂移。斩光器以一定速度 旋转，使空白和样品的交替测量每秒进行数 次。缺点，降低了光的能量和灵敏度 分光束设计：分裂器将光分成两束，同时穿 过参比和空白，到达两个分开但一样的检测 器，可同时测定样品和空白 双波长设计：同时测定两个波长，如样品中 两个同时发生的反应
浓溶液的不适用性 浓电解质中有类似效应. 化学偏离与仪器偏离 化学:缔合,离解,溶剂化,PH变化等 仪器:单色光不纯. 峰值处测量可改善
简单联立方程式
多组分分析方法
最小二乘法
偏最小（MLS）
该方法能分析复杂的混合物和图谱相
紫外—可见光谱的来源：
辐射作用于物质，发生反射、散射、 吸收、荧光、磷光、光化学反应。通 常测量紫外—可见光谱时我们希望只 发生吸收。 分子内电子跃迁导致谱带变宽，产生 吸收光谱
适用含量范围:
10-5%～50%
2. 定性分析：

鉴定谱图和结构
同一性的认证 颜
色
其他定性信息
紫外—可见分光光度法
目
仪
录
紫外可见光谱学原理和应用
器 样品处理及测定 方 法 二极管分光光度计的特性
1.基本原理
电磁波谱：无线电波、红外线、宇宙
射线、x射线、紫外线、可见光 波长范围：200-800nm 波长和频率： E=h ν ν =c / λ λ 越短，E越高
短波长的紫外光能量高，这 种成份导致了皮肤晒黑。
dA da bc d d
一阶导数：
dI 0 dI da I exp( 2.30 abc ) 2.30bcI 0 exp( 2.30 abc ) d d d
'
如果控制I0不变，则
dI 0 0,而 I ' 2.30 Ibc da d d
原谱
导数光谱的特点： 随着导数阶数的 增加，峰越来越 尖锐，灵敏度提 高 信噪比随导数的 阶数增加而降低
似的简单混合物。 用最小二乘法计算的偏差表明了标准 光谱和样品光谱的拟合程度，同时也 说明了分析结果的准确性。
4. 间接测量：
化学衍生法 分光广度滴定
酶动力学分析
1.仪器设计
分光光度计的组成 产生一定光谱宽度的电磁辐射光 源 色散装置：从光源发射宽的电磁 波中选择特定的波长 样品区域 检测器:测量辐射强度
蛋白质的熔点测定 酶活性
几乎所有金属元素的定量分析 3. 定量分析：
朗伯—比尔定律：
A = εb c (ε为摩尔吸光系数) 多组分的分析 >0.01 mol/L时, 粒子相互影响 叠加性原理：一种混合物在任何波长下的吸光 率 等与混合物中各组分在该波长下的 A之和。 电荷分别改变. ε也改变.
一阶导数
二阶导数
二极管阵列分光光度计的特点

快速采集，多波长同时测定， 二极管阵列光谱学 的优点 灵敏度高，有统计学意义，很 高的稳定性和可靠性，敞开式 的样品室
二极管阵列光谱学 的缺点

分辨率较低，散射光严重， 样品会分解
参考文献：
Tony owen著, 现代紫外—可见光谱学基础，1997， 12-5965-5123E 张剑荣，戚苓,方惠群编，仪器分析试验，科 学出版社，1999 曾永昌，向立人，周在德编，仪器分析，四川 大学出版社，1992 G.W.尤因著，华东化工学院分析化学教研组译， 化学分析的仪器方法，1986 罗国安，邱家学，王义明编，可见紫外定量分 析及微机应用，上海科学技术文献出版社， 1988






液体样品 固体样品 弱吸收 强吸收 干扰 光化学问题
动力学光谱法 固相光谱法
导数光谱法
多元校正—多组分测定
结论：A’信号也正比于c， Beer定律：A=abc I I exp( 2 . 30 abc ) 0 在原拐点处灵敏度最大 A lg T lg( I / I 0 ) 高阶导数光谱同样适用
2.主要仪器参数（可能影响吸光度测量值 准确度及精确度的一些仪器参数）
光谱分辨率 波长准确度及精确度 线性动态范围 漂移
SBW/NBW≤0.1
影响测光准确度和精确度的因素： 杂散光和噪声
杂散光：检测到选定波长带宽以外的任何波长 光。 T =( I + I s ) / ( I 0 + I s ) 噪声 光子噪声：在测量低浓度低吸光率样品时， 影响精确测量两束高强度的光之间的微小差 别。 电子噪声：是固有的，与测定的光强度无关。 在高吸光度样品的信号很小时影响大