阿昔洛韦乳膏体外透皮吸收实验

不同软膏基质对阿昔洛韦透皮吸收效果的影响
药学院09级06班
黄小玉09206060193
戴贝萱09206060198
周秀琼09206060199
吕台中08206060185
谭圣斌08206060178
颜可立08206060174
1、实验目的：
比较不同软膏基质对阿昔洛韦透皮性能的影响。

2、实验依据：
阿昔洛韦(Acyclovir，ACV)为核苷类抗病毒药，目前广泛用于皮肤科的各种疱疹病毒感染。

除口服、注射给药外，皮肤局部用药仍为低毒、有效的给药途径，尤其作为非处方药物，其应用前景较为广泛。

阿昔洛韦乳膏为皮肤科用药，本实验采用离体乳猪皮肤作为渗透屏障，采用高效液相色谱测定的方法，设计四种不同基质的处方，测定ACV从处方中的释放与经皮渗透性质，并与商品ACV软膏进行比较。

通过对比来研究阿昔洛韦乳膏的体外透皮吸收效果。

3、仪器设备和实验材料：
3.1仪器
KNAUER高效液相色谱仪；改进Franz扩散池(扩散面积4.52cm2，接受室体积13ml)；超级恒温水浴装置及磁力搅拌器。

3.2试药
阿昔洛韦(浙江武义制药厂提供，批号931202)；月桂氮卓酮(Azone福建寿宁美菲思生物化学品厂，批号960606)；乙醇、丙二醇为分析纯，软膏基质、薄荷油为药用标准。

阿昔洛韦软膏(市售，上海申光制药厂生产批号950401)。

3.3动物
实验用小型乳猪(巴马香猪，体重6．8kg)。

4、实验方法与步骤：
4.1色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
流动相：甲醇：水=10：90
检测波长：254nm
柱温：室温
进样量20ul
4.2溶液的制备
4.2.1对照品溶液的制备：精密称取阿昔洛韦对照品适量，置50mL量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液5mL使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL，置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，制成每1mL中含20µg的溶液，即为对照品溶液。

4.2.2样品溶液的制备：取阿昔洛韦乳膏适量，均匀涂布于Franz扩散池的猪皮上，10h后取接收液适量，孔径为0．45p,m的滤膜滤过，取续滤液作为样品溶液。

4.2.3空白基质液的制备：取空白基质适量，均匀涂布于Franz扩散池的猪皮上，10h后取接收液适量，孔径为0．45m的滤膜滤过，取续滤液作为空白基质液。

4.3专属性试验
分别取上述对照品溶液、样品溶液、空白基质液20uL进样，记录色谱图。

结果表明在此色谱条件下，空白基质及皮肤不干扰测定。

4.4阿昔洛韦标准曲线
精密称取干燥至恒重的阿昔洛韦对照品100mg，用生理盐水于100ml量瓶中配成1mg・ml－1的储备液，分别精密吸取储备液0.2、0.4、0.8、1.0及2.0ml于100
ml量瓶中，用生理盐水定容，摇匀，即得质量浓度（ρ）为2.0、4.0、8.0、10.0
及20.0μg・ml－1的标准液。

分别进样20ul，以峰面积A为纵坐标、浓度c(g／ml)为横坐标，得标准曲线方程，r＝0.9999，表明阿昔洛韦浓度在2.0－20.0μg・ml －1范围内线性关系良好。

4.5精密度和回收率实验
分别吸取高、中、低3个浓度的阿昔洛韦对照品液，分别于1d内重复进样5次，连续进样测定5d，日内精密度RSD为1.23％，日间精密度RSD为2.04％。

取
3份阿昔洛韦溶液，分别加入等量的阿昔洛韦对照品贮备液，摇匀后，各进样20uL，测定峰面积，连续5次，代入标准曲线，换算成实际测定浓度，计算
回收率，低、中、高3种浓度的回收率分别为(97.5±0.9)％、(98.8±21)％、
(98.0±1.5)％。

4.6处方的制备
4.6.1乳膏基质(1)处方：ACV3g，硬脂酸18g，凡士林32g，丙三醇15g，三
乙醇胺1.8g，月桂氮卓酮5g，丙二醇5g，薄荷油0.5g，蒸馏水加至100.0g。

(2)制备方法：将硬脂酸，凡士林，月桂氮卓酮水浴加热熔融。

另将丙三醇、三乙醇胺、丙二醇、水加热至同温，细流加入上述熔融物中，搅拌至冷，加ACV、薄荷油搅匀，即得白色乳膏。

4.6.2PEG基质(1)处方：ACV3g，PEG4004.5g，PEG400012g，月桂氮卓酮5 g，丙二醇5g，薄荷油0.5g。

(2)制备方法：将PEG400、PEG4000置于蒸发皿中，水浴加热熔融，加入月桂氮卓酮、丙二醇混合搅拌至冷，加入药物、薄荷油混合均匀，即得白色软膏。

4.6.3Ⅰ号凝胶基质(1)处方：ACV3g，卡巴浦3g，三乙醇胺3g，乙醇20g，
月桂氮卓酮5g，丙二醇5g，薄荷油0.5g，蒸馏水加至100.0g。

(2)制备方法：将卡巴浦均匀撒布于适量水中，放置使充分溶胀，加入药物搅匀。

取乙醇、丙二醇、月桂氮卓酮、薄荷油混合均匀，搅拌下加入。

另取三乙醇胺溶于适量水中，搅拌下加入，加水至足量，搅拌均匀，即得白色凝胶。

4.6.4Ⅱ号凝胶基质处方：各成份同4.6.3，另加辅助促透剂2g。

制备方法同4.6.3。

4.7离体猪皮的制备
巴马香猪处死后立即用电动剪毛刀剪去腹部皮肤毛，剥离去毛部位皮肤，去除皮下组织后用生理盐水冲洗干净，置于生理盐水中浸泡约30rain，取出，用滤纸吸干，备用。

4.8离体皮肤渗透试验
采用改进Franz扩散池。

取制备好的离体猪皮放人Franz扩散池中，皮肤角质层朝上，扩散池的有效面积为4.52cm。

取乳膏适量均匀涂布于皮肤上，在接受池中加生理盐水14mL，37·C恒温水浴，用磁力搅拌器不断搅拌，使药物自然释放。

分别于涂布后1、2、4、6、8、10、12h各取接受液1mL，(取样后即向接受室内补充lm生理盐水)。

用0．451~m微孔滤膜过滤，取续滤液进样测定。

5、实验数据处理
5.1按下列公式计算单位面积累积渗透量（Q）：
式中V0为接收液总体积，V为取样量，q为第n次实测单位面积渗透量(q=样品峰面积×对照品浓度×接收液取样量／(对照品峰面积×释放面积))，qi为n 次前每次测得的单位面积渗透量。

5.2各时间点药物单位面积累计渗透量见表一。

以Q—t作线性回归，得回归方程，所得直线斜率即透皮速率。

表一药物累积渗透量
项目1h2h4h6h8h10h12h
商品软膏
乳膏基质
PEG基质
Ⅰ号凝胶基质
Ⅱ号凝胶基质
5.3根据文献[1]，药物阿昔洛韦从处方中的释放速率大小呈以下顺序：Ⅰ号凝胶＞PEG基质＞Ⅱ号凝胶＞乳膏基质＞商品软膏。

ACV的透皮速率分别为：商品软膏1.1±0.3，乳膏基质3.0±0.5，Ⅰ号凝胶5.6±0.8，PEG基质14.4±1.1，Ⅱ号凝胶20.2±2.1μg·cm-2.h-1。

在商品软膏中，ACV的透皮速率最小，ACV累积渗透量也较低，后四种处方基质的药物透皮速率分别为它的2.47、4.98、12.79与17.85倍。

6、本实验的创新点
体外经皮渗透研究最好用人的皮肤，但人的皮肤难于得到，本试验所选用的体外经皮渗透屏障是与人体皮肤最接近的乳猪皮肤，有关文献报道，在体外相同的条件下，用猪皮肤预测人皮肤的通透性数据是相似的。

一些化合物体内皮肤穿透证明，刚断奶的猪背部皮肤与人的前臂皮肤最相近，而小型猪的皮肤与人的皮肤穿透性特征最接近。

故我们选用乳猪模拟人体皮肤。

本实验采用经典的Franz试验扩散装置考察喷昔洛韦乳膏体外透皮量，操作简便，重复性好。

由于猪皮含有丰富蛋白质和脂质等大量生物大分子，在进行HPLC检测之前必须对接收液进行过滤，防止带人较多杂质影响检测结果、污染色谱柱。

本实验采用检测灵敏度较高的HPLC测定透皮接收液中的阿昔洛韦的含量，结果准确可靠，满足透皮吸收制剂研究的要求，为阿昔洛韦乳膏的体外研究奠定了基础。

7、参考文献
[1]马晓微，何飞燕*，梁文权.五种阿昔洛韦软膏释放与透皮性质比较[J].中国医院药学杂志，1999，5（19）.
[2]王军，何文，张先洲.凝胶中不同溶剂系统对阿昔洛韦体外透皮速率的影响.广东药学院学报，2011.12.
[3]肖学成，肖琴，刘忆.高效液相色谱法测定喷昔洛韦乳膏中药物的体外透皮吸收量[J].湖北中医药大学学报，2011,13（3）.
[4]中华人民共和国药典.国家药典委员会编.化学工业出版社，2005版，二部，p.287。