多糖的分子量与分子量分布测定

多糖的分子量与分子量分布测定标准操作规程

1. 目的：

建立多糖的分子量与分子量分布测定的标准操作规程。

2. 依据：

《中华人民共和国药典》2000年版二部。

3. 范围：

适用于药品中多糖的分子量与分子量分布的测定。

4. 职责：

QC 检验员对本标准的实施负责。

5. 程序：

5.1. 对仪器的一般要求：

色谱柱为测多糖专用凝胶柱（按所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶 柱）。检测器为示差折光检测器。

5.2. 系统适用性试验：

按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，规定分析状态下色谱柱的最小理论板数

式中t R 为供试品峰的保留时间；

t o 为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间，一般指蓝色葡聚糖的保

留时间

t T 为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间，一般指葡萄糖的保留时间

5.3. 测定法：

系统校正：根据供试品分子量大小，一般选用 5个已知分子量的多糖标准品

（常用的为葡聚糖）分别用流动相制成每 1ml 中约含10mg 的标准溶液，分别取上述标准溶 液25卩I ，注入液相色谱仪，记录色谱图。由GPC 专用软件绘制标准曲线，得线性回归方程:

1gM w =a+bt R

式中 M W 为标样的已知重均分子量；

t R 为标样的保留时间。

（n ）和供试品在该分析状态下的分配系数（ K d ）应达到规定的要求

K d = t R — t o

样品测量：取供试品溶液25 d注入液相色谱仪，记录色谱图，按下式计算

分子量：

M n=E Rl i/艺(Rl i/M i)

M w=E ( Rl i M i) /艺Rl i

D =M w/M n

式中M n 为数均分子量；

Rl i为为样品i级分的物质量，即供试品在保留时间i的峰高；

M i为样品i级分的分子量，即供试品在保留时间i的分子量。

54结果处理：

采用GPC专用软件，可获得供试品归一化色谱图，微分、积分分子量分布图，各时间点的分子量（片段数据）和各种平均分子量。根据供试品需要选择各项测定结果。