水牛卵母细胞冷冻保存初步研究
体细胞克隆牛的研究进展(综述)
体细胞克隆牛的研究进展1997年，体细胞克隆绵羊多莉的诞生，改变了以往教科书中的哺乳动物已分化的体细胞不能重新去分化而重获全能性的概念。
1998年，体细胞克隆牛获得成功。
体细胞克隆动物的成功是几十年来生物学领域的重大突破之一，它引起了社会的广泛兴趣和关注。
因为该技术可能对未来农业、医学和人类自身产生重大影响。
为了使我国科学家能抓住机遇，在体细胞动物克隆领域研究中尽快加入国际竞争的行列并走在国际前列，国家自然科学基金委员会于1998年不失时机地设立了“家畜体细胞无性繁殖的研究”的重点项目。
这个项目，不仅可为发育生物学的基本理论研究提供很好模型，更重要的是在我国建立家畜克隆技术并在未来国民经济发展中发挥重要作用。
因此，该项目既具有科学上的前沿性，又符合国家重大发展需求。
“家畜体细胞无性繁殖的研究”项目（批准号39830280）是国家自然科学基金委员会的重点科研项目。
1999年、2000年和2002年，体细胞克隆山羊、转基因克隆山羊和克隆牛分别在我国降生。
2002年2月27日同行专家在中国科学院动物研究所对该项目进行了验收与鉴定。
专家们对项目成果给予了高度评价，一致认为，通过该项目的研究，我国的家畜克隆技术已迈入世界先进水平。
克隆牛研究是由中国科学院动物研究所生殖生物学国家实验室克隆动物研究组与山东五里墩中大动物胚胎工程中心合作完成的。
通过成批体细胞克隆牛的研究，我国科学家已建立了从家畜体细胞培养、卵母细胞成熟、卵子去核、重构胚构建、胚胎体外培养、胚胎移植等成套的较成熟的操作方法和规程，标志着我国成为继英国、日本、新西兰和美国等国家之后，掌握体细胞克隆家畜关键技术的少数国家之一。
体细胞克隆牛和克隆羊的成功，使我国在动物胚胎工程高科技领域已走在国际前沿。
该项目的研究可能为未来畜牧业的发展提供一个新的增长点。
特别是奶牛克隆胚胎应用技术，在我国奶牛业十分落后的条件下，一旦提高效率并投入生产应用，将对畜牧经济发展产生重要影响。
热休克蛋白70及其对精子影响作用的研究进展
热休克蛋白70及其对精子影响作用的研究进展哈斯高娃，陈小辛，娜仁花（内蒙古农业大学动物科学学院，内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室,呼和浩特010018）中图分类号：S823.3文献标识码：A文章编号：1004-4264（2021）03-0020-04DOI:10.19305/ki.11-3009/S.2021.03.005微侑扫描二维码听独家语音介绍写作者在线交流开学债s®务)SiRW(OSID)摘要：分子伴侣是正常细胞和细胞损伤不同阶段蛋白质动态平衡的关键决定因素，热休克蛋白70（HSP70）是普遍存在的分子伴侣，具有多种细胞功能。
伴侣蛋白通过利用各种独特的机制来维持细胞中正确的蛋白质折叠，以防止分子间的异常相互作用，防止蛋白质聚集以及蛋白质重折叠等，且HSP70在细胞中与辅助伴侣蛋白协同互作，这些辅助伴侣蛋白由J-结构域蛋白和核昔酸交换因子组成，调节HSP70与伴侣蛋白循环。
本文对HSP70的结构、功能以及对精子功能的关系进行综述，对HSP70分子伴侣如何调控细胞功能以及精子功能的分子机制提供了新的见解。
关键词：分子伴侣；HSP70;蛋白质折叠；翻译后修饰为了生存，生物体必须能够在不断变化的环境中保持细胞的动态平衡，分子伴侣对这一过程有着至关重要的作用，它们有助于保护细胞蛋白质免受极端条件，如温度突然升高、氧化应激、接触重金属、缺氧和代谢功能障碍等的破坏⑴。
热休克蛋白（HSPs）位于细胞质（包括各种细胞器，如线粒体）、细胞核、细胞质膜等3个细胞区室，并在细胞外完成任务伺。
HSP参与一系列细胞过程，包括蛋白质折叠和重折叠、运输、移位、解聚和降解冏，而且还与人类的许多病理生理疾病相关，包括神经退行性疾病、癌症⑷和生物衰老同等。
收稿日期：2020-08-27基金项目:内蒙古农血大学动物科学学院标志性成果专项资金项目青年基金项目（DC1900006998）;内蒙古自治区自然科学基金项目（2017MS0344）。
生育力保存中玻璃化冷冻载杆的研究趋势及监管挑战
生育力保存中玻璃化冷冻载杆的研究趋势及监管挑战
张坤智;晁园;孙晓晴;俞卉;王越;齐伟明
【期刊名称】《医疗卫生装备》
【年(卷),期】2023(44)1
【摘要】阐述了生育力保存过程中关键医疗器械玻璃化冷冻载杆的演化历程,分析了现有的“开放式冷冻、开放式保存”“开放式冷冻、封闭式保存”及“封闭式冷冻、封闭式保存”3种玻璃化冷冻载杆的优势与弊端,提出了玻璃化冷冻载杆的改良趋势并提供了研究思路,立足监管挑战剖析了玻璃化冷冻载杆监管关注点,为提升生育力保存的有效利用率及国产辅助生殖医疗器械的发展提供了助力。
【总页数】6页(P81-86)
【作者】张坤智;晁园;孙晓晴;俞卉;王越;齐伟明
【作者单位】浙江省医疗器械审评中心审评二科
【正文语种】中文
【中图分类】R318.6;TH789
【相关文献】
1.卵子玻璃化冷冻保存生育力的研究进展
2.卵子冷冻在女性生育力保存中的作用研究进展
3.封闭式载杆玻璃化冷冻和程序化冷冻的临床效果比较
4.比较四种冷冻载体在水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中的效果
5.胚胎载杆玻璃化冷冻复苏移植术的护理体会
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活体采集卵母细胞技术的研究
３ 内可采集 ｉ０ 以上 的卵母细胞 。但 是 ， ｈ ０枚 腹腔镜 采卵 法
操作 复杂 ， 对卵巢 的固定较 难 ， 两人配合进行 。 需要 无论使用腹腔镜 还是超声 波方法 采集 卵母 细胞 ， 都需
要 昂贵 的仪器设备 ， 此项 技术 的推广应 用受到一 定限制 ； 使
针， 再对第 ２ 卵泡进行穿刺 ， 个 周而复始 ， 直到该侧卵巢上 ２
收 稿 日期 ：０ ６—０ ２０ ７—２ ２
２ 影 响活体 采 卵效 果的 因素
２ １ 供 体 类 型 ．
ｌ 活体 采卵 的方法
活体采卵的方法主要有 Ｂ型超 声波引导 法采 卵、 腔 腹
镜和手术法采卵。超声波引导采卵法 ： 按胚 胎移植操作 规 程对供试 牛进行保 定 ， 除直 肠粪 便 ， 清 清洗 、 消毒 后躯和 外 阴部 。与此同时 ， Ｂ型超声 波仪展 开放 于操作 现场。把 将 预先分装好的抽卵液和 １ ５ 卵泡液 收集管 放入 ３ ℃ 个 ０ｍｌ ８ 恒温装置 中， 将采卵针及连接胶管从 消毒 包中取 出， 采卵针
从监视器上可观察 到被抽 吸卵泡 的图像 缩小 ， 形态变得 不 规则 ， 直至卵泡液被抽 取干 净后 ， 卵泡 图像消失 ， 出采卵 退
性， 对供体的损伤较大 ， 易发生粘 连 ， 容 连续 进行 采 集会 产
生一些不 良的影响。而对于生殖 系统 及有关脏 器发生严重 粘连的动物 ， 采用手术 法采集 卵母 细胞 仍 不失 为一 种较 简 便且行之有效的技术。
由于手术采 卵法可 以对 卵 泡的发 育 情况 作 详细 直 观的 观 测， 且对卵巢的固定 比较 容易 ， 回收率 也较 高 ， 实际生 产 在
细胞松驰素B(CB)对水牛卵母细胞玻璃化冷冻保存的影响
关键词： 卵母 细 胞 ； 囊胚 ； 璃化 冷 冻 玻 摘 要 ： 究主要 探 讨 冷冻前 细胞 松 弛素 Ｂ（ Ｂ 预 处理 水 牛 Ｍ Ⅱ期 卵母 细 胞 对 其冷 冻 效 果 的影 响 。 研 Ｃ ）
Ｇ Ｐ组和 Ｇ Ｐ＋ Ｂ组卵母细胞解冻后的存活率（ ８ ８％ 、４ ２ ％ ） Ｍ Ｍ Ｃ ８ ． ９ ９ ．０ 和培养后发 育到囊胚 的比率
（ ． ２ 、４ ５ ％ ） ８ ８ ％ １ ． ５ 差异均 不 显著 （ ＞０ ０ ） 但 Ｇ Ｐ组 和 Ｇ Ｐ＋Ｃ Ｐ ．５ ， Ｍ Ｍ Ｂ组存 活 卵母 细胞 激 活后 的分 裂
率 差异 显著 （ ２ ６ ％ 、５ ５ ％ ， ＜０ ０ ） 所 以细胞 松 弛素 Ｂ预 处理 可 以提 高 Ｇ ３ ．９ ５ ．６ Ｐ ．５ ， ＭＰ冷 冻卵母 细胞 的
发 育能 力 ．
过去 科研 人员 常 常 集 中研 究 未 成 熟 卵母 细 胞 的
１ １ 试验 试 剂及药 品 ． 除 Ｔ Ｍ１ ９为 Ｇ Ｂ Ｏ公 司生 产 外 ， 他 所 有 无 Ｃ ９ ＩＣ 其 机盐 和生 物 化学试 剂均 由 Ｓｇ 公 司生 产 。 ｉ ｍａ
１ ２ 培 养液配 制 ．
冷冻 ， 而对 成 熟卵母 细 胞 的冷 冻 研 究 得 较 少 ， 原 因 其 是 ＭⅡ期 的卵母 细胞 中纺 锤 体对 低 温 和冷 冻 保 护 剂 极其 敏感 ， 果 在 冷 冻 过 程 中损 伤 了卵 母 细 胞 。 因 结 此 ， 何 降低低 温 和冷 冻保 护剂 对卵母 细胞 的损 伤就 如
卵母细胞的冷冻技术
一、冷冻技术概述
2.细胞损伤假说
冷冻损伤是卵母细胞冷冻保存的主要障碍，有报 道认为冷冻常会使细胞膜，透明带发生变化，细胞骨 架被破坏，染色体出现异常等。
一、冷冻技术概述
1.2冷冻保护剂分为渗透性和非渗透性两种
①渗透性冷冻保护剂主要有丙二醇（PROH）、二
甲基亚砜（DMSO)、甘油和乙二醇(EG)等。 渗透性冷冻保护剂主要通过细胞膜，降低溶液的冰 点，增加溶液的粘性，稀释溶液中的溶质浓度。
一、冷冻技术概述
②非渗透性冷冻保护剂主要有蔗糖、葡萄糖和脂蛋白等。
研究发现包裹卵母细胞的卵丘细胞层数越多，解冻 后卵母细胞存活率越高。Jack等比较冷冻GV期卵母细 胞前后变化，发现致密的COC与裸卵相比具有较高的成 熟率。可能是卵丘细胞参与了卵母细胞的成熟，如果去 除卵丘细胞，成熟率则会大幅度降低。
三、实验
⑴冷冻方法与保护剂对牛卵母细胞解冻后细胞 发育的影响
1.卵母细胞的采集与成熟培养
一、冷冻技术概述
随着生物学、医学和低温制冷技术的发展，低温冷冻 技术已逐渐形成的一门边缘学科低温生物学，该领域主 要应用是在保存各种细胞、组织、胚胎、器官甚至是活 体的冷冻保存。 在超低温条件下动物种质细胞之所以能长期保存，是 因为种质细胞内一切新陈代谢过程中的化学变化被超低 温所抑制，当温度降到一定限度时，细胞内所有的化学 变化也就处于一种“暂停”状态而使细胞得以长期保存； 低温保存的细胞以一定的方式复苏后，又具有存活的能 力。
动物冷冻保存与繁殖
动物冷冻保存与繁殖动物冷冻保存与繁殖一直是生物学与科技领域的研究热点之一。
通过冷冻保存动物胚胎、精子或卵子等生殖细胞，能够实现对珍稀野生动物种群的保护和繁殖。
本文将从冷冻保存技术的原理与应用、繁殖方面的进展以及可能面临的挑战等方面进行探讨。
一、冷冻保存技术的原理与应用1.1 冷冻保存技术的原理冷冻保存技术是将动物胚胎、精子或卵子等生殖细胞置于极低温条件下，通过冷冻液中保护剂的作用，使细胞内的水分凝固成冰晶，从而达到细胞冻结的目的。
同时，将细胞冷冻到低于零度的温度后，可以降低其新陈代谢率、细胞活力和分裂速度，使细胞能够长时间保存。
1.2 冷冻保存技术的应用冷冻保存技术在动物保护和繁殖中发挥重要作用。
首先，冷冻保存能够帮助保存珍稀濒危物种的种群资源。
例如，濒危动物的精子和卵子可以被冷冻保存，以备将来的繁殖计划。
其次，冷冻保存也为传统繁殖技术提供了辅助手段。
例如，在人工授精中，可以使用冷冻精子来提高繁殖成功率。
此外，冷冻保存技术还广泛应用于生殖医学研究、动物疾病诊断与治疗等领域。
二、冷冻保存与动物繁殖的进展2.1 冷冻胚胎移植技术冷冻胚胎移植技术是指将通过冷冻保存的胚胎植入母体的子宫内，实现胚胎发育和繁殖。
该技术可以在疾病或年龄等原因导致不孕的动物中实现繁殖。
此外，冷冻胚胎移植技术也被应用于改良家畜品种，提高其经济价值和生产性能。
2.2 冷冻精子与冷冻卵子的研究冷冻精子技术是指将动物精子进行冷冻保存，并在需要的时候通过解冻和人工授精等方法实现繁殖。
该技术已经成功应用于多个物种，包括家畜和野生动物。
然而，冷冻精子保存过程中，仍然存在着精子活力降低、形态损伤等问题，需要进一步改善。
相比之下，冷冻卵子研究相对较少，但也有潜力用于保护珍稀物种和改良家畜品种。
三、冷冻保存与繁殖面临的挑战冷冻保存与繁殖虽然在理论与应用上取得了一定的进展，但仍然面临一些挑战。
首先，冷冻保存过程中会导致一部分细胞死亡或受损，从而降低成功率。
牛卵母细胞体外成熟的研究进展
收 稿 日期 ：０６３—５ ２０４３１
等。值得注意 的是 ， 同公 司不 同批 次 的产 量含量 和纯 不 度不一致 ， 配培养基 的渗透压 和 ｐ 所 Ｈ值等有一定差异 对 ＩＭ 的影响很大 。 Ｖ ２２ 温度 ２ 世纪 ８ ． ０ ０年代时 ， 研究者们对 ＩＭ一般用 Ｖ 普通的 ３℃。直 到 １８ ７ ９６年的 Ｅｇ ． 等才发现 ３ ℃时猪 卵 ９ 细胞体外成熟 率 较 高ｎ 。而 Ｌｎ 等 （９３年对 牛 卵母 ］ ｅｚ １８） 细胞 ⅣＦ研 究 也表 明 ，９ ３℃时 牛 体外 受 精 率 明显 高 于 ３ ℃ 、７ ５ ３ ℃和 ４ ℃ 。现在牛体外生 产 （ ） 多用 ３ ｌ ｗＰ 中， ８
～
３℃。 ９
２３ 气 相 目前 ， 卵母 细 胞 ＩＶ主 要用 的是 ５ 的 ． 牛 Ｐ ％ Ｃ）、 （ 相对湿 度 １０ 的空 气 ， ５ ０ 、％ ｏ 、 ２ ０％ 或 ％Ｃ ２５ ２ 相对 湿 度为 １０ ０ ％的空气 ； 也有用 ２ ｏ 或 ５ ｏ 相对湿 度 ％ｃ ： ％ｃ ： 为 １０ ０ ％的空气进行培养 的。Ｈ ｓｉｏ 等 （ｏｏ 对 比了 ａｈ ｔ ２ｏ ） ｍ ｏ 不同浓度 的 ０ 对 ＩＭ 的影 响 ， ２ Ｖ 发现低浓度 的 ０ 更有利 ２ 于卵母细胞 的 ＩＭ 和胚胞 的形成 。￣ ａａ ２０ ） Ｖ ｎ （００ 认 为５ ％或 ２ ％的氧气 浓度对牛 Ｃ Ｃ的影 响不大 ， ０ Ｏ 几乎不 影响其 卵裂和发育 为桑椹胚 ¨ 训。可 能是 因为氧 自由基 的毒 害使胚胎 发 育受 到一定 影 响 ， 因此 ， 学者 提 出在 有 培养基 中添加 一 定量 的半胱 氨酸有 利 于降低 氧 自由基
胚胎及卵母细胞的冷冻保存技术
➢ 冷冻过程
快速冷冻法
由室温开始以1℃/min的速度降至-5~-7℃诱发结晶，在此 温度下平衡10min℃，然后以0.3℃/min的速度降至30℃~40℃，投入液氮保存。
一步冷冻法
牛和山羊目前仍处于试验阶段
牛7日龄囊胚可在2.1mol/L甘油、0.25mol/L蔗糖混合液中 室温下脱水2min，将装有胚胎的细管垂直放在液氮罐颈部 5min，结晶后投入液氮。
非渗透性保护剂
这是一类大分子化合物，能溶于 水，性 保护剂促使细胞脱水，减少细 胞内冰晶形成；组成玻璃化液 时，可有效降低渗透性保护剂 的分子浓度、可使发生玻璃化 的相变温度升高、可促进胞质 及保护液玻璃化；解冻时，为 卵母细胞和胚胎提供一个高渗 环境，避免水分进入胞内过快 而产生的渗透性破裂。
冷冻方法
一、卵母细胞的冷冻 保存
➢ 卵母细胞的获得 活体卵巢采卵 屠宰动物卵巢采卵
1.抽吸法 2.切割法 3.剥离法 刀片切割卵巢可采取卵巢 内部卵泡
➢ 卵母细胞的分级与筛选 牛的卵母细胞可分为以下几个等级：
1. A级：外周有3层以上致密卵丘细胞，卵母细胞胞 质均匀并充满于透明带内。
2. B级：外周有1~3层卵丘细胞，卵母细胞胞质均匀。 3. C级：卵丘细胞扩散，卵母细胞胞质不均匀。 4. D级：无卵丘细胞的裸卵，细胞质不均匀，且有
➢ 细胞的冷冻保存并不在于能 否长期耐受低温，而是在于 冷冻和解冻时对细胞的致死 性作用（致死性温区-50~15℃）
一、胚胎和卵母细胞在低温冷冻保存过程中 的受损机制
➢ 在冷冻过程中，冰晶首先在细胞外液中形成，此时冰晶与 溶质分离，使细胞外液浓度升高、渗透压增加，细胞内水 分渗出产生溶液效应。
➢ 随着温度继续下降，细胞外冰晶不断形成，未冻结部分的 溶液浓度增加，细胞内外的渗透压差增大。这时可能发生 两种情况：
畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范NYT1900-2010
畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范 NY T 1900-2010ICS 65.020.30B 43 NY中华人民共和国农业行业标准NY/ T 1900-2010畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范Procedures for cell and embryo cryopreservation of domestic animals 2010-07-08 发布 2010-09-01 实施中华人民共和国农业部发布NY/T 1900-2010前古目本标准遵照 GB/T 1. 1-2009 给出的规则起草。
本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。
本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC 274)归口。
本标准起草单位:全国畜牧总站。
本标准主要起草人:xiJ丑生、王志刚、赵俊金、史建民、孟飞、于福清、孙飞舟、邱小田。
INY/T 1900-2010畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范1 范围本标准规定了用于保种的家畜精液、家畜卵母细胞、家畜胚胎和畜禽成纤维细胞冷冻保存技术要求。
本标准适用于家畜精液、家畜卵母细胞、家畜胚胎和畜禽成纤维细胞等遗传物质冷冻保存和检验人库。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注目期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 4143 .牛冷冻精液GB 20557 山羊冷冻精液NY/T 1234 牛冷冻精液生产技术规程NY/T 1674 牛羊胚胎质量检测技术规程3 术语及定义下列术语和定义适用于本文件。
3. 1超低温保存 cryopreservation在液氮中冷冻保存遗传物质的技术。
3. 2卵母细胞 oocyte来源于有腔卵泡具有繁殖能力的细胞。
3. 3成纤维细胞 fibroblast以畜禽组织或胎儿为材料，体外培养、分离出的梭形或不规则形细胞。
胞质近中央处有椭圆形胞核，胞体→般铺展很开，细胞之间排列疏松，有较大细胞间隙。
站在“克隆”金字塔上的人——记广西大学动物科技学院院长石德顺
严子治学身先垂范
作 为学 术 带头 人 ，石 德顺 非 常注 重学 科 团 队建 设 及 年轻 人 的培 养 ，更
倡 导 以人 为本 、团 队协 同合作 的思
想 。石 德顺 一直 认 为 ，好 团 队是 带 出 来 的 。 团 队 的建 设 不 仅 需 要 带 头 人
受 精 胚 胎 的 冷 冻 方 法 ，便 于 推 广 应 的高度瞩 目。２ ０ ０ ５ 年４ 月２ １日，美 国
Ａ Ｇ ＵＩ ＹＩ Ｎ Ｇ Ｃ ＡＩ
八 魅 英 才
栏目 编辑：蒋志敏
２ ０ １ ３ 年７ 月号 总第 １ ８ ４ 期
进水 平 。此外 ，冻 前 部分 脱 水 、超速 头体细胞克隆水 牛 ，其 中两头ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ康存 冷冻 牛 体 外 受精 胚 胎 的研 究 也 已取得 活。此外 ，黄牛体细胞克隆也取得 了 了新 的突 破 ，获得 了世 界首 批 用 该方 突 破 ，２ ０ ０ ５ 年１ ０ 月 成功 获得 广 西首 例 法 冷 冻 保 存 繁 殖 的试 管 牛 犊 （ ６ 头） ， 体 细胞 克隆 黄牛 。 且 发现 全 为 公犊 。这 不 仅 简化 了体外 石 德 顺 的研 究 成 果 引起 了 国 内外
染 。石 德 顺 以他 独 有 的学 术 威 望 和 人 目为 “ 中国科 技 竞 争 力 的进 展 ：需 要 格 魅力 ，集 聚 了一 大 批 年轻 有 为 的 学 在 牛 体 外 受 精 技 术 成 功 的 基 础 重 新 评 估 ” 的 报 告 ，提 交 给 美 国 的 术 骨 干 ，更 有 多名 博 士 出 国进 修 后 仍 上 ，石德顺还参与水牛体外受精技术 “ 中 国经 济 与安 全 事 务 委员 会 ” 。报 告 积 极争 取 回到 他 的科 研 组 。 目前 ，石 的研究 ，为 １ ９ ９ ３ 年９ 月我国首例试管 长达 １ ５ ８ 页 ，收 集 了 大量 中 国 ２ ０ ０ ３ 至 德顺 团队有 ８ 名博士 、４ 名博导 ，形成 水 牛 的成功 作 出了重要 贡献 。 ２ ０ ０ ５ 年 的科 技新 进 展 ，重 点列 出了 １ ７ 了一个从 基 因克 隆与转 基 因载体 构 受 精 卵 和 卵母 细 胞 的 冷 冻保 存 一 项他 认 为 值 得关 注 的中 国科 技 的 成就 建 、细胞 培 养 与基 因转 染 到胚 胎 生 产 直 是低 温生 物 学 的一 个难 题 。石 德 顺 与 计 划 。 其 中 ，石 德 顺 的 研 究 成 果 和 胚胎 移 植 等 几个 关 键 环 节相 互 紧密 采 用 玻 璃 毛细 管 作 为冷 冻 容 器 ，并 对 《 细 胞 克 隆技 术 —— 世 界 第 一 头 克 隆 衔 接 的 动物 生 物 技 术 研 究 创 新 团 队 ， 防 冻 剂 和 平 衡 方 法 进 行 了 系统 研 究 ， 水牛 》 榜上 有名 ，排列 在 ｌ ７ 项 成 果 中 成 为 国 家重 大 科技 计 划 与 任 务 的主 要 终于建立了一套牛体外成熟卵母 细胞 的第 ８ 位 。２ ０ ０ ８ 年１ ０ 月 ，石 德 顺 受邀 承 担者 之一 。 和受精卵的玻璃化冷冻保存方法 ，于 面 对 丰 硕 的科 研 成 就 和满 载 而 至 在 “ 生 殖 生 物学 进 展 ” 国 际学 术研 讨 １ ９ ９ ９ 年４ 月 获 得 世 界 首 例 受精 卵冷 冻 成 就 不 会上作 “ 哺乳动物卵母 细胞发育潜能 的荣 誉 ，石德 顺 对 我 们 说 ：“ 保 存 的 试 管牛 犊 ，各项 技 术 指标 达到 与成 熟 分 裂 调控 ” 的大 会报 告 ，得 到 是 我 个 人 的 ，而 是 团 队齐 心协 作 的结 国际先 进水 平 。 果 ，是 家庭 支 持 的结 果 ，我 只做 了 自 国内外专 家 的高度评 价 。 动 物 克 隆 一 直是 胚 胎 生 物技 术 研 己分 内 的 事 ，我 是 这 片 土 地 的 儿 子 ， ２ ０ １ ０ 年 是 石 德顺 课 题组 收 获 丰 硕 究 的 热点 ，石 德 顺 于 １ ９ ９ ３ 年就 开 始对 我有责 任把她建设得更美好 。 ” 石 德 的 一 年 。先 后研 究 成 功 获得 了世 界 首 这 方 面 进行 研 究 。经 与华 南 师 大谭 丽 顺温文儒雅 ，平凡朴实 ，不禁让人肃 批转基 因克隆水 牛 、显微授精转基因 玲 开 展 合作 攻 关 ，很 快就 取 得 了胚 胎 然 起 敬 。鲁 迅 先 生那 句 “ 俯 首甘 为孺 水 牛 和慢 病 毒 介 导 的转 基 因水 牛 。 转 细 胞 核 移 植 技 术 的 突 破 ，于 １ ９ ９ ５ 年７ 子 牛 ” 用 在 石 德 顺 身 上 最 恰 当 不 过 基 因 克 隆水 牛 和转 基 因 水 牛被 国 内外 月１ ４日 研 究 成功 获 得 我 国首例 胚 胎细 了 ，他 就 是 一 头 默 默 耕 耘 、甘 于 奉 ７ ０ 余 家媒体转载 ，并被 中央电视 台科 胞 克 隆 牛 ，１ ９ ９ ６ 年２ 月１ ７日又 获 得另 献 、坚 守追 求 的 “ 牛” 。 技 之 光栏 目制作 成 专 题 片 “ 不 一 样 的 头 胚 胎 细胞 克隆 牛 （ 因未 及 时 助产 访 谈 在 不 知不 觉 中过 去 了近 三 个 水 牛 ”播 出 ，引起 了 国 内外 同行 专 家 死亡） ，填补 了我 国在该 领域 的空 白。 小 时 ，石德 顺 轻 松 应答 的态 度让 我 们 的高 度关 注 。此外 ，水 牛 成纤 维 细 胞 近 年 来 ，石德 顺 一 直 致 力 于 牛 和 愈 加 崇 敬 。石 德顺 语 重 心 长 地说 ，当 诱 导 为多 能 干 细胞 的研 究 也取 得 了突 水牛体细胞克隆的研 究 ，已攻克了受 今 社 会 的年 轻 人 一 定要 对 自 己的人 生 破性 进 展 ，在 国 际上 首 次成 功 获 得 了 体卵母细胞去核率低和体细胞融合率 有 一个 总体战略规划 ，正确处理好 “ 得 诱 导 的水 牛 多 能 干 细 胞 。 经 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ 低等技术难题 ，初步建立 了一套完整 与失 ” 的关 系 ，扮 演 好 每 一 个 角 色 ，
女性生殖功能保存的研究进展
伤、 精神心理因素等也影响着女性生殖功能。这使 得越来 越多的女性 希望 可以保存生育功能或 内分 泌功能 Ｊ 。近些年 ， 冷冻技术 的发展和各类辅助生 殖技术的开展让这类人群看到 了希望 ， 现今， 女性
生殖 功 能 的保 存 方法 有 卵母 细胞 冻存 、 卵母 细胞 体 外 成熟 培 养 （ ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｕ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ， Ｉ Ｖ Ｍ） 、 卵巢 组织 冻 存、 胚胎 冻存 、 子宫移植 等。本篇综述将对这 些技术 进行 寸论。
慢速程序化冷冻 和玻璃化冷冻 ２ 种。慢速程序化 冷冻是在低 浓度冷冻剂 的保护下 以及程序化冷冻 仪的控制下 ， 缓慢地程序性降低温度使卵母细胞冻
存， 由于所 需仪 器 设 备 昂贵 、 程 序复 杂 ， 且存 在 冷冻 时间长 、 易形成冰 晶、 保 护 剂 与 卵母 细 胞 接 触 时 间
通讯作者 ：李文 （ Ｅ ｍａ ｉ ｌ ：ｌ ｙ ｙ ｌ ｉ ｗｅ ｎ ＠ｓ ｉ ｎ ａ ． ｃ ｏ ｍ）
发育医学电子杂志 ２ ０ １ ６ 年７ 月 第 ４卷第 ３期
Ｊ Ｄｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍｅ ｎ ｔ Ｍｅ ｄ ，Ｊ ｕ ｌ ｙ ２ ０ １ ６ ，Ｖ ｏ １ ． ４ ，Ｎｏ － ３
李文 审校 （ 第二军 医大学 附属长征 医院 生殖 医学 中心 ，上海
随着 人 们生 活 方 式 、 工 作 环境 、 社 会发 展 等 因 素 的改 变 ， 女 性 生育 年 龄 明显 推 迟 ；随着 医疗 水平
随着 一 些 国 家 法 律 禁 止 胚 胎 冷 冻 ， 卵 子 捐 赠
和卵子银行的发展让人们对 卵母细胞冻存又有了
有 研 究将 纳 米微 粒 应 用 到 卵母 细 胞 冻存 中 ， 李 维杰等 ¨ 认 为 ， 加 入 一 定 浓 度 的纳 米 颗 粒 到低 温 保 护剂 中 ， 能 有 效 降低 复温 过 程 中 出现 的重 结 晶现 象； 郝 保 同和刘 宝 林 ¨ 认 为 ， 纳米 颗 粒 能够 改 变 低
卵母细胞发育潜能与颗粒细胞凋亡关系的初步研究
卵母细胞发育潜能与颗粒细胞凋亡关系的初步研究李媛;曹义娟;姜晶晶;马水英;李梅;胡京美;陈子江【期刊名称】《生殖医学杂志》【年(卷),期】2005(14)1【摘要】目的探讨卵母细胞发育潜能与颗粒细胞凋亡之间的关系.方法将卵母细胞在体外培养28～30 h后,取其颗粒细胞,采用TUNEL法进行凋亡率的分析,并与卵子的成熟情况和卵子的评分及形成胚胎结果进行对照. 结果经培养后,随着卵母细胞成熟度的降低,凋亡率升高;而且随着卵母细胞评分和发育潜能的降低,颗粒细胞凋亡率逐渐升高.结论卵子发育潜能与颗粒细胞凋亡密切相关,通过测定颗粒细胞的凋亡率可预测未成熟卵母细胞的发育潜能.【总页数】4页(P6-9)【作者】李媛;曹义娟;姜晶晶;马水英;李梅;胡京美;陈子江【作者单位】山东大学山东省立医院生殖医学中心,济南,250021;山东大学山东省立医院生殖医学中心,济南,250021;山东大学山东省立医院生殖医学中心,济南,250021;山东大学山东省立医院生殖医学中心,济南,250021;山东大学山东省立医院生殖医学中心,济南,250021;山东大学山东省立医院生殖医学中心,济南,250021;山东大学山东省立医院生殖医学中心,济南,250021【正文语种】中文【中图分类】R714.13【相关文献】1.卵巢颗粒细胞高尔基体磷酸化蛋白3表达对颗粒细胞凋亡及卵母细胞发育潜能的影响 [J], 张艳;林元;林典梁;孙艳;杜生荣2.颗粒细胞凋亡对卵母细胞发育潜能的影响 [J], 曹义娟3.水牛卵丘颗粒细胞凋亡与卵母细胞体外发育潜能的研究 [J], 王晓丽;杨娟;陈玉;成俊萍;潘红平;韦精卫;陆凤花;石德顺4.颗粒细胞凋亡对卵母细胞发育潜能的影响 [J], 曹义娟5.颗粒细胞凋亡对卵母细胞发育潜能的影响 [J], 曹义娟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
牛体外发育卵母细胞成熟的评估方法研究
牛体外发育卵母细胞成熟的评估方法研究李晓霞;曹平华;禹学礼【摘要】为探讨不同评估方法对牛卵母细胞体外成熟的判定效果,以牛卵丘卵母细胞复合体(COCs)为试验材料,采用比较卵丘扩展、形态学观察第一极体排出和固定染色观察第一极体3种方法评估牛卵母细胞成熟率的差异.结果表明,牛卵母细胞经体外24 h成熟培养后,卵丘扩展分级的成熟率为76.8％,形态学观察第一极体排出率为71.2％,固定染色观察第一极体核成熟率为77.1％,3种判定方法评估成熟率无显著差异(P＞0.05).因此,3种方法均可用于卵母细胞的体外成熟判定.%In this study,three different methods,including the cumulusexpansion,morphologic observation or staining analysis of the first polar body eduction,were evaluated for the assessment of in vitro bovine oocyte maturation.The result showed that the maturation rate was 76.8％ by method of the cumulus expansion while the first polar body eduction rate of morphologic observation and staining analysis were 71.2％ and77.1％,respectively.No significant difference was observed among three different methods(P＞0.05),indicating that all the three methods can be used to assess the maturation of bovine oocytes in vitro.【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2013(042)007【总页数】4页(P130-133)【关键词】牛;卵母细胞;体外成熟;卵丘扩展;第一极体【作者】李晓霞;曹平华;禹学礼【作者单位】河南科技大学动物科技学院,河南洛阳471003;河南科技大学动物科技学院,河南洛阳471003;河南科技大学动物科技学院,河南洛阳471003【正文语种】中文【中图分类】S823.9胚胎体外生产（IVP）技术主要包括卵母细胞体外成熟（IVM）、体外受精（IVF）、受精卵的体外培养（IVC）及冷冻保存（FC）4个主要技术环节。
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矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。