京尼平苷及其代谢物在大鼠体内的药代动力学研究_
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流动相 :甲醇 2水 2冰醋酸 ( 35 ∶65 ∶012) ;柱温 30 ℃;检测波长 238 nm;流速 019 mL ·m in- 1 ,进样量 5 μL。 2. 3 方法学考察
·61·
© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
SD 大鼠 ,雄性 ,体重 260～300 g,由北京维通利 华实验动物有限公司提供 ,动物合格证号 : SCXK (京 200220003) 。 2 方法 2. 1 京尼平的制备
参照文献 [ 2 ]方法制备 ,取 110 g京尼平苷和 40 mgβ2葡萄糖苷酶溶于 20 mL 水中 ,在 37 ℃的水 浴中水解 4 h后取出 ,以乙醚萃取 ,合并乙醚液 ,无 水硫酸钠脱水后 ,挥干乙醚 ,经乙醚重结晶后 ,在 2. 2 条件下 ,按峰面积归一法计算 ,纯度为 9619%。 2. 2 色谱条件
Ke
样品
/μg·mL - 1
/h- 1
京尼平苷 京尼平
样品 京尼平苷 京尼平
6183 ±0199 01013 ±01002 Cmax /μg·mL - 1 3123 ±0137 01017 ±01005
0175 ±0124 0118 ±0110
Tmax / h 1117 ±0158 0167 ±0114
取一系列浓度的京尼平和京尼平苷对照品溶液 只 ,实验前禁食 14 h,灌胃给予 280 mg·kg- 1的京尼
用 N2去掉溶剂加入空白血浆 500μL ,按 215操作处 理 ,计算相应对照品和内标物峰面积比值 ( Y) ,对应
平苷 溶 液 , 第 1 组 分 别 于 给 药 后 0117, 015, 110, 215, 1215 h,第 2 组分别于给药后 0133, 0175, 115,
[关键词 ] 京尼平苷 ;京尼平 ;药代动力学 [中图分类号 ] R 285. 5 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 100125302 (2007) 0120061203
栀子为茜草科栀子 Ga rden ia jasm inoides Ellis的 干燥成熟果实 ,经卫生部批准可药食两用 。药用时 , 栀子常用作保肝利胆中药 ;在保健品中 ,常用于化学 性肝损伤的辅助治疗 。京尼平苷为栀子中的主要活 性成分 ,且含量较高 ,大鼠灌胃给予 280 mg·kg- 1 的京尼平苷能导致严重的肝损伤 [ 1 ] 。本实验观察 了京尼平苷及其代谢物京尼平的药代动力学 ,为其 安全 、合理用药提供依据 。 1 材料 1. 1 药品 、试剂
mL - 1 。
上样于已预处理好的 SPE小柱 ,加入内标物溶液 50
2. 3. 3 回收率实验
μL;先用水 1 mL 冲洗 ,再以甲醇 500μL 洗脱 ,收集
2. 3. 3. 1 取上述 3714 μg·mL - 1的京尼平苷溶液 甲醇洗脱液 , 012μm 滤膜过滤 , HPLC 分析 ,内标法
4 讨论 血药浓度经时数据经 BAPP统计拟合后 ,京尼
Ka
t1 /2
/h- 1
/h- 1
1125 ±0156 5108 ±1169
1100 ±0135 4186 ±2155
AUC0→t / h·μg·mL - 1 11116 ±2113 01051 ±01013
MRT
/h- 1
2139 ±0118 7186 ±3161 AUC0→∞ / h·μg·mL - 1 11123 ± 2118 01091 ±01013
μL , N2吹干 ,精密加入空白血浆 110 mL 混匀 ( 5194 μg·mL - 1 ) ,分别吸取含药血浆 500, 100 μL ,再加 入空白血浆 0, 400μL ,按照 2. 5操作处理 ,同样 ,取 上述 5914μg·mL - 1的京尼平溶液加入甲醇按同样 比例稀释 ,进样 , HPLC分析 ,京尼平高 、低 2个浓度 的平均加样回收率 9816%。
第 32卷第 1期 中 国 中 药 杂 志
Vol. 32, Issue 1
2007年 1月
Ch ina Journa l of Ch inese M a ter ia M ed ica
January, 2007
仅为 Cmax的 2% ,且消除速率常数为 ( 0175 ±0124 ) h- 1 ;京尼平达峰血药浓度很低 , Cmax仅为 ( 17141 ± 5127) ng·mL - 1 。有文献报道京尼平苷引起的肝 毒性与其在肠道转化成京尼平有关 [ 3 ] ,但本研究发 现京尼平血药浓度很低 ,且京尼平可以与甘氨酸结 合而生成较强生物活性的栀子蓝 ,据此推测 ,栀子蓝 可能为其导致肝毒性的直接物质基础 。京尼平苷及 代谢物组织分布与毒性的相关性研究尚在研究 。
京尼平苷购自安徽亳州亚强天然产物制品厂 , 经 HPLC 峰 面 积 归 一 法 测 定 京 尼 平 苷 含 量 为 9815% ;京尼平苷和芍药苷均购自中国药品生物制 品检 定 所 (批 号 分 别 为 1107492200511, 1107362 200526) ;京尼平 ,经 HPLC 峰面积归一法测定京尼 平含量不少于 9610% ,β2葡萄糖苷酶 ( Fluka, p rod2 uct of Sigma2A ldrich, Lot & Filling code: 1076858, 11505106) 。 1. 2 仪器
平苷和京尼平均符合一室模型 。京尼平苷在血浆中
代谢消除 ,单次给药经 1215 h后京尼平苷血浆浓度
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© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
300μL , N2吹干 , 精密加入空白血浆 112 mL 混匀 计算各自血浆药物浓度 。
(9135μg·mL - 1 ) ,分别吸取含药血浆 500, 400, 100 3 结果
μL ,再加入空白血浆 0, 100, 400 μL ,按照 215 操作 3. 1 色谱行为
处理 。同样 ,取上述 3714 μg·mL - 1浓度的京尼平
[收稿日期 ] 2006206226 [基金项目 ] 国家科技基础条件平台项目 ( 2004DEA71170 ) ; 科研院所社会公益研究专项 (2004D IB2J062) [通讯 作 者 ] 3 杨 洪 军 , Tel: ( 010 ) 6401441122948, E2mail: hongjun0420@ vip. sina. com
精密称 取 对 照 品 京 尼 平 苷 、京 尼 平 各 1187,
取上述同一样品连续重复进样 5次测定 ,计算
2197 mg加甲醇溶解 ,稀释定容至 50 mL ,分别制成 日内 RSD = 116% (京尼平苷 ) 、213% (京尼平 ) ,第
3714, 5914μg·mL - 1的对照品溶液 ;精密称取内标 2～5 天 ,取上述同一样品连续测定 5 次 ,计算日间
Hale Waihona Puke W aters系列高效液相色谱仪系统 ,包括 1515等 度泵 , 2487型双波长紫外检测器 , 717 自动进样系 统 ,色谱数据软件 Empower 2 software (USA ) ; Accu2 BOND 2C18固 相 萃 取 小 柱 100 mg ·mL - 1 ( A gilent Technologies Inc, USA ) ; Venusil M P2C18色谱柱 [ 416 mm ×150 mm , 5 μm ( Agela Technologies Inc, USA ) ];生物利用度研究数据处理通用程序 BAPP 210,中国药科大学药代中心开发 。 1. 3 动物
对照品的浓度 X ,经线性回归的直线方程如下 :京尼 510, 810 h,眼眶取血 115 mL 于肝素化的试管中 ,照
平苷 , Y = 12 883157X - 666187 ( r = 01999) ;京尼平 , 2. 5操作 ,记录各样品图谱 ,按内标法峰面积定量计
Y = 11 955107X - 411111 ( r = 01996) ;即京尼平苷浓 算血浆药物浓度 。
经过预处理样品色谱图中内源性干扰成分大为
苷溶液加入甲醇按同样比例稀释 ,进样分析 ,京尼平 减少 ,京尼平苷 、内标物 、京尼平各峰均达到基线分
苷高 、中 、低 3个浓度平均加样回收率 7814%。
离 ,保留时间分别为 6139, 7193, 10170 m in,可见该
2. 3. 3. 2 取上述 5914μg·mL - 1的京尼平溶液 100 方法专属性强 。
度在 9315～1187 μg·mL - 1线性关系良好 ; 京尼平 2. 5 样品处理方法
浓度在 5194 ～29170 ng·mL - 1线性关系良好 。京
经眼眶取血 115 mL 于肝素化的试管中 ,轻轻混
尼平苷和京尼平 的检 测限 分别 为 716, 515 ng · 匀 , 10 000 r·m in- 1离心 15 m in,分离血浆 500 μL ,
3. 2 药代动力学参数的计算 不同时间点的血药浓度 ,经 BAPP统计拟合后 ,
以 A IC和 R判断房室模型和选择参数 ,京尼平苷和 京尼平均符合一室模型 ,在体内的平均滞留时间分 别为 214, 719 h,无明显蓄积现象 ,药代动力学参数 见表 1。
表 1 京尼平苷及京尼平的药代动力学参数
A 分布相零时截距
成 龙 , 杨洪军 3 , 梁日欣 , 黄璐琦 , 宗桂珍
(中国中医科学院 中药研究所 , 北京 100700)
[摘要 ] 目的 :研究京尼平苷及其肠道代谢物京尼平在大鼠体内的药代动力学过程 。方法 :灌胃给予 280 mg ·kg- 1的京尼平苷 , RP2HPLC测定血浆中京尼平苷及京尼平 ,应用 BAPP统计模拟计算 ,得出相应的药代动力学参 数 。结果 :主要药动学参数为 :京尼平苷和京尼平最大血药浓度 ( Cmax )分别为 ( 3123 ±0137) μg·mL - 1 , ( 17141 ± 5127) ng·mL - 1 ;半衰期 ( t1/2 )分别为 ( 1100 ±0135 ) h, ( 4186 ±2155 ) h; 平均滞留时间 (MRT) 分别为 ( 2139 ± 0118) h, (7186 ±3161) h;曲线下面积 (AUCi) ( 11123 ±2118) h·μg·mL - 1 , ( 90160 ±13144 ) h·ng·mL - 1。结 论 :二者药代动力学均符合一室模型 ,京尼平苷在血浆中代谢消除较快 , t1/2为 ( 1100 ±0135 ) h;京尼平血浆浓度较 低 , Cmax为 ( 17141 ±5127) ng·mL - 1。
第 32卷第 1期 中 国 中 药 杂 志
Vol. 32, Issue 1
2007年 1月
Ch ina Journa l of Ch inese M a ter ia M ed ica
January, 2007
京尼平苷及其代谢物在大鼠体内的 药代动力学研究 Ⅰ
物芍药苷 2116 mg以高纯水溶解 ,稀释定容至 25 RSD = 219% (京尼平苷 ) 、315% (京尼平 ) 。
mL ,即得 8614μg·mL - 1的芍药苷内标溶液 ,备用 。 2. 4 样品的采集
2. 3. 2 线性范围和检测限
取雄性 SD 大鼠 10 只 ,随机分成 2 组 ,每组 5
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Vol. 32, Issue 1
2007年 1月
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January, 2007
2. 3. 1 对照品溶液及内标物溶液的制备
2. 3. 4 精密度实验
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SD 大鼠 ,雄性 ,体重 260～300 g,由北京维通利 华实验动物有限公司提供 ,动物合格证号 : SCXK (京 200220003) 。 2 方法 2. 1 京尼平的制备
参照文献 [ 2 ]方法制备 ,取 110 g京尼平苷和 40 mgβ2葡萄糖苷酶溶于 20 mL 水中 ,在 37 ℃的水 浴中水解 4 h后取出 ,以乙醚萃取 ,合并乙醚液 ,无 水硫酸钠脱水后 ,挥干乙醚 ,经乙醚重结晶后 ,在 2. 2 条件下 ,按峰面积归一法计算 ,纯度为 9619%。 2. 2 色谱条件
Ke
样品
/μg·mL - 1
/h- 1
京尼平苷 京尼平
样品 京尼平苷 京尼平
6183 ±0199 01013 ±01002 Cmax /μg·mL - 1 3123 ±0137 01017 ±01005
0175 ±0124 0118 ±0110
Tmax / h 1117 ±0158 0167 ±0114
取一系列浓度的京尼平和京尼平苷对照品溶液 只 ,实验前禁食 14 h,灌胃给予 280 mg·kg- 1的京尼
用 N2去掉溶剂加入空白血浆 500μL ,按 215操作处 理 ,计算相应对照品和内标物峰面积比值 ( Y) ,对应
平苷 溶 液 , 第 1 组 分 别 于 给 药 后 0117, 015, 110, 215, 1215 h,第 2 组分别于给药后 0133, 0175, 115,
[关键词 ] 京尼平苷 ;京尼平 ;药代动力学 [中图分类号 ] R 285. 5 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 100125302 (2007) 0120061203
栀子为茜草科栀子 Ga rden ia jasm inoides Ellis的 干燥成熟果实 ,经卫生部批准可药食两用 。药用时 , 栀子常用作保肝利胆中药 ;在保健品中 ,常用于化学 性肝损伤的辅助治疗 。京尼平苷为栀子中的主要活 性成分 ,且含量较高 ,大鼠灌胃给予 280 mg·kg- 1 的京尼平苷能导致严重的肝损伤 [ 1 ] 。本实验观察 了京尼平苷及其代谢物京尼平的药代动力学 ,为其 安全 、合理用药提供依据 。 1 材料 1. 1 药品 、试剂
mL - 1 。
上样于已预处理好的 SPE小柱 ,加入内标物溶液 50
2. 3. 3 回收率实验
μL;先用水 1 mL 冲洗 ,再以甲醇 500μL 洗脱 ,收集
2. 3. 3. 1 取上述 3714 μg·mL - 1的京尼平苷溶液 甲醇洗脱液 , 012μm 滤膜过滤 , HPLC 分析 ,内标法
4 讨论 血药浓度经时数据经 BAPP统计拟合后 ,京尼
Ka
t1 /2
/h- 1
/h- 1
1125 ±0156 5108 ±1169
1100 ±0135 4186 ±2155
AUC0→t / h·μg·mL - 1 11116 ±2113 01051 ±01013
MRT
/h- 1
2139 ±0118 7186 ±3161 AUC0→∞ / h·μg·mL - 1 11123 ± 2118 01091 ±01013
μL , N2吹干 ,精密加入空白血浆 110 mL 混匀 ( 5194 μg·mL - 1 ) ,分别吸取含药血浆 500, 100 μL ,再加 入空白血浆 0, 400μL ,按照 2. 5操作处理 ,同样 ,取 上述 5914μg·mL - 1的京尼平溶液加入甲醇按同样 比例稀释 ,进样 , HPLC分析 ,京尼平高 、低 2个浓度 的平均加样回收率 9816%。
第 32卷第 1期 中 国 中 药 杂 志
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仅为 Cmax的 2% ,且消除速率常数为 ( 0175 ±0124 ) h- 1 ;京尼平达峰血药浓度很低 , Cmax仅为 ( 17141 ± 5127) ng·mL - 1 。有文献报道京尼平苷引起的肝 毒性与其在肠道转化成京尼平有关 [ 3 ] ,但本研究发 现京尼平血药浓度很低 ,且京尼平可以与甘氨酸结 合而生成较强生物活性的栀子蓝 ,据此推测 ,栀子蓝 可能为其导致肝毒性的直接物质基础 。京尼平苷及 代谢物组织分布与毒性的相关性研究尚在研究 。
京尼平苷购自安徽亳州亚强天然产物制品厂 , 经 HPLC 峰 面 积 归 一 法 测 定 京 尼 平 苷 含 量 为 9815% ;京尼平苷和芍药苷均购自中国药品生物制 品检 定 所 (批 号 分 别 为 1107492200511, 1107362 200526) ;京尼平 ,经 HPLC 峰面积归一法测定京尼 平含量不少于 9610% ,β2葡萄糖苷酶 ( Fluka, p rod2 uct of Sigma2A ldrich, Lot & Filling code: 1076858, 11505106) 。 1. 2 仪器
平苷和京尼平均符合一室模型 。京尼平苷在血浆中
代谢消除 ,单次给药经 1215 h后京尼平苷血浆浓度
·62·
© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
300μL , N2吹干 , 精密加入空白血浆 112 mL 混匀 计算各自血浆药物浓度 。
(9135μg·mL - 1 ) ,分别吸取含药血浆 500, 400, 100 3 结果
μL ,再加入空白血浆 0, 100, 400 μL ,按照 215 操作 3. 1 色谱行为
处理 。同样 ,取上述 3714 μg·mL - 1浓度的京尼平
[收稿日期 ] 2006206226 [基金项目 ] 国家科技基础条件平台项目 ( 2004DEA71170 ) ; 科研院所社会公益研究专项 (2004D IB2J062) [通讯 作 者 ] 3 杨 洪 军 , Tel: ( 010 ) 6401441122948, E2mail: hongjun0420@ vip. sina. com
精密称 取 对 照 品 京 尼 平 苷 、京 尼 平 各 1187,
取上述同一样品连续重复进样 5次测定 ,计算
2197 mg加甲醇溶解 ,稀释定容至 50 mL ,分别制成 日内 RSD = 116% (京尼平苷 ) 、213% (京尼平 ) ,第
3714, 5914μg·mL - 1的对照品溶液 ;精密称取内标 2～5 天 ,取上述同一样品连续测定 5 次 ,计算日间
Hale Waihona Puke W aters系列高效液相色谱仪系统 ,包括 1515等 度泵 , 2487型双波长紫外检测器 , 717 自动进样系 统 ,色谱数据软件 Empower 2 software (USA ) ; Accu2 BOND 2C18固 相 萃 取 小 柱 100 mg ·mL - 1 ( A gilent Technologies Inc, USA ) ; Venusil M P2C18色谱柱 [ 416 mm ×150 mm , 5 μm ( Agela Technologies Inc, USA ) ];生物利用度研究数据处理通用程序 BAPP 210,中国药科大学药代中心开发 。 1. 3 动物
对照品的浓度 X ,经线性回归的直线方程如下 :京尼 510, 810 h,眼眶取血 115 mL 于肝素化的试管中 ,照
平苷 , Y = 12 883157X - 666187 ( r = 01999) ;京尼平 , 2. 5操作 ,记录各样品图谱 ,按内标法峰面积定量计
Y = 11 955107X - 411111 ( r = 01996) ;即京尼平苷浓 算血浆药物浓度 。
经过预处理样品色谱图中内源性干扰成分大为
苷溶液加入甲醇按同样比例稀释 ,进样分析 ,京尼平 减少 ,京尼平苷 、内标物 、京尼平各峰均达到基线分
苷高 、中 、低 3个浓度平均加样回收率 7814%。
离 ,保留时间分别为 6139, 7193, 10170 m in,可见该
2. 3. 3. 2 取上述 5914μg·mL - 1的京尼平溶液 100 方法专属性强 。
度在 9315～1187 μg·mL - 1线性关系良好 ; 京尼平 2. 5 样品处理方法
浓度在 5194 ～29170 ng·mL - 1线性关系良好 。京
经眼眶取血 115 mL 于肝素化的试管中 ,轻轻混
尼平苷和京尼平 的检 测限 分别 为 716, 515 ng · 匀 , 10 000 r·m in- 1离心 15 m in,分离血浆 500 μL ,
3. 2 药代动力学参数的计算 不同时间点的血药浓度 ,经 BAPP统计拟合后 ,
以 A IC和 R判断房室模型和选择参数 ,京尼平苷和 京尼平均符合一室模型 ,在体内的平均滞留时间分 别为 214, 719 h,无明显蓄积现象 ,药代动力学参数 见表 1。
表 1 京尼平苷及京尼平的药代动力学参数
A 分布相零时截距
成 龙 , 杨洪军 3 , 梁日欣 , 黄璐琦 , 宗桂珍
(中国中医科学院 中药研究所 , 北京 100700)
[摘要 ] 目的 :研究京尼平苷及其肠道代谢物京尼平在大鼠体内的药代动力学过程 。方法 :灌胃给予 280 mg ·kg- 1的京尼平苷 , RP2HPLC测定血浆中京尼平苷及京尼平 ,应用 BAPP统计模拟计算 ,得出相应的药代动力学参 数 。结果 :主要药动学参数为 :京尼平苷和京尼平最大血药浓度 ( Cmax )分别为 ( 3123 ±0137) μg·mL - 1 , ( 17141 ± 5127) ng·mL - 1 ;半衰期 ( t1/2 )分别为 ( 1100 ±0135 ) h, ( 4186 ±2155 ) h; 平均滞留时间 (MRT) 分别为 ( 2139 ± 0118) h, (7186 ±3161) h;曲线下面积 (AUCi) ( 11123 ±2118) h·μg·mL - 1 , ( 90160 ±13144 ) h·ng·mL - 1。结 论 :二者药代动力学均符合一室模型 ,京尼平苷在血浆中代谢消除较快 , t1/2为 ( 1100 ±0135 ) h;京尼平血浆浓度较 低 , Cmax为 ( 17141 ±5127) ng·mL - 1。
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京尼平苷及其代谢物在大鼠体内的 药代动力学研究 Ⅰ
物芍药苷 2116 mg以高纯水溶解 ,稀释定容至 25 RSD = 219% (京尼平苷 ) 、315% (京尼平 ) 。
mL ,即得 8614μg·mL - 1的芍药苷内标溶液 ,备用 。 2. 4 样品的采集
2. 3. 2 线性范围和检测限
取雄性 SD 大鼠 10 只 ,随机分成 2 组 ,每组 5
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2. 3. 1 对照品溶液及内标物溶液的制备
2. 3. 4 精密度实验