54104核酸提取试剂(柱式法)

用于病毒RNA和DNA，并从动物的全血，血清，血浆，其他体液，拭子和洗液，和组织的细菌DNA的纯化

QIAGEN制定标准：

DNA，RNA和蛋白质的纯化

microRNA研究和RNAi

QIAamp cador Pathogen Mini Kit（50）（250）

货号54104 54106

数量50 250

QIAamp迷你色谱柱50 250

收集管（2毫升）200 1000

缓冲区VXL * 6毫升30毫升

缓冲液ACB *†（浓缩液）12毫升60毫升

QIAGEN®蛋白酶K. 1.25毫升 6 毫升

载体RNA（poly A）310μg 310μg

缓冲液AW1 *‡（浓缩液）19毫升98毫升

缓冲液AW2‡（浓缩液）17毫升81毫升

缓冲区AVE§20毫升 2 x 20 毫升

快速启动协议 1 1

储存方式：

室温（15-25℃）干燥储存

注：QIAGEN蛋白酶K可以在室温下储存。如果长时间存放，或环境温度经常超过25°C，我们建议在2-8°C下存放

程序

1.将20μl蛋白酶K吸移到2ml微量离心管（未提供）中。

2.向蛋白酶K中加入200μl液体样品。

注意：如果处理较低的样品体积，请使用PBS或0.9％NaCl将体积调节至200μl。

3.加入100μlBufferVXL。关闭盖子并通过脉冲涡旋混合。

为确保充分裂解，将样品与Buffer VXL充分混合，得到均匀溶液。如果使用含有缓冲液ATL的样品液，例如在酶消化组织后，可能形成沉淀物。可以通过在56℃下短暂孵育来溶解沉淀物。但是，它们对后续步骤没有影响。

注意：如果处理无细胞样品，请确保在使用前每100μlBufferVXL添加1μg载体RNA。如果处理富含细胞的样品（如全血和组织），请勿添加载体RNA。

4.在20-25°C孵育15分钟。

5.短暂离心2毫升管以从所述盖的内部取出液滴。

6.向样品中加入350μl缓冲液ACB，盖上盖子，通过脉冲涡旋充分混合。

确保在使用前将异丙醇加入Buffer ACB浓缩液中。

7.短暂离心2毫升管以从盖的内部去除液滴。

8.将来自步骤7的裂解物转移到置于2ml收集管中的QIAamp Mini柱中，不润湿边缘。盖上盖子，以6000 x g（8000 rpm）离心1分钟。将QIAamp Mini柱放入干净的2 ml收集管中，丢弃含有滤液的收集管。

如果裂解液在离心后没有完全通过色谱柱，则再次以更高的速度（高达20,000 x g; 14,000 rpm）离心，直到QIAamp Mini色谱柱为空。9.打开QIAamp Mini色谱柱，加入600μ

lBufferAW1，不要弄湿边缘。盖上盖子，以6000 x g（8000 rpm）离心1分钟。将QIAamp Mini柱置于干净的2 ml收集管中，丢弃含有滤液的试管。

10.打开QIAamp Mini色谱柱，加入600μlBufferAW2，不要弄湿边缘。盖上盖子，以6000 x g（8000 rpm）离心1分钟。将QIAamp Mini柱置于干净的2 ml收集管中，丢弃含有滤液的试管。

11.全速离心（20,000×g; 14,000rpm）2分钟以干燥膜。

12.将QIAamp Mini柱置于干净的1.5 ml微量离心管（未提供）中，丢弃含有滤液的收集管。打开QIAamp Mini柱，在膜中心加入50-150μlBufferAVE。盖上盖子，在室温（15-25°C）下孵育1分钟。全速离心（20,000 x g; 14,000 rpm）1分钟。

重要：确保洗脱缓冲液平衡至室温。如果以小体积（<75μl）进行洗脱，则必须将洗脱缓冲液分配到膜的中心，以完全洗脱结合的RNA和DNA。洗脱体积灵活，可根据下游应用的要求进行调整。

为了降低噪音，洗脱的离心速度可以设定为6000×g。如果这样做，则回收的洗脱液体积将比施加到柱上的洗脱缓冲液体积小约5μl。