VOLAB动物细胞工程实验室建设及实验基本操作

VOLAB动物细胞工程实验室建设及实验基本操作第一节实验室设置及仪器设备

1．基本实验室

1.1 洗涤间

根据工作量的大小决定其大小，一般面积控制在30-50m2。在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置2个水槽，用于

清洗小型玻璃器皿。如果工作量大，可以购置一台洗瓶机。准备1-2个洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿。此外还应配置落水架、干燥箱、

柜子、超声波清洗器等。

1.2 培养基配制间

面积60平方米左右，配备的主要仪器设备有：冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱以体积180-200L为宜，用于

储存培养基母液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材料。天平

应有不同感量。

1.3 消毒间

配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选

用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可选用立式自动控制压力和温

度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。

如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成一个准备间，要求是设备的安装

和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。

1.4 无菌操作室

无菌操作室主要用于实验材料的接种操作，所以又叫接种室。通常由里外两间

组成，外间是缓冲间，用于准备工作，还有防止污染的作用。缓冲间的门应该

与接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开门和人的进

出带进杂菌。缓冲间内应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无

菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进入操作间前要穿上消过

毒的工作服和拖鞋。室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。

1.5 培养室

为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养室的房间不要窗户，但应当

留一个通气窗，并安上排气扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。天

花板和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或瓷砖铺设，一般要分两间，

一为光照培养室，一为暗培养室。培养室外应有一预备间或走廊。

培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W，固定在培养架的侧面或搁板的下面，每层有两支日光灯，距离在20cm，光照强度为2000-3000lx。

2．辅助实验室

2.1鉴定室

细胞学鉴定室其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。应配置各种显微镜、照相系统等。生化分析室在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。离心机、酶联免疫检

测仪、天平、PCR仪等。

2.2、温室

为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。

第二节实验基本操作

一. 洗涤技术

(1)洗涤液的配制

(2)洗涤方法

A、新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质

可先用0.5％的去污剂洗刷，再用自来水洗净，然后浸泡在1％～2％盐酸溶液

中过夜（不可少于四小时），再用自来水冲洗，最后用无离子水冲洗两次，在

100℃～120℃烘箱内烘干备用。

B、使用过的玻璃仪器的清洗

先用自来水洗刷至无污物，再用合适的毛刷沾去污剂（粉）洗刷，或浸泡在

0.5％的清洗剂中超声清洗（比色皿决不可超声），然后用自来水彻底洗净去污剂，用无离子水洗两次，烘干备用（计量仪器不可烘干）。清洗后器皿内外不

可挂有水珠，否则重洗，若重洗后仍挂有水珠，则需用洗液浸泡数小时后（或

用去污粉擦洗），重新清洗。

C、塑料器皿的清洗

聚乙烯、聚丙烯等制成的塑料器皿，在生物化学实验中已用的越来越多。第一

次使用塑料器皿时，可先用8mol/L尿素（用浓盐酸调pH = 1）清洗，接着依次用无离子水、1 mol/L KOH和无离子水清洗，然后用10—3 mol/L EDTA

除去金属离子的污染，最后用无离子水彻底清洗，以后每次使用时，可只用

0.5％的去污剂清洗，然后用自来水和无离子水洗净即可。

D、金属用品洗涤

金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤（新的可以用热洗衣粉水洗净），需要清

洗时，一般用酒精擦洗，然后火焰干燥。

E、除菌过滤器用清水冲洗后，用洗液冲洗，再用清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗，晾干备用。

二.灭菌

（一）、无菌的概念的建立

有菌的范畴：凡是暴露在空气中的物体，至少其表面都是有菌的。如植物的表面、超净工作台的台面，未处理的工具和手等。

无菌的范畴：高压高温处理（工具、器皿、培养基等）、物理或化学处理、火

烤后的物体、

健康的动植物不与内外部表面接触的组织、内部可能是无菌的（有时也有内生菌，但不会影响培养，也不会污染）

（二）、灭菌的方法：

1、物理方法：干热、湿热、过滤（0.25微米）、紫外灯、超声波等。

2、化学方法：使用灭菌剂或抗菌素，如酒精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、双氧水、福尔马林等

（1）干热灭菌

适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方法：150℃、40min或120℃、120min，如果发现芽孢杆菌，160℃、90~120min

（2）湿热灭菌

适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。121℃维持

20~30min

注意点：加足水、排尽气、气压降到0时，才能开盖

（3）过滤灭菌

培养基的灭菌一般用高压高温处理，但如果培养基中某些成分遇到高温分解（如某些生长调节剂GA3、玉米素等），就需要过滤灭菌。另外酶、血清等也需要过滤灭菌

（4）射线灭菌

主要是利用紫外灯进行照射，适合实验室空气、操作台等，灭菌时间20-

30min。

注意：关灯后5min后再进入。超净工作台关灯后要打开风机。

（5）火焰灼烧灭菌

用火焰灼烧达到灭菌目的，适用于接种器皿的灭菌。

（6）消毒剂

适用外植体、实验器皿、操作表面、皮肤等

注意：

（1）实验器皿、操作表面、皮肤一般用70~75%酒精

（2）升汞为剧毒药品，一则使用时注意别溅到皮肤上，二则使用后要进行处理，不能直接导入下水道。

升汞处理方法：

升汞＋Na2S－－－絮状沉淀（至絮状沉淀不再产生为止）－－＋FeSO4（中和过多的Na2S ）

（3）长期不用的培养室或接种室要进行熏蒸。

方法：甲醛、高锰酸钾熏蒸。

甲醛的用量通常按每立方米空间2-6毫升计算，高锰酸钾的用量是甲醛的一半。室内准备妥当后，把称好的高锰酸钾放在瓷碗或烧杯内(最好在碗或杯下面铺一张报纸，以利清洗)，然后将甲醛也倒入碗或杯内，立即出屋关门。几秒钟后，甲醛溶液即沸腾挥发。高锰酸钾是一种氧化剂，当它与一部分甲醛作用时，由

氧化反应产生的热可使其余的甲醛挥发为气体。