胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1对肝星状细胞转化生长因子β1／Smad3信号通路的影响及意义
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中华 消 化２月 第 ３卷 第 ｌ期
Ｃ ｈ ｉ ｎ Ｊ Ｄ ｉ ｇ ｅ ｓ ｔ Ｍ ｅ ｄ Ｉ ｍａ ｇ ｅ ｏ ｌ （ Ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｎ ｉ ｃ Ｅ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ） ， Ｆ ｅ ｂ ｒ ｕ ａ ｒ ｙ ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ．３ ， Ｎ ｏ ． １
ｂ ｙ ｉ ｎ ｓ ｕ ｌ ｉ ｎ － ｌ ｉ ｋ ｅ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｂ ｉ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ １ Ｚ Ｈ Ａ ＮＧ Ｊ ｉ ａ ｎ — ｈ ｕ ａ ， Ｚ Ｈ Ａ ＮＧ Ｑ ｉ ａ ｎ — ｑ ｉ ａ ｎ ， Ｌ Ｉ Ｕ Ｌ ｉ ｘ ｉ ｎ ．Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｛Ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｏ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，ｔ ｈ ｅ Ｆ ｉ ｒ ｓ ｔ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ《 Ｓ ｈ ａ ｎ ｘ ｉ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ，Ｔ ａ ｉ ｙ ｕ ａ ｎ
Ｐ — Ｓ ｍ ａ ｄ ２ ／ ３蛋 白相对 表达量 、 ｐ － Ｓ ｍ ａ ｄ ２ ／ ３与 Ｓ ｍ ａ ｄ ３蛋 白相对 表达 量的 比值 均 明显 高于 空 白对照 组 ， 且
差异均有统计 学意义（ ０ ． ７ ０± ０ ． ０ ５与 ０ ． ４ ６± ０ ． ０ ３相 比， ｔ ＝ ８ ． ０ ５ ０ ， Ｐ＝ ０ ． ０ ０ １ ； １ ． １ ０± ０ ． １ ２与 ０ ． ７ ２± ０ ． ０ ５ 相 比， ｔ ＝ ５ ． １ ８ １ ， Ｐ＝ ０ ． ０ ０ ７ ） ； Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １ 处理组 培养 上清液中 Ｆ ｎ蛋 白相对表达量 明显高于空 白对照组 ， 且差异有统计学 意义（ ０ ． ５ ２± ０ ． ０ ４与 ０ ． ３ ５± ０ ． ０ ２相 比， ｔ ＝ ５ ． ９ ７ ６ ， Ｐ＝０ ． ０ ０ ４ ） 。结论 Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １可促 进体外培养 的ＨＳ Ｃ — Ｔ ６ 产生 Ｔ Ｇ Ｆ ． ｐ １ 。Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １可使 体 外 培 养 的 Ｈ Ｓ Ｃ — Ｔ ６中 Ｓ ｍ ａ ｄ ３的磷 酸化 增 加 。
处理组 培养上清液 Ｔ Ｇ Ｆ — Ｂ １ 蛋 白表 达量 均 明显高 于空 白对 照 组 ［ ０ ． ３ ４± ０ ． ０ ６与 ０ ． １ ９±０ ． ０ ３相 比 ，
（ １ ８ ８ ． ３ ４±３ ２ ． ２ ４ ） ｎ ｇ ／ Ｌ与 （ １ ３ ６ ． １ ６±１ ９ ． ５ ２ ） ｎ ｇ ／ Ｌ相 比］ ， 免疫细胞 化学法也 显示 ＨＳ Ｃ — Ｔ ６细胞 Ｔ Ｇ Ｆ 一 １ ３ １
Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １ 可使体 外培养的 Ｈ Ｓ Ｃ — Ｔ ６细胞外基质 的重要成分 Ｆ ｎ的分泌增加 。
【 关键 词 】 胰 岛素样 生 长 因子 结 合 蛋 白相 关蛋 白 １ ； 肝 星状 细 胞 ； 转 化 生长 因 子 母 １ ；
Ｓ ｍａ ｄ ３
Ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｆ ｏ ｒ ｍｉ ｎ ｇ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ阻／ Ｓ ｍａ ｄ ３ ｓ ｉ ｇ ｎ ａ ｌ ｉ ｎ ｇ ｐ ａ ｔ ｈ ｗａ ｙ ｉ ｎ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｉ ｃ ｓ ｔ ｅ ｌ ｌ ａ ｔ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ
蛋 白表达 量明显高于空 白对照 组 （ １ １ ． ８ ９± ０ ． ３ ２与 ７ ． ７ １±０ ． ６ ３相 比） ， 且差 异 均有 统计学 意 义 （ ｔ ＝
３ ． ８ ５ ９， Ｐ＝ ０ ． ０ １ ８ ； ｔ ＝ ３ ． ３ ９ １ ， Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ； ｔ ＝１ ４ ． ４ ９ ０ ， Ｐ＜０ ． ０ ５ ） ； Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １ 处 理组 与空 白对照组 ＨＳ Ｃ — Ｔ ６ 细胞 中 Ｓ ｍ ａ ｄ ３ 相 对表达量差异无统计学意义 （ ０ ． ６ ５± ０ ． ０ ５与 ０ ． ６ ４ ４ － ０ ． ０ ５相 比， ｔ ＝ ０ ． ０ ８ ４ ， Ｐ＝ ０ ． ９ ３ ７ ） ，
别设 立空 白 对 照 组 （ 加 入 等 量 磷 酸 盐 缓 冲液 ） 和 Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １处 理 组 （ 加入 终浓度为 ３ Ｏ Ｌ 的
Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １ ） ， 作用 ２ ４ ｈ 后 收集 细胞 培养上清液 ， 提取全 细胞 蛋 白， 另外 收集细胞 爬片 。培养 上清 液 中
－２ ３
．
基 础 研 究
胰 岛素样 生 长 因子 结 合 蛋 白相 关 蛋 白 １ 对 肝 星状 细胞 转 化 生 长 因子 １ ３ １ ／ Ｓ ｍ ａ ｄ ３ 信 号通 路 的影 响及 意 义
张 建华 张骞 骞 刘 立新
【 摘要 】 目的 探讨胰岛素样生长 因子结合 蛋 白相关蛋 白 ｌ （ Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １ ） 对肝 星状细胞 转化生 长因子 Ｂ ｌ （ Ｔ Ｇ Ｆ ． Ｂ １ ） ／ Ｓ ｍ ａ ｄ ３ 信号通路的影响及意义 。方法 体外 培养大 鼠肝星状细胞株 Ｈ Ｓ Ｃ — Ｔ ６ ， 分
Ｔ Ｇ Ｆ 一 １ ３ １的表达采用 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ印迹法及 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法检测 ， Ｈ Ｓ Ｃ — Ｔ ６细胞 Ｔ Ｇ Ｆ — Ｂ １的表达采用 免疫细胞 化学 法检测 ； 培养上清液 中 Ｓ ｍ ａ ｄ ３ 、 ｐ － Ｓ ｍ ａ ｄ ２ ／ ３和纤维 连接蛋 白（ Ｆ ｎ ） 的表 达采用 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｍ 印迹法 检测 。空 白对 照组 与 Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １ 处 理组 Ｔ Ｇ Ｆ — Ｂ １ 、 Ｓ ｍａ ｄ ３ 、 ｐ － Ｓ ｍａ ｄ ２ ／ ３ 、 Ｆ ｎ蛋 白表达量 、 ｐ － Ｓ ｍ ａ ｄ ２ ／ ３与 Ｓ ｍ ａ ｄ ３蛋 白相 对表达量 比值 比较采用独立样本 ｔ 检验 。结果 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｍ 印迹法及 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ检测结果 均显示 Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １
Ｃ ｈ ｉ ｎ Ｊ Ｄ ｉ ｇ ｅ ｓ ｔ Ｍ ｅ ｄ Ｉ ｍａ ｇ ｅ ｏ ｌ （ Ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｎ ｉ ｃ Ｅ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ） ， Ｆ ｅ ｂ ｒ ｕ ａ ｒ ｙ ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ．３ ， Ｎ ｏ ． １
ｂ ｙ ｉ ｎ ｓ ｕ ｌ ｉ ｎ － ｌ ｉ ｋ ｅ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｂ ｉ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ １ Ｚ Ｈ Ａ ＮＧ Ｊ ｉ ａ ｎ — ｈ ｕ ａ ， Ｚ Ｈ Ａ ＮＧ Ｑ ｉ ａ ｎ — ｑ ｉ ａ ｎ ， Ｌ Ｉ Ｕ Ｌ ｉ ｘ ｉ ｎ ．Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｛Ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｏ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，ｔ ｈ ｅ Ｆ ｉ ｒ ｓ ｔ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ《 Ｓ ｈ ａ ｎ ｘ ｉ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ，Ｔ ａ ｉ ｙ ｕ ａ ｎ
Ｐ — Ｓ ｍ ａ ｄ ２ ／ ３蛋 白相对 表达量 、 ｐ － Ｓ ｍ ａ ｄ ２ ／ ３与 Ｓ ｍ ａ ｄ ３蛋 白相对 表达 量的 比值 均 明显 高于 空 白对照 组 ， 且
差异均有统计 学意义（ ０ ． ７ ０± ０ ． ０ ５与 ０ ． ４ ６± ０ ． ０ ３相 比， ｔ ＝ ８ ． ０ ５ ０ ， Ｐ＝ ０ ． ０ ０ １ ； １ ． １ ０± ０ ． １ ２与 ０ ． ７ ２± ０ ． ０ ５ 相 比， ｔ ＝ ５ ． １ ８ １ ， Ｐ＝ ０ ． ０ ０ ７ ） ； Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １ 处理组 培养 上清液中 Ｆ ｎ蛋 白相对表达量 明显高于空 白对照组 ， 且差异有统计学 意义（ ０ ． ５ ２± ０ ． ０ ４与 ０ ． ３ ５± ０ ． ０ ２相 比， ｔ ＝ ５ ． ９ ７ ６ ， Ｐ＝０ ． ０ ０ ４ ） 。结论 Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １可促 进体外培养 的ＨＳ Ｃ — Ｔ ６ 产生 Ｔ Ｇ Ｆ ． ｐ １ 。Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １可使 体 外 培 养 的 Ｈ Ｓ Ｃ — Ｔ ６中 Ｓ ｍ ａ ｄ ３的磷 酸化 增 加 。
处理组 培养上清液 Ｔ Ｇ Ｆ — Ｂ １ 蛋 白表 达量 均 明显高 于空 白对 照 组 ［ ０ ． ３ ４± ０ ． ０ ６与 ０ ． １ ９±０ ． ０ ３相 比 ，
（ １ ８ ８ ． ３ ４±３ ２ ． ２ ４ ） ｎ ｇ ／ Ｌ与 （ １ ３ ６ ． １ ６±１ ９ ． ５ ２ ） ｎ ｇ ／ Ｌ相 比］ ， 免疫细胞 化学法也 显示 ＨＳ Ｃ — Ｔ ６细胞 Ｔ Ｇ Ｆ 一 １ ３ １
Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １ 可使体 外培养的 Ｈ Ｓ Ｃ — Ｔ ６细胞外基质 的重要成分 Ｆ ｎ的分泌增加 。
【 关键 词 】 胰 岛素样 生 长 因子 结 合 蛋 白相 关蛋 白 １ ； 肝 星状 细 胞 ； 转 化 生长 因 子 母 １ ；
Ｓ ｍａ ｄ ３
Ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｆ ｏ ｒ ｍｉ ｎ ｇ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ阻／ Ｓ ｍａ ｄ ３ ｓ ｉ ｇ ｎ ａ ｌ ｉ ｎ ｇ ｐ ａ ｔ ｈ ｗａ ｙ ｉ ｎ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｉ ｃ ｓ ｔ ｅ ｌ ｌ ａ ｔ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ
蛋 白表达 量明显高于空 白对照 组 （ １ １ ． ８ ９± ０ ． ３ ２与 ７ ． ７ １±０ ． ６ ３相 比） ， 且差 异 均有 统计学 意 义 （ ｔ ＝
３ ． ８ ５ ９， Ｐ＝ ０ ． ０ １ ８ ； ｔ ＝ ３ ． ３ ９ １ ， Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ； ｔ ＝１ ４ ． ４ ９ ０ ， Ｐ＜０ ． ０ ５ ） ； Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １ 处 理组 与空 白对照组 ＨＳ Ｃ — Ｔ ６ 细胞 中 Ｓ ｍ ａ ｄ ３ 相 对表达量差异无统计学意义 （ ０ ． ６ ５± ０ ． ０ ５与 ０ ． ６ ４ ４ － ０ ． ０ ５相 比， ｔ ＝ ０ ． ０ ８ ４ ， Ｐ＝ ０ ． ９ ３ ７ ） ，
别设 立空 白 对 照 组 （ 加 入 等 量 磷 酸 盐 缓 冲液 ） 和 Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １处 理 组 （ 加入 终浓度为 ３ Ｏ Ｌ 的
Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １ ） ， 作用 ２ ４ ｈ 后 收集 细胞 培养上清液 ， 提取全 细胞 蛋 白， 另外 收集细胞 爬片 。培养 上清 液 中
－２ ３
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基 础 研 究
胰 岛素样 生 长 因子 结 合 蛋 白相 关 蛋 白 １ 对 肝 星状 细胞 转 化 生 长 因子 １ ３ １ ／ Ｓ ｍ ａ ｄ ３ 信 号通 路 的影 响及 意 义
张 建华 张骞 骞 刘 立新
【 摘要 】 目的 探讨胰岛素样生长 因子结合 蛋 白相关蛋 白 ｌ （ Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １ ） 对肝 星状细胞 转化生 长因子 Ｂ ｌ （ Ｔ Ｇ Ｆ ． Ｂ １ ） ／ Ｓ ｍ ａ ｄ ３ 信号通路的影响及意义 。方法 体外 培养大 鼠肝星状细胞株 Ｈ Ｓ Ｃ — Ｔ ６ ， 分
Ｔ Ｇ Ｆ 一 １ ３ １的表达采用 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ印迹法及 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法检测 ， Ｈ Ｓ Ｃ — Ｔ ６细胞 Ｔ Ｇ Ｆ — Ｂ １的表达采用 免疫细胞 化学 法检测 ； 培养上清液 中 Ｓ ｍ ａ ｄ ３ 、 ｐ － Ｓ ｍ ａ ｄ ２ ／ ３和纤维 连接蛋 白（ Ｆ ｎ ） 的表 达采用 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｍ 印迹法 检测 。空 白对 照组 与 Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １ 处 理组 Ｔ Ｇ Ｆ — Ｂ １ 、 Ｓ ｍａ ｄ ３ 、 ｐ － Ｓ ｍａ ｄ ２ ／ ３ 、 Ｆ ｎ蛋 白表达量 、 ｐ － Ｓ ｍ ａ ｄ ２ ／ ３与 Ｓ ｍ ａ ｄ ３蛋 白相 对表达量 比值 比较采用独立样本 ｔ 检验 。结果 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｍ 印迹法及 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ检测结果 均显示 Ｉ Ｇ Ｆ Ｂ Ｐ ｒ Ｐ １