血涂片红细胞形态
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精品课件
推制适当的血膜
角度大, 速度快, 太厚, 太短
推片不光滑，呈毛刷状
用力不均，呈搓板状
血量过多，无尾
精品课件
玻片油腻，有空泡
1.灰白层涂片法 抗凝血离心，取灰白层涂片。 用于白细胞减少者的白细胞分类和红斑 狼疮细胞(LEC)检查。
2.厚血涂片法 用于疟原虫、微丝蚴的检查
精品课件
血涂片的染色
1.新玻片上有游离碱质，须清洗后使用。 2.用过的载玻片须用肥皂水或乙醇除去 染料和油污。 3.使用时切勿用手触及玻片表面。
精品课件
＊ 手工推片法
薄血涂片法 灰白层涂片法 厚血涂片法
＊ 自动血液涂片法
精品课件
手工薄血推片法
推片
手持玻片推制血膜
用推片从血滴前方接触血滴
吸附血液成一线
精品课件
推完血片，迅速干燥
精品课件
1.用玻璃笔在血膜两端划线。 2.瑞氏染液覆盖血膜，染 0.5～1min。 3.加等量或稍多的缓冲液，混匀，
染5～10min。 4.流水冲去染液，干燥后镜检。
精品课件
正常血膜外观为淡紫红色。 镜下RBC和嗜酸性颗粒染粉红色，嗜碱 性颗粒染紫黑色，中性颗粒染淡紫红 色，细胞核染紫红色。
精品课件
精品课件
红细胞形状异常
1．球形红细胞(spherocyte)：直径小于正常， 厚度增加大于2μm。无中心淡染区。常见于遗 传性球形红细胞增多症（HS）和伴有球形细胞 增多的其他溶血性贫血如AIHA、HDN等。
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球形红细胞
精品课件
红细胞形状异常
异常红细胞形态
红细胞大小异常 红细胞形状异常 血红蛋白充盈度与着色异常 红细胞内出现异常结构 红细胞排列异常 有核红细胞
精品课件
红细胞大小异常
1．小红细胞( microcyte )：直径<6μm。血 片中出现大量的染色过浅的小红细胞，提示血 红蛋白生成障碍，常见于缺铁性贫血（IDA）、 珠蛋白生成障碍性贫血。遗传性球形红细胞增 多症（HS），血红蛋白充盈良好，生理性中心 淡染区消失。
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大红细胞 巨红细胞
精品课件
红细胞大小异常
4．红细胞大小不均(anisocytosis)：指 红细胞之间直径相差一倍以上。见于严重 的增生性贫血的血涂片中。巨幼细胞性贫 血尤为明显，与骨髓造血紊乱有关。
精品课件
红细胞大小不均
精品课件
红细胞大小异常
小红细胞( microcyte ) 大红细胞( macrocyte) 巨红细胞(megalocyte) 红细胞大小不均 (anisocytosis)
推片角度
厚薄适宜，头体尾分明， 细胞分布均匀，边缘整齐， 两边和两端留有一定空隙。
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血滴越大，推片角度越大，速度越快， 血液粘度越高，则血膜越厚。 血滴越小，推片角度越小，速度越慢， 血液粘度越低，则血膜越薄。
如果取血量较少，在推血片时应如何才能使血膜 的厚薄合适？ 对于严重贫血患者，应如何推制血片？
1.血膜正面朝上，干透后再染色。 2.染色时间与染液浓度、室温和细胞多少有关。
3.染色过程中防止蒸发沉淀。
4.冲洗时应以流水冲洗，冲洗时间不能太久。
5.若有染料残渣，可用少量甲醇溶解，并立即 用流水冲洗。
6.复染时应先加缓冲液再加染液，或加染液与 缓冲液的混合液。
精品课件
1．载玻片要清洁。 2．制备良好的血涂片。 3．选择抗凝剂。 4．处理白细胞浓度较低的标本。 5．血细胞比容与涂片关系。 6．新配置染液的处理。 7．染色过深、过浅的处理。
精品课件
小红细胞( microcyte )
精品课件
红细胞大小异常
2．大红细胞( macrocyte)：直径>10μm。 最常见于缺乏叶酸和维生素B12所致的巨幼 细胞性贫血（MA）。也可见于溶血性贫血 （HA）、骨髓增生异常综合症（MDS）。
3．巨红细胞(megalocyte)：直径>15μm。 常见于巨幼细胞性贫血（MA）和骨髓增生 异常综合症（MDS）。
外周血细胞形态学检验
精品课件
1.血涂片的制备：手工推片法 2.血涂片的染色：瑞氏染色法 3.红细胞的形态检查
精品课件
将血标本均匀地涂抹在清洁干燥的载 玻片上，经染色后在显微镜下检查，是血液 细胞形态学检查的基本方法，临床应用广泛， 特别是对于各种贫血及血液病的诊断和鉴别 诊断具有重要价值。
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油镜观：wk.baidu.com红细胞形态。
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正常红细胞形态
双凹圆盘形，淡桔红色，中央 1/3为生理性淡染区，呈正常色素性。红 细胞直径为6.7～7.7μm，平均直径 7.2μm左右，厚约2μm。无核，胞质内无 异常结构。除健康人外，还见于急性失血、 再生障碍性贫血和部分白血病。
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正常红细胞 形态
精品课件
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红细胞形态检查
在贫血或其他血液系统疾病时 红细胞除有数量变化外，往往伴有形态 改变，表现在红细胞大小、形状、染色 性质和内涵物的异常。因此，红细胞形 态检查对贫血的诊断和鉴别诊断有重要 的临床价值。
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制备血涂片 染色 镜检
检查区域：体尾交界处，细胞分布均匀， 红细胞紧密排列但不
重叠低。倍镜：估计细胞分布和染色情况，浏 览全片是否存在异常细胞。
染色的目的是使细胞膜、细胞浆、 胞浆中颗粒及细胞核等主要结构染上特定 的颜色，以便于显微镜下观察与识别。
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一、瑞氏染色法（Wright’s stain）
对胞浆和中性颗粒染色较好，对胞核稍差。
二、吉姆萨染色法（Giemsa’s stain）
对胞浆和中性颗粒染色较差，对胞核和寄 生虫着色较好。
三、瑞氏-吉姆萨复合染色法
取二者之长，染色效果好。
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瑞氏染色法
染料：酸性染料伊红和碱性染料美兰（亚甲蓝） 的复合染料。亚甲蓝氧化为次级染料天
青。 溶剂：甲醇。溶解 + 固定。 磷酸盐缓冲液（PBS）：pH6.4～6.8
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染色原理
1 .血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性物质，与酸性伊红 结合染成粉红色，称为嗜酸性物质。
2 .嗜碱性颗粒和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性美兰 结合，染成紫色或蓝色，称为嗜碱性物质。
3.中性颗粒呈等电点状态与伊红美兰均可结合，染 成紫红色，称为中性物质。
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pH对细胞染色的影响
在酸性环境中染色偏红；在 碱性环境中染色偏蓝。因此要求用磷 酸盐缓冲液，使染色环境维持在 6.4～6.8之间，以达到满意的染色效 果。
推制适当的血膜
角度大, 速度快, 太厚, 太短
推片不光滑，呈毛刷状
用力不均，呈搓板状
血量过多，无尾
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玻片油腻，有空泡
1.灰白层涂片法 抗凝血离心，取灰白层涂片。 用于白细胞减少者的白细胞分类和红斑 狼疮细胞(LEC)检查。
2.厚血涂片法 用于疟原虫、微丝蚴的检查
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血涂片的染色
1.新玻片上有游离碱质，须清洗后使用。 2.用过的载玻片须用肥皂水或乙醇除去 染料和油污。 3.使用时切勿用手触及玻片表面。
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＊ 手工推片法
薄血涂片法 灰白层涂片法 厚血涂片法
＊ 自动血液涂片法
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手工薄血推片法
推片
手持玻片推制血膜
用推片从血滴前方接触血滴
吸附血液成一线
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推完血片，迅速干燥
精品课件
1.用玻璃笔在血膜两端划线。 2.瑞氏染液覆盖血膜，染 0.5～1min。 3.加等量或稍多的缓冲液，混匀，
染5～10min。 4.流水冲去染液，干燥后镜检。
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正常血膜外观为淡紫红色。 镜下RBC和嗜酸性颗粒染粉红色，嗜碱 性颗粒染紫黑色，中性颗粒染淡紫红 色，细胞核染紫红色。
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红细胞形状异常
1．球形红细胞(spherocyte)：直径小于正常， 厚度增加大于2μm。无中心淡染区。常见于遗 传性球形红细胞增多症（HS）和伴有球形细胞 增多的其他溶血性贫血如AIHA、HDN等。
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球形红细胞
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红细胞形状异常
异常红细胞形态
红细胞大小异常 红细胞形状异常 血红蛋白充盈度与着色异常 红细胞内出现异常结构 红细胞排列异常 有核红细胞
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红细胞大小异常
1．小红细胞( microcyte )：直径<6μm。血 片中出现大量的染色过浅的小红细胞，提示血 红蛋白生成障碍，常见于缺铁性贫血（IDA）、 珠蛋白生成障碍性贫血。遗传性球形红细胞增 多症（HS），血红蛋白充盈良好，生理性中心 淡染区消失。
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大红细胞 巨红细胞
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红细胞大小异常
4．红细胞大小不均(anisocytosis)：指 红细胞之间直径相差一倍以上。见于严重 的增生性贫血的血涂片中。巨幼细胞性贫 血尤为明显，与骨髓造血紊乱有关。
精品课件
红细胞大小不均
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红细胞大小异常
小红细胞( microcyte ) 大红细胞( macrocyte) 巨红细胞(megalocyte) 红细胞大小不均 (anisocytosis)
推片角度
厚薄适宜，头体尾分明， 细胞分布均匀，边缘整齐， 两边和两端留有一定空隙。
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血滴越大，推片角度越大，速度越快， 血液粘度越高，则血膜越厚。 血滴越小，推片角度越小，速度越慢， 血液粘度越低，则血膜越薄。
如果取血量较少，在推血片时应如何才能使血膜 的厚薄合适？ 对于严重贫血患者，应如何推制血片？
1.血膜正面朝上，干透后再染色。 2.染色时间与染液浓度、室温和细胞多少有关。
3.染色过程中防止蒸发沉淀。
4.冲洗时应以流水冲洗，冲洗时间不能太久。
5.若有染料残渣，可用少量甲醇溶解，并立即 用流水冲洗。
6.复染时应先加缓冲液再加染液，或加染液与 缓冲液的混合液。
精品课件
1．载玻片要清洁。 2．制备良好的血涂片。 3．选择抗凝剂。 4．处理白细胞浓度较低的标本。 5．血细胞比容与涂片关系。 6．新配置染液的处理。 7．染色过深、过浅的处理。
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小红细胞( microcyte )
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红细胞大小异常
2．大红细胞( macrocyte)：直径>10μm。 最常见于缺乏叶酸和维生素B12所致的巨幼 细胞性贫血（MA）。也可见于溶血性贫血 （HA）、骨髓增生异常综合症（MDS）。
3．巨红细胞(megalocyte)：直径>15μm。 常见于巨幼细胞性贫血（MA）和骨髓增生 异常综合症（MDS）。
外周血细胞形态学检验
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1.血涂片的制备：手工推片法 2.血涂片的染色：瑞氏染色法 3.红细胞的形态检查
精品课件
将血标本均匀地涂抹在清洁干燥的载 玻片上，经染色后在显微镜下检查，是血液 细胞形态学检查的基本方法，临床应用广泛， 特别是对于各种贫血及血液病的诊断和鉴别 诊断具有重要价值。
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油镜观：wk.baidu.com红细胞形态。
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正常红细胞形态
双凹圆盘形，淡桔红色，中央 1/3为生理性淡染区，呈正常色素性。红 细胞直径为6.7～7.7μm，平均直径 7.2μm左右，厚约2μm。无核，胞质内无 异常结构。除健康人外，还见于急性失血、 再生障碍性贫血和部分白血病。
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正常红细胞 形态
精品课件
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红细胞形态检查
在贫血或其他血液系统疾病时 红细胞除有数量变化外，往往伴有形态 改变，表现在红细胞大小、形状、染色 性质和内涵物的异常。因此，红细胞形 态检查对贫血的诊断和鉴别诊断有重要 的临床价值。
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制备血涂片 染色 镜检
检查区域：体尾交界处，细胞分布均匀， 红细胞紧密排列但不
重叠低。倍镜：估计细胞分布和染色情况，浏 览全片是否存在异常细胞。
染色的目的是使细胞膜、细胞浆、 胞浆中颗粒及细胞核等主要结构染上特定 的颜色，以便于显微镜下观察与识别。
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一、瑞氏染色法（Wright’s stain）
对胞浆和中性颗粒染色较好，对胞核稍差。
二、吉姆萨染色法（Giemsa’s stain）
对胞浆和中性颗粒染色较差，对胞核和寄 生虫着色较好。
三、瑞氏-吉姆萨复合染色法
取二者之长，染色效果好。
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瑞氏染色法
染料：酸性染料伊红和碱性染料美兰（亚甲蓝） 的复合染料。亚甲蓝氧化为次级染料天
青。 溶剂：甲醇。溶解 + 固定。 磷酸盐缓冲液（PBS）：pH6.4～6.8
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染色原理
1 .血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性物质，与酸性伊红 结合染成粉红色，称为嗜酸性物质。
2 .嗜碱性颗粒和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性美兰 结合，染成紫色或蓝色，称为嗜碱性物质。
3.中性颗粒呈等电点状态与伊红美兰均可结合，染 成紫红色，称为中性物质。
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pH对细胞染色的影响
在酸性环境中染色偏红；在 碱性环境中染色偏蓝。因此要求用磷 酸盐缓冲液，使染色环境维持在 6.4～6.8之间，以达到满意的染色效 果。