耐酸乳酸菌的筛选
乳酸菌菌种的培养筛选方法
乳酸菌菌种的培养筛选方法
简介
本文档介绍了乳酸菌菌种的培养筛选方法。
乳酸菌是一种有益菌，常被应用于食品工业和医药领域。
通过培养筛选方法，可以有效筛选出优质的乳酸菌菌种，以满足特定需求。
培养基准备
1. 选择适合乳酸菌生长的培养基，如MRS培养基。
2. 按照培养基的使用说明准备培养基溶液。
3. 灭菌培养基溶液，可使用高压灭菌器或高温灭菌法。
菌种接种
1. 从已有的乳酸菌菌种中选择适合的菌株。
2. 取一定量的菌种，注意保持无菌操作。
3. 将菌种转移到培养基中，可采用无菌环或吸管接种法。
4. 将接种好的培养基培养物置于恒温培养箱中，保持适宜的温度和氧气条件。
筛选方法
1. pH值筛选：选择适宜pH范围的培养基进行培养，通常在
pH 4-6之间。
2. 温度筛选：通过调整培养温度来筛选适应不同温度的菌种。
3. 抗性筛选：将菌种暴露在一定浓度的抗生素中，筛选出对抗
生素具有抗性的菌株。
4. 发酵性筛选：观察菌种在培养基中发酵的能力，以选择产酸
产气能力强的菌株。
筛选结果评估
1. 观察培养基的菌落形态，如形状、颜色等特征。
2. 测定菌株的生长速度和产酸量等。
3. 利用分子生物学方法进行菌株鉴定，如PCR、16S rRNA测
序等。
结论
通过以上培养筛选方法，可以高效地筛选出优质的乳酸菌菌种。
根据特定需求，可以选择适应不同环境和具有良好生产特性的菌株，为食品工业和医药领域的应用提供基础支持。
以上为乳酸菌菌种的培养筛选方法的简要介绍，希望对您有所帮助。
产酸、耐酸乳酸菌的分离鉴定及益生特性
产酸、耐酸乳酸菌的分离鉴定及益生特性林龙镇;邹卫玲;李安章;朱红惠【摘要】[Objective]To isolate, screen and evaluate Lactobacillus strains with excellent acid-producing ability, and offer materials for application of Lactobacillus in feed industry.[Method]Using acid flavor food as samples, we isolated and screened Lactobacillus strains, initially according to the size of calcium dissolving zone and subsequently according to acid tolerance. The acid-producing abilities, growth characteristics, low-pH and bile salt tolerance, and antibacterial activities of Lactobacillus strains screened out were further studied. [Result]Ten Lactobacillus strains capable of growing at pH 3.0 were obtained. Strain SC3A and DJ3 were identified as L. pentosus, and strain SC15, SC16, DJ9B, DJ10C, SC8, DJ8A, DJ8B and DJ9A were identified as L. fermentum. The acid-producing abilities, fermentation growth rate and antibacterial activities of L. pentosus strains DJ3 and SC3A were significantly superior to those of the L. fermentum stains. The L. fermentum strains DJ8A and DJ9B showed higher tolerance to acid environment and bile salt.[Conclusion]Ten Lactobacillus strains obtained from acid flavor food have strong acid-producing ability, acid tolerance and antibacterial activity, and have application potential in food and feed industries.%[目的]分离筛选高效产酸的乳酸菌Lactobacillus spp.,并进行功能评价,为乳酸菌在饲料行业的应用提供物质基础.[方法]以酸性风味食品为样品来源,以溶钙圈大小为指标进行初筛,以耐酸能力为指标进行复筛,并进一步研究了筛选得到的乳酸菌的产酸性能、生长特性、耐酸、耐胆盐以及抑制病原菌的能力.[结果]获得了10株可在pH 3.0生长的乳酸菌.其中,菌株SC3A和DJ3被鉴定为戊糖乳杆菌L.pentosus,菌株SC15、SC16、DJ9B、DJ10C、SC8、DJ8A、DJ8B和DJ9A为发酵乳杆菌L.fermentum.戊糖乳杆菌DJ3和SC3A的产酸能力、发酵生长速率和抑制病原菌的能力显著优于发酵乳杆菌.而发酵乳杆菌DJ8A和DJ9B的耐酸和耐胆盐能力较强.[结论]从酸性风味食品分离得到了10株具有较强的产酸、耐酸和抑菌能力的乳酸菌,在食品和饲料工业中具有应用潜力.【期刊名称】《华南农业大学学报》【年(卷),期】2018(039)002【总页数】8页(P95-102)【关键词】乳酸菌;分离鉴定;产酸;抑菌活性;耐酸;耐胆盐【作者】林龙镇;邹卫玲;李安章;朱红惠【作者单位】广东省微生物研究所/省部共建华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室,广东广州510070;广东省微生物研究所/省部共建华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室,广东广州 510070;广东省微生物研究所/省部共建华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室,广东广州 510070;广东省微生物研究所/省部共建华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室,广东广州 510070【正文语种】中文【中图分类】S816.3乳酸菌Lactobacillus spp.是一类能发酵碳水化合物产生乳酸的革兰阳性、无芽孢细菌的统称[1]。
《乳酸菌筛选及其对苜蓿青贮发酵性能的影响》范文
《乳酸菌筛选及其对苜蓿青贮发酵性能的影响》篇一一、引言随着现代畜牧业的发展，青贮饲料在畜牧业中的地位日益重要。
苜蓿作为青贮饲料的主要原料之一，其发酵过程对饲料的质量和营养价值具有重要影响。
乳酸菌作为青贮发酵过程中的主要微生物，其种类和数量直接影响着发酵的效果。
因此，筛选出优良的乳酸菌株并研究其对苜蓿青贮发酵性能的影响，对于提高青贮饲料的质量和营养价值具有重要意义。
二、乳酸菌的筛选1. 筛选方法乳酸菌的筛选主要通过从自然环境中的样品中分离、纯化、鉴定等步骤进行。
首先，从苜蓿青贮样品中采集乳酸菌，经过一系列的分离纯化操作，得到纯菌株。
然后，通过生理生化试验和分子生物学技术对菌株进行鉴定，确定其种类和特性。
2. 筛选标准在筛选过程中，主要考虑乳酸菌的产酸能力、耐酸能力、生长速度等指标。
产酸能力强的乳酸菌能够快速降低青贮环境的pH 值，抑制其他有害微生物的生长；耐酸能力强的乳酸菌能够在低pH值环境下生存并继续发酵；生长速度快的乳酸菌能够更快地占领青贮环境，抑制其他杂菌的生长。
三、乳酸菌对苜蓿青贮发酵性能的影响1. 发酵过程中的变化添加优良乳酸菌的苜蓿青贮在发酵过程中，其pH值会迅速降低，乳酸含量增加，同时其他有害微生物的数量会减少。
这表明优良乳酸菌能够有效地促进苜蓿青贮的发酵过程，提高其发酵效果。
2. 对饲料质量的影响优良乳酸菌的添加可以显著提高苜蓿青贮的饲用价值。
乳酸菌的发酵作用能够降低饲料中的抗营养因素，提高饲料中蛋白质的消化率；同时，乳酸菌还能够产生一些有益的物质，如维生素等，进一步提高了饲料的质量和营养价值。
四、结论通过对乳酸菌的筛选及其对苜蓿青贮发酵性能的影响的研究，我们可以得出以下结论：1. 筛选出产酸能力强、耐酸能力强、生长速度快的乳酸菌株对于提高苜蓿青贮的发酵效果具有重要意义。
2. 优良乳酸菌的添加可以显著改善苜蓿青贮的发酵过程，降低pH值，增加乳酸含量，减少有害微生物的数量。
3. 优良乳酸菌的添加可以提高苜蓿青贮的饲用价值，降低抗营养因素，提高蛋白质消化率，产生有益物质，如维生素等。
耐酸乳酸菌的筛选及初步鉴定云月英
事食品微生物研究。Tel： （ 0472） 5954358； E － mail： yunyueying1999 @ 163
— 256 —
Байду номын сангаас
江苏农业科学 2013 年第 41 卷第 1 期
云月英，王文龙，王雅娟． 耐酸乳酸菌的筛选及初步鉴定［J］． 江苏农业科学，2013，41（ 1） ： 256 － 259．
耐酸乳酸菌的筛选及初步鉴定
云月英1，2，3 ，王文龙1，2，3 ，王雅娟1
（ 1． 内蒙古科技大学数理与生物工程学院，内蒙古包头 014010； 2． 内蒙古科技大学数理与生物工程学院生物工程与技术研究所，内蒙古包头 014010；
云月英等： 耐酸乳酸菌的筛选及初步鉴定
— 257 —
MRS 琼脂培养基上，置 37 ℃ 条件下培养 48 ～ 72 h。如此重 复多次直至长出的菌落形态基本一致，仔细观察记录菌落形 态，挑取单个菌落于 MRS 液体培养基中培养 24 h 后，涂片镜 检，观察并记录菌体的形态特征。若菌体形态不一致，继续划 线培养，直至挑选的菌落经镜检后菌体形态一致，同时进行过 氧化氢酶试验。取新鲜培养物进行革兰氏染色，在光学显微 镜下观察，挑选视野清晰、形态典型的菌体进行拍照。将过氧 化氢酶试验阴性的杆状、球状或链球状革兰氏阳性细菌暂定 为乳酸菌，并进一步纯化培养保存。 1． 2． 4 乳酸菌分离株的保存［3］ 将分离到的疑似乳酸菌的 菌株，用 MRS 液体培养基在 37 ℃ 、24 h 条件下传代培养 3 次 后，离心（ 4 000 r / min、10 min） 沉淀菌体，弃上清液，加入约 5 mL 的灭菌生理盐水，振荡混匀，离心（ 4 000 r / min、10 min） 洗涤菌体（ 23 次） 。弃掉上清液，在洗涤收集的菌体中，加入 已灭菌的细菌细胞保护液（ 脱脂乳 10 g、谷氨酸钠 0． 1 g，溶解 于 90 mL 蒸馏水中，121 ℃ 、7 min 条件下骤冷） 1 mL，充分振 荡混匀，将加有保护剂的菌液，用移液枪移取后置于 1 mL 无 菌冻存管中，置 － 85 ℃ 冻结保存。也可在 MRS 液体培养基 中活化 2 代后，划线接种于 MRS 固体斜面上，37 ℃ 条件下培 养 24 h，生长良好后，置 4 ℃ 冰箱，短期保存。 1． 2． 5 乳酸菌形态学观察 将乳酸菌分离株的供试菌液划 线接种于 MRS 固体培养基上，37 ℃ 恒温培养 24 ～ 48 h，用 10 倍放大镜观察并记录菌落特征。同时将供试菌液进行革兰氏 染色，在显微镜下观察并记录菌体的形态特征。 1． 2． 6 乳 酸 菌 的 产 乳 酸 定 性 试 验［2］ 将 筛 选 得 到 的 纯 菌 株，经增殖和继代活化后，在无菌操作条件下按 4% 的接种量 接入装有约 5 mL 乳 酸 菌 培 养 液 的 试 管 中，35 ℃ 静 置 培 养 24 h。在上述含菌体的发酵液中加入 1 mL 10% H2 SO4 后再 加入 1 mL 2% KMnO4 ，把事先在含氨的 AgNO3 溶液中浸泡的 滤纸条搭在试管上，微火加热至沸，滤纸变黑则说明有其乳酸 存在。每株菌做 2 个平行试验。 1． 2． 7 乳酸菌分离株的活化及供试菌液的制备［3］ 将已纯 化冷冻保存的菌种接种于脱脂乳培养基中，置恒温培养箱中 培养 24 h，如此传代 2 次后，划线于 MRS 固体培养基上，恒温 培养 24 ～ 48 h。挑取单个菌落涂片、固定、革兰氏染色镜检观 察确认为菌株纯培养物后，挑取剩余部分接种于液体 MRS 培 养基中，恒温培养 24 h，反复 3 次后，将最后 1 次液体培养物
乳酸菌菌种的分离筛选方法解读
乳酸菌菌种的分离筛选方法解读第一篇：乳酸菌菌种的分离筛选方法解读乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。
为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。
营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。
在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。
通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。
乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。
当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类时，SL培养基常用作为选择性培养基。
对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球菌有TYC培养基、MS培养基。
M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。
嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。
其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无鞭毛。
粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。
乳酸片球菌细胞呈球状，直径0.6~1.0μm，在直角两个平面交替形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。
革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。
在MRS培养基上菌落小，呈白色。
沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。
乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。
分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。
培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据，通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。
乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸，维生素及微氧，一般菌落比较小。
分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质，均具有促进生长作用。
也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长，对乳酸菌无害。
一.筛选方法： 1.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。
其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH。
耐酸耐胆盐益生乳酸菌的筛选与鉴定
耐酸耐胆盐益生乳酸菌的筛选与鉴定吕源玲【摘要】为了筛选出人源性的耐酸、耐胆盐的益生菌,利用含胆盐(0.2%)的5种选择性培养基(TPY、BHI、MRS、SL、乳酸杆菌选择性琼脂培养基),以溴甲酚紫为酸性指示剂,从婴儿粪便中初步筛选出42株耐胆盐的乳酸菌.根据菌株在pH5.0,4.0,3.5的MRS液体培养基中培养时OD值的变化情况,筛选出3株具有较好酸耐受性的菌株.然后通过平板菌落计数方法测定筛选出的3株菌在pH 3.0条件下0~3 h存活率的变化情况,筛选出对酸和胆盐耐受能力最强且最稳定的菌株经16S rDNA分子生物学鉴定为Lactobacillus plantarum.该菌能够作为潜在的益生菌菌株用于后期深入地挖掘其益生功能.%In order to screen human probiotics with the acid and bile resistant abilities, infant stool diluents were spread on five different selective ager plates including TPY, BHI, MRS and SL in this study.42 strains of lactic acid bacteria with certain bile-tolerance were isolated by selective ager media for lactobacilli, supplemented with bile salt (0.2%) and bromcresol purple as an acid indicator.3 strains of lactic acid bacteria with high acid tolerance were further selected from 42 strainsaccording to biomass of their cultured in the MRS liquid medium with pH 5.0, pH 4.0 and pH 3.5 respectively.Then the viability of these 3 strains in MRS medium with pH 3.0 was measured by plate colony count technique, resulting in one of them with the highest acid-and bile salt-tolerance.Then this strain was subsequently identified using 16S rRNA-based molecular biological approaches.The strain was molecularlyidentified to ctobacillus plantarum.The strain could be used as a potential probiotic strain for late digging its probiotic function.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2017(033)006【总页数】4页(P42-45)【关键词】乳酸菌;耐胆盐;耐酸;筛选;鉴定【作者】吕源玲【作者单位】江南大学食品学院, 江苏无锡 214122【正文语种】中文作为人和动物肠道的正常菌群的益生乳酸菌，具有许多益生功效[1]。
乳酸菌菌种的分离筛选原理
乳酸菌菌种的分离筛选原理乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的益生菌，广泛应用于食品、饲料、医药等领域。
乳酸菌菌种的分离筛选是乳酸菌应用研究中的重要一环，其目的是从大量的混合菌群中筛选出具有优良特性的菌株。
乳酸菌菌种的分离筛选原理主要包括以下几个方面：1. 选择合适的培养基：乳酸菌菌种对营养要求较高，因此选择适宜的培养基是分离筛选的首要步骤。
常用的培养基有MRS培养基、DC培养基等，它们含有适宜乳酸菌生长的营养成分，能提供所需能量和营养物质。
2. 适宜的培养条件：乳酸菌对培养环境的温度、pH、氧气和二氧化碳等条件有一定要求。
通常情况下，乳酸菌分离筛选需要在适宜的温度（一般为30-40）下进行，pH值保持在4.5-7.0之间，氧气和二氧化碳含量适中。
3. 分离方法：乳酸菌菌种的分离常采用传统的分离培养技术，如层析法、稀释平板法、摇瓶培养法等。
其中，层析法是一种常用的快速分离方法，通过将混合菌群在筛选培养基上涂抹或刺激，使不同菌株在筛选培养基上形成分离的菌落。
4. 鉴定鉴别：乳酸菌菌种的筛选与鉴定是不可分割的一步，只有确定菌株的种属和特性才能真正确认其乳酸菌的菌种类型。
目前，常用的鉴定方法包括形态学观察、生理和生化特性检测、分子生物学方法（如PCR技术、16S rDNA序列分析）等。
在乳酸菌菌种的分离筛选过程中，还需要注意以下几个问题：1. 选择样品：样品的选择对于乳酸菌菌种的分离筛选至关重要。
通常情况下，从乳制品、肠道、土壤等环境中寻找潜在的乳酸菌菌种，可以提高分离到优良菌株的几率。
2. 优化培养条件：对于特殊的乳酸菌菌种，可能需要优化培养条件，如调整温度、添加特定的营养成分等，以促进其生长和繁殖。
3. 评价筛选结果：乳酸菌菌种的分离筛选结果需要综合考虑其特性和应用价值。
如菌株的酸奶生产能力、耐酸碱能力、抗菌能力、抗氧化能力等。
总结起来，乳酸菌菌种的分离筛选原理主要包括选择合适的培养基和培养条件、采用适当的分离方法和鉴定鉴别技术。
乳酸菌的分离与筛选具体实验流程
乳酸菌的分离与筛选具体实验流程1. 引言1.1 背景介绍乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，它们能够以乳酸为代谢产物进行无氧发酵，并且在食品工业、农业和医学领域具有重要的应用价值。
乳酸菌不仅能够促进食品品质的改善和保鲜，还对人体健康具有积极影响。
然而，目前市面上存在许多商业化的乳酸菌制剂，其有效成分及效果并不尽相同。
因此，研究和筛选出优质活性的乳酸菌种类，具有重要意义和广阔前景。
1.2 研究意义本研究旨在通过分离与筛选方法得到高活性的乳酸菌。
通过该研究可以加深我们对乳酸菌及其作用机制的理解，并为特定领域如食品工业、农业等提供先进的技术支持和解决方案。
此外，筛选出具有优良特性的乳酸菌株也将为开发新型功能性食品、生物农药等领域的产品提供重要支持。
因此，本研究对于推动食品工业、农业发展具有积极意义。
1.3 实验目的本实验主要目的如下：- 收集和处理样品：收集富含乳酸菌的样品，并经过适当处理以提高分离效果。
- 选择与制备分离培养基：根据乳酸菌的特性选择适合的培养基并进行制备。
- 设定分离培养条件：通过调控温度、pH值等参数，确定适宜的乳酸菌分离培养条件。
- 鉴定活性乳酸菌指标：确定评价乳酸菌活性和质量的指标，并进行相关试验和检测。
- 设计与实施筛选试验：根据所选指标设计筛选试验，并在实验中采用相应方法进行实施。
- 可行性评估与结果分析：对筛选试验结果进行评估和分析，并总结可行性及相关优化建议。
通过以上实验流程，我们旨在深入了解乳酸菌的特点及其在不同领域中应用潜力，并为进一步研究和开发具有市场竞争力的乳酸菌产品提供理论和实践基础。
2. 乳酸菌的分离方法2.1 样品收集与处理在乳酸菌的分离研究中，样品的选择和处理十分重要。
我们可以选择不同来源的样品，如发酵食品、生态环境等。
收集样品后，需要进行适当的处理以消除非目标微生物对于乳酸菌生长和筛选的干扰。
常见的样品处理方法包括冷藏、过滤、稀释等。
2.2 分离培养基选择与制备为了促进乳酸菌的分离和生长，在实验中需要选择适宜的分离培养基。
乳酸菌的筛选与鉴定流程
乳酸菌的筛选与鉴定流程1.材料首先要确定目标，即所筛选的乳酸菌来自哪里，例如想要筛选一株果蔬发酵乳酸菌，那我们就得找一个产区或者其他地方自然发酵果蔬的样品。
1.1培养基查找相关文献，菌种生化鉴定用培养基建议查看文献：工业微生物实验手册MRS培养基：牛肉膏10 g/L，蛋白胨10 g/L，吐温801g/L，葡萄糖50 g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，柠檬酸二铵2 g/L，溴甲基酚紫0.4 g/L，酵母提取物5 g/L，琼脂15～20 g/L，pH 6.3～6.7，121 ℃湿热灭菌30 min。
（PS：若自己嫌麻烦，可买现成的MRS培养基）初筛培养基：在MRS分离培养基的基础上，添加0.5%碳酸钙，乳酸调至PH2.0.（加碳酸钙是为了能更好的挑出优势菌，乳酸调至PH2.0也是同样道理）如图：若是乳酸菌菌落旁会有清晰可见的透明圈，这是由于乳酸与碳酸钙反应了。
高盐复筛培养基∶在MRS分离培养基的基础上，添加10%氯化钠和0.5%碳酸钙。
高糖复筛培养基∶在MRS分离培养基的基础上将葡萄糖质量分数提高到30%，添加0.5%碳酸钙。
明胶培养基∶蛋白胨25 g/L，牛肉膏7.5 g/L，氯化钠5g/L，明胶100 g/L，pH7.0～7.2，121∶湿热灭菌15 min。
果蔬发酵培养基∶将苹果、胡萝卜、西瓜、西红柿等水果、蔬菜清洗去皮切分后分别榨汁除渣制得发酵果酱，然后按1∶1∶1∶1比例混合经巴氏灭菌后4 ∶冷藏。
按照混合果蔬汁33.3%、葡萄糖5%、蔗糖5%、氯化钙0.5%、磷酸氢二钠0.05%、磷酸二氢钠0.05%、硫酸镁0.03%、柠檬酸0.1%的配比配制，除果蔬和柠檬酸外其余成分于115 ∶湿热灭菌15 min。
2.方法2.1乳酸菌的分离筛选取产区自然发酵苹果原浆，用0.9%灭菌生理盐水进行10 倍梯度稀释后，吸取适宜稀释度溶液涂布至MRS分离培养基中，37 ∶恒温厌氧培养24h，挑取菌落黄色范围大并具有乳酸菌典型特征的单菌落，进行革兰氏染色观察菌体形态。
《抗真菌特性乳酸菌的筛选鉴定及在酸奶防腐中的应用》范文
《抗真菌特性乳酸菌的筛选鉴定及在酸奶防腐中的应用》篇一一、引言近年来，随着人们对食品安全的关注度不断提高，寻找具有天然防腐特性的食品添加剂已成为食品工业研究的热点。
乳酸菌作为一种常见的益生菌，除了具有调节肠道菌群平衡、促进消化等作用外，还具有显著的抗真菌特性。
本文旨在筛选具有抗真菌特性的乳酸菌，对其进行鉴定，并探讨其在酸奶防腐中的应用。
二、材料与方法1. 材料（1）样品来源：从不同发酵食品中采集乳酸菌样品。
（2）培养基：MRS培养基、抗真菌培养基等。
（3）实验仪器：恒温摇床、显微镜、PCR仪等。
2. 方法（1）乳酸菌的分离与纯化：采用梯度稀释法分离乳酸菌，并利用划线法进行纯化。
（2）抗真菌特性筛选：将筛选出的乳酸菌与常见真菌进行共培养，观察其抗真菌效果。
（3）乳酸菌鉴定：利用分子生物学技术，如16S rRNA基因序列分析等，对筛选出的乳酸菌进行鉴定。
（4）酸奶制备及防腐实验：将鉴定后的乳酸菌添加到酸奶中，观察其防腐效果。
三、实验结果1. 抗真菌特性乳酸菌的筛选与鉴定通过共培养法，我们从样品中筛选出具有抗真菌特性的乳酸菌。
经过分子生物学鉴定，确定其种类及特性。
结果表明，筛选出的乳酸菌对多种常见真菌具有显著的抑制作用。
2. 酸奶制备及防腐实验将鉴定后的乳酸菌添加到酸奶中，观察其防腐效果。
实验结果表明，添加了抗真菌特性乳酸菌的酸奶在储存过程中，其菌落总数和霉菌污染率均显著低于未添加乳酸菌的对照组。
这说明抗真菌特性乳酸菌在酸奶中具有良好的防腐效果。
四、讨论1. 抗真菌特性乳酸菌的筛选与鉴定本研究通过共培养法成功筛选出具有抗真菌特性的乳酸菌，并利用分子生物学技术进行了鉴定。
这为进一步研究乳酸菌的抗真菌机制及其应用提供了基础。
此外，这些抗真菌特性乳酸菌的发现也为开发新型天然防腐剂提供了新的思路。
2. 酸奶防腐应用将抗真菌特性乳酸菌添加到酸奶中，可以有效降低酸奶在储存过程中的菌落总数和霉菌污染率，提高酸奶的品质和安全性。
食品加工中乳酸菌的筛选与应用
食品加工中乳酸菌的筛选与应用食品加工是人们日常生活中不可或缺的一部分。
随着人们对食品质量和健康的关注度不断提高，乳酸菌作为一种有益微生物备受关注。
乳酸菌的筛选与应用对于食品加工行业来说具有重要意义，下面我们来了解一下乳酸菌筛选的方法以及其在食品加工中的应用。
一、乳酸菌的筛选方法乳酸菌是一类常见的益生菌，具有抗菌、抗肿瘤、降血脂等多种功能。
在食品加工中，需要选用菌株进行乳制品、酸奶、发酵蔬菜等食品的制作，因此，乳酸菌的筛选非常重要。
目前，常用的乳酸菌筛选方法主要有以下几种。
首先是酸奶乳酸菌的筛选。
酸奶是一种常见的乳制品，乳酸菌在其中起到发酵作用。
筛选酸奶乳酸菌主要依靠其形态特征和代谢产物。
乳酸菌通常呈链状、球状等形态，也会产生乳酸和醋酸。
通过观察菌落形态和酸度的变化，可以初步确定乳酸菌的种类。
其次是发酵蔬菜中的乳酸菌筛选。
发酵蔬菜是另外一种常见的食品，其中的乳酸菌对保持蔬菜的新鲜度和产生特殊的风味有着重要作用。
筛选发酵蔬菜中的乳酸菌主要依靠发酵过程中的酸度和气味变化。
乳酸菌可以产生乳酸和一些挥发性化合物，通过观察酸度的变化和气味的特殊性，可以初步确定乳酸菌的种类。
最后是基因分析法。
随着科技的不断进步，乳酸菌的筛选越来越多地采用基因分析法。
基因分析法通过对乳酸菌的基因组进行测序和分析，可以准确地确定其物种和亲缘关系。
这种方法不仅可以快速准确地筛选乳酸菌，还可以为乳酸菌的进一步研究提供数据支持。
二、乳酸菌在食品加工中的应用乳酸菌在食品加工中具有广泛的应用价值。
首先是酸奶制作。
酸奶是一种受人们喜爱的乳制品，其中含有丰富的乳酸菌。
乳酸菌能够将乳糖转化为乳酸，降低酸奶的pH值，抑制有害菌的生长，同时还赋予酸奶独特的口感和风味。
其次是乳制品的保鲜。
乳酸菌产生的乳酸具有抗菌作用，可以抑制一些有害菌和腐败菌的生长，延长乳制品的保质期。
乳酸菌还可以产生一些挥发性化合物，赋予乳制品特殊的风味和香味。
此外，乳酸菌还可以用于发酵蔬菜的制作。
臭豆腐乳酸菌多样性及耐酸乳酸菌的筛选分离
Ｉ Ｏ Ｏ
１＿ ． ３耐酸 能力检测 ３
取０ ｍ 菌液 接种到 １ｍＬＰ Ｙ Ｈ ３０ ． Ｌ ２ ０ Ｔ Ｇ ｐ ．的液体培 养
基 ，７ ３ ℃培养６ ， ｈ 于波长６ ０ｍ处测定其０ ０ｎ Ｄ值。 Ｐ ＹＧ 设 Ｔ 液
下２ 便会变质的主要原 ａ ｄ ｅａ Ｌ ） ＡＢ 是一类能在可利用 的碳水化合物中发酵产 生大量乳
８ 份传 统臭豆 腐样 品分别从 南京 、 江、 镇 苏州 、 南通 、
云南 、 绍兴等地 的菜场和超市采集； 细菌微量生化反应 管：
腐特有的香味 ， 高了大 豆蛋 白的消化率 ， 能产 生许多 提 并 降血压肽等 ， 具有一定的降血压等生理活性【 ３ ］ 。
臭豆腐的制作多 以师傅带徒弟、 家庭作坊生产继承下 来， 未形成成熟工艺 ， 更不用 说对 微生物学特性研 究。 目 前， 国臭豆腐 的制作主 要采用“ 口发酵 ” 我 敞 的方式 ， 即利 用环境中存在的微生物进行发酵， 然而这种方式使得臭 豆 腐质量很难控制， 况且这种制作臭豆腐的方式发酵周期长， 易受到杂菌的污 染 ， 微生 物 的大量 繁殖 是臭 豆腐在 常温
物， 如果加 以分离利用， 将具有十分重要的意义。因此， 对 臭豆腐乳酸菌多样性进行分析 ， 并筛选优 良性状乳酸菌， 用 于臭豆腐 的工业化 生产 ， 既可提 高食 品安全性 ， 又可缩 短
发酵周期 。 １实验材料 与方法
１ ． 料 １材
腐乳， 都是很受人们欢迎的小吃。在我国的不 同地区 ， 臭豆 腐的制作 方法和食用方式均存在差异［ ２ ］ 。现代研 究结果表 明， 臭豆腐发酵过 程中蛋 白质分解成氨基酸等 ， 形成 臭豆
耐酸乳酸菌的筛选
6 过氧化氢酶( 接触酶) 反应.将3% 的过氧化氢 滴于涂有菌苔的载玻片上,静置1~ 3 min, 观察是 否有气泡产生. 7菌种保存.目标菌株纯化后, 划线于MRS 固体 斜面培养基上, 于4 .c下保存.
2011-11-3
7
主要参考文献
1苟兴华, 王艳文, 李 翔, 刘达玉, 王 卫等耐酸乳酸菌的筛选及初步鉴定 [ A]，成都大学生物产业学院, 四川成都 2010 02- 0095- 03 2杨郁 , 张丽靖 , 天知诚吾，耐酸性乳酸菌的筛选及应用的初步研究[ B]， 浙江大学宁波理工学院生化分院, 浙江宁波0528—9017( 2006) 3柏建玲，吴清平，张菊梅，莫树平，胡文杰，胡事君，耐胃液乳酸菌的 筛选，鉴定与驯化。[ A]，广东省微生物研究所，广东省菌种保藏与 应用重点实验室，广东省微生物应用新技术公共实验室，东莞市农业 科学研究中心，2010 0528—9017 4凌代文，东秀珠. 乳酸细菌分类鉴定及实验方法[M]. 中国轻工业出版社， 1999: 6-15. 5林 谦，马文文，酸菜中乳酸菌的筛选与初步鉴定[A].玉林师范学院 化 学与生物系 助教 博士，广西 玉林 1004-4671（2010）05-0084-03
2011-11-3 5
1. 耐酸乳酸菌的初步分离 .取汾酒大曲液1 mL 以10 倍递增稀释方法( 1 份泡菜汁, 9 份无菌水, 再 取1 份第1 支管中溶液, 加9 份无菌水, 依次类推) 将其稀释, 然后分别 取第4~ 6 支试管稀释液1 mL, 倾注于pH 值为3. 5 和pH 为3. 0 的 MRS 液体培养基上, 放置于30 .c恒温培养箱中培养48 h. 2 耐酸乳酸菌初步分离后的纯化. 用接种环以无菌操作方式挑取自然发酵泡菜稀释液, 将挑取有样品的接 种环在MRS 固体培养基上做连续划线, 划线完毕后, 盖上培养皿盖, 倒置于温室中培养. 3 耐酸乳酸菌的进一步分离. 分别取第4~ 6 支试管稀释液1 mL, 倾注于pH值为3. 3 的MRS 液体培养 基上, 放置于30 e 恒温培养箱里培养48 h. 4 耐酸乳酸菌的进一步纯化. 耐酸乳酸菌的进一步纯化步骤按1. 2. 2 项下步骤进行. 5 细胞染色及形态鉴定. 在菌落形态方面, 观察分离培养基平板上菌落的形态( 形状、色泽、 大小等) ; 在细胞形态方面, 将所分离的菌株进行革兰氏染色, 在显微 镜下观察菌体形态.
乳酸菌的初步筛选2
乳酸菌的初步筛选
一般情况下，我们筛选的菌种，在通过胃的酸性环境时，往往被破坏殆尽，所以活菌必须要有超强的耐酸耐胆盐能力，才能顺利通过胃肠屏障，安全抵达肠道。
这也是我们做这个实验的意义。
1.酸性环境和胆盐耐受实验
1.1培养基的成分及配制方法
（1）不同pH值的MRS培养基：称取MRS肉汤培养基粉末48.0 g，加蒸馏水定容至1000 mL，分装于5个锥形瓶中，用2 M HCl调节pH分别至2.5、3.5、4.5、6.5，115℃高压蒸汽灭菌30 min；
（2）不同胆盐浓度的MRS培养基：称取MRS肉汤培养基粉末9.6 g，加蒸馏水定容至400 mL，分装，分别向分装培养基中加入0、0.15、0.30、0.45 g的猪胆盐，使MRS液体培养基中的胆盐终浓度为0%、0.15%、0.30%、0.45%，115℃高压蒸汽灭菌30 min；
1.2耐酸能力：
（1）取已完全活化待测菌株，按1%的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃厌氧培养过夜；（2）加入不同pH（3.0，3.5，4.0，5.0，6.5）的MRS液体培养基中，于37℃厌氧培养24 h；（3）于酶标仪处，测其OD600值，并记录。
植物乳杆菌体外耐酸能力；与0 h相比，*** p<0.001。
1.3耐胆盐能力：
（1）取已完全活化待测菌株，按1%的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃厌氧培养过夜；（2）加入不同胆盐浓度（0，0.15%，0.30%，0.45%（w/v））的MRS液体培养基中，于37℃厌氧培养24 h；（3）于酶标仪处，测其OD600值，并记录。
植物乳杆菌体外耐胆盐能力；与0 h相比** p<0.01，*** p<0.001。
发酵食品中乳酸菌的功能鉴定与筛选
发酵食品中乳酸菌的功能鉴定与筛选在我们的日常生活中，发酵食品是不可或缺的一部分。
无论是酸奶、酸菜还是啤酒，它们都是通过乳酸菌的发酵作用而产生的。
但是，我们知道乳酸菌不仅仅只有发酵的功能，它还具备着许多其他的益处。
因此，对于发酵食品中乳酸菌的功能鉴定与筛选，具有重要的意义。
功能鉴定是指通过实验和测试，了解乳酸菌在食品中的具体功能和效果。
首先，鉴定乳酸菌的抗菌能力是一项重要的功能。
通过抑制其他有害菌的生长，乳酸菌能够保持食品的卫生安全。
其次，乳酸菌的产酸能力也是功能鉴定的重点之一。
乳酸的产生会使食物呈现出酸性，这不仅有助于保持食品的新鲜度，还能抑制有害菌的生长。
最后，功能鉴定还包括乳酸菌的抗氧化能力、调节肠道菌群平衡等。
当我们完成了乳酸菌的功能鉴定后，接下来就需要进行筛选，以选出优质的乳酸菌菌种。
筛选的方法有很多种，其中最常用的是理化指标法和生物学指标法。
理化指标法主要是通过测定乳酸菌产酸、产气、耐酸和耐热等性能来筛选合适的菌株。
这种方法能够对乳酸菌的基本性质进行初步评估，并快速进行筛选。
而生物学指标法则是通过检测乳酸菌对人体健康的影响来筛选菌种。
例如，观察乳酸菌对肠道菌群平衡的调节效果、对免疫系统的影响等。
这些生物学指标可以更好地衡量乳酸菌菌种的功能和效果。
在功能鉴定和筛选乳酸菌菌种的过程中，我们也需要注意一些问题。
首先，在筛选乳酸菌时，要考虑到乳酸菌的耐受能力。
有一些菌株在强酸或高温条件下表现出较强的耐受能力，这对于发酵食品的质量和储存稳定性都是至关重要的。
其次，在饮食习惯和健康需求方面，也需要进行相应的筛选。
不同的人群对于乳酸菌的需求和反应可能有所不同，因此要选择适合的乳酸菌菌种。
发酵食品中乳酸菌的功能鉴定与筛选，是一个需要科学、精确和细致的过程。
它涉及到食品的质量和安全问题，也关系到人们的健康和生活质量。
因此，在进行功能鉴定和筛选时，我们需要综合考虑多个因素，如抗菌能力、产酸能力、抗氧化能力、调节肠道菌群平衡等。
耐酸乳酸菌的筛选及初步鉴定
２ 结 果 与分 析
２ １ 耐 酸乳酸 菌初步 分 离纯化 后 结果 ．
用接种环以无菌操作方式挑取 自然发酵泡菜稀
释液 ， 将挑取有样品的接种环在 Ｍ Ｓ固体培养基上 Ｒ
６ ００ ； ．肉类加 工 四川省重 点实验 室 ，四川 成都 １ １６ ２
摘
要 ：以 自然 发 酵 泡 菜 汁 液 为 茵 源 ， 不 同 的 ｐ 以 Ｈ值 作 为 对 照 ， 利 用 不 同 的 ｐ 值 作 为 筛 选 的 初 步 条 件 ， 并 Ｈ 对
耐酸乳酸 茵进行 筛选 ， 然后对 筛选 出的菌株 做定性 实验 ， 包括 ： 生溶 钙 圈， 兰 氏染 色阳性 ， 产 革 以及接 触 酶反应 呈 阴性 ． 在本 实验条件 下初 步 筛选 出耐酸性强 的 ２株 菌株 ： 菌株 ２ 菌株 ３ 同时 ， ， ， 对分 离出的乳酸茵 茵株 划线 于
１ １ ３ 试 剂 ． ．．
实验 所 用 试 剂 包 括 ： 丁 醇 ，Байду номын сангаас正 甲酸 ， 酸 ， 酸 ， 乙 乳
３ ％溴 甲酚蓝酒精 溶液 ，％过 氧化 氢等 ， ３ 均为分 析
纯 ．
１ １４ 仪 ．． 器 ．
体免疫力 ， 促进消化 ， 降低胆 固醇 ， 抑制 内毒素的发 生 ， 缓机 体衰 老 和抗辐 射 等 ． 酸乳 酸 菌在 肠道 中 延 嗜 的数量与宿主的健康状况有着密切 的关 系， 已引 这 起 了人 们 的特别 关 注 ． 酸 乳 杆 菌 产 生 的 具有 抑 菌 嗜 活性的代谢产物细菌素 ， 不仅可 以改善肠道的微生 态， 而且是一类具有潜在开发价值 的天然食品防腐 剂和饲料添加剂 ． 前 ， 目 耐酸乳酸菌 已被广泛应用于 食品、 医药 以及工业等领域 ． 本研究 的主要 目的是初 步 筛选 出可 以预 期作 为调 节 肠 道菌 群 平 衡 的微生 态
酸奶发酵过程中乳酸菌菌株的筛选与鉴定
酸奶发酵过程中乳酸菌菌株的筛选与鉴定酸奶是一种由牛奶或者其他乳制品通过乳酸菌的发酵而制成的食品。
乳酸菌是酸奶发酵的关键因素，具有良好的保健效果和口感。
在酸奶制作过程中，乳酸菌菌株的筛选与鉴定是非常重要的步骤。
本文将介绍酸奶发酵过程中乳酸菌菌株的筛选与鉴定的方法和意义。
首先，乳酸菌菌株的筛选是为了选择出适合酸奶发酵的优质菌株。
在酸奶制作中，菌株的特性包括产酸能力、耐受性、生长速度和抗菌特性等多方面。
通过筛选过程，可以找到产酸量高、生长快速、对不良菌有抑制作用的优质菌株。
这些菌株可以在酸奶制作中快速发酵，产生出优质的酸奶。
乳酸菌菌株的筛选方法有很多种，常见的包括传统筛选法、分子筛选法和生理筛选法等。
传统筛选法是指利用一系列的生理、生化和形态特性对菌株进行初步筛选。
通过这种方法，可以初步判断菌株是否具有发酵酸奶的潜力。
分子筛选法则是通过利用分子生物学技术对乳酸菌菌株进行检测，例如PCR扩增、16S rRNA测序等。
这些方法可以对菌株的遗传信息进行分析，从而确定其种属和亲缘关系。
生理筛选法则是根据菌株在不同环境条件下的生长情况，筛选出适应性强、产酸能力高的菌株。
乳酸菌菌株的鉴定是为了确保酸奶发酵过程中使用的菌株的纯度和品质。
鉴定的目的是确定菌株的种属和亚种，以及其在酸奶制作中的适用性。
鉴定的方法多样化，常用的有生化鉴定法、微生物学鉴定法和分子生物学鉴定法等。
生化鉴定法是利用菌株在特定培养基和条件下的代谢特征进行分析，通过菌株对不同物质的反应情况来确定其种属。
微生物学鉴定法则是通过观察菌株的细胞形态、培养特性等进行判断。
分子生物学鉴定法则是通过测序菌株的特定基因序列，例如16S rRNA，来确定菌株的种属和亲缘关系。
乳酸菌菌株的筛选与鉴定在酸奶发酵过程中具有重要的意义。
通过合适的筛选和鉴定方法，可以保证酸奶发酵的质量和稳定性。
优质的菌株不仅可以提高酸奶的口感和品质，还具有益生菌的功能，对消化系统和免疫系统有益。
乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌的分离鉴定主要包括以下步骤：
1. 菌落筛选：根据菌落的颜色、大小、光泽度和透明程度，挑取含溶钙圈的单菌落。
2. 分离纯化：在MRS或Elliker固体培养基上反复划线分离，直到分离到纯的单一菌落。
3. 革兰氏染色：镜检观察菌体颜色、大小、形状和排列方式。
4. 过氧化氢酶实验：将革兰氏染色阳性、过氧化氢酶阴性的菌株初步认定为乳酸菌。
5. 保藏：用终浓度为25%甘油冻存管进行菌株的保藏，置于-80℃冰箱中保存备用。
乳酸菌的试验方法主要包括以下步骤：
1. 耐酸性优良菌株筛选试验：将分离纯化的乳酸菌和实验室耐酸性较好的WHH544接种到MRS液体培养基中，接种量为2%，于37℃培养箱中培养24小时，连续活化2代后，以6000r/min离心10分钟，弃去上清液，沉淀菌体用灭菌生理盐水洗涤、离心2次后，通过麦氏比浊法调整菌悬液浓度为×108CFU/mL。
2. 其他试验：根据具体研究需求进行相关试验，例如通过不同条件培养，观察菌株生长情况；或通过发酵实验，测定乳酸菌的产酸能力等。
以上内容仅供参考，建议查阅专业微生物学书籍或文献获取更全面和准确的信息。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2011-11-3 3
主要研究内容及提纲
1 耐酸乳酸菌的初步分离 取汾酒大曲液1 mL 以 10 倍递增稀释 2 耐酸乳酸菌初步分离后的纯化. 3耐酸乳酸菌的进一步分离. 4耐酸乳酸菌的进一步纯化. 5过氧化氢酶( 接触酶) 反应.将3% 的过氧化氢滴 于涂有菌苔的载玻片上,静置1~ 3 min, 观察是否 有气泡产生.如果产生即为阴性！ 在菌落形态方面, 观察分离培养基平板上菌落的形 态( 形状、色泽、大小等) ; 在细胞形态方面, 将所 分离的菌株进行革兰氏染色, 在显微镜下观察菌体 形态.细胞染色及形态鉴定. 6菌种保存 目标菌株纯化后, 划线于MRS 固体斜 面培养基上, 于4 .c下保存.
山西师范大学 毕业论文开题报告
论文题目：耐酸乳酸菌的筛选 学院（系）：生命科学学院 专 业：生物工程 姓 名：陈波 学 号：0854010202 指导教师：张秀红
2011-11-3 1
选题的理论意义与实践意义 凡能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产 生乳酸菌的细菌统称为乳酸菌. 大量的 科研结果表明, 以乳酸菌为代表的益生 菌是人体必不可少的且具有重要生理 功能的有益菌, 其数量的多少, 直接影 响到人们的健康。大部分乳酸菌在通 过消化道到达肠道之前, 因不能耐受胃 液酸度而死亡, 而少数菌能耐酸, 此类 耐酸性乳酸菌能在人体中更有效地发 挥保健作用, 因此具有很大的开发价值。 2
2011-11-3
研究方向的动态及本文创新点
关于乳酸菌的营养、保健和在疾病预防中的作用，已引起 食品科学、微生物学、预防医学和微生态学等许多学科的 广泛重视。我国是最早利用乳酸菌发酵食品的国家之一， 有着丰富的传统发酵食品资源。在我国传统的发酵食品中， 隐藏着大量未知微生物，是探索有用微生物菌株的绝好宝 库。因此，今后在继承和开发我国传统发酵食品的同时， 应积极开展这些食品中乳酸菌的生态分布、理化特性、生 理活性物质和特殊医疗保健功能方面的研究，从中选育出 既有优良发酵特性，又有特殊医疗保健功能的优良乳酸菌， 以造福人类。 从汾酒大曲中分离乳酸菌, 并用于酸奶制造等工业生产还不 常见。本研究的目的就是从汾酒大曲中分离出耐酸性乳酸 菌, 并检定其作为发酵乳生产菌的可能性。
2011-11-3 6
6 过氧化氢酶( 接触酶) 反应.将3% 的过氧化氢 滴于涂有菌苔的载玻片上,静置1~ 3 min, 观察是 否有气泡产生. 7菌种保存.目标菌株纯化后, 划线于MRS 固体 斜面培养基上, 于4 .c下保存.
2011-11-3
7
主要参考文献
1苟兴华, 王艳文, 李 翔, 刘达玉, 王 卫等耐酸乳酸菌的筛选及初步鉴定 [ A]，成都大学生物产业学院, 四川成都 2010 02- 0095- 03 2杨郁 , 张丽靖 , 天知诚吾，耐酸性乳酸菌的筛选及应用的初步研究[ B]， 浙江大学宁波理工学院生化分院, 浙江宁波0528—9017( 2006) 3柏建玲，吴清平，张菊梅，莫树平，胡文杰，胡事君，耐胃液乳酸菌的 筛选，鉴定与驯化。[ A]，广东省微生物研究所，广东省菌种保藏与 应用重点实验室，广东省微生物应用新技术公共实验室，东莞市农业 科学研究中心，2010 0528—9017 4凌代文，东秀珠. 乳酸细菌分类鉴定及实验方法[M]. 中国轻工业出版社， 1999: 6-15. 5林 谦，马文文，酸菜中乳酸菌的筛选与初步鉴定[A].玉林师范学院 化 学与生物系 助教 博士，广西 玉林 1004-4671（2010）05-0084-03
2011-11-3
8
主要参考文献
6李海燕，徐杰，云月英，传统发酵酸马奶中瑞士乳杆菌耐酸性的筛选［A］ 乳业科学与技术，2006,158—160. 7杨郁，张丽靖，天知诚吾，乳酸菌耐酸机理的研究［ A］4食品工程， 2007,42—45 8陈 霞, 乌日娜, 孟 和, 等. 乳酸菌耐酸机理[ J] . 中国乳品工业, 2008, 36( 3) : 31- 35. 9王玉华, 张桂荣, 刘景圣. 2 株耐酸及耐胆盐嗜酸乳杆菌的分离筛选及其发 酵特性研究[ J] . 东北师大学报( 自然 科学版) , 2006, 38( 3) : 121- 124. 10管立军, 李艳芳, 程永强, 等. 产C- 氨基丁酸乳酸菌的筛选及分离鉴定[ J] . 食品科技, 2009, 34( 1) : 10- 13.
2011-11-3
9
2011-11-3
10
2011-11-3 5
1. 耐酸乳酸菌的初步分离 .取汾酒大曲液1 mL 以10 倍递增稀释方法( 1 份泡菜汁, 9 份无菌水, 再 取1 份第1 支管中溶液, 加9 份无菌水, 依次类推) 将其稀释, 然后分别 取第4~ 6 支试管稀释液1 mL, 倾注于pH 值为3. 5 和pH 为3. 0 的 MRS 液体培养基上, 放置于30 .c恒温培养箱中培养48 h. 2 耐酸乳酸菌初步分离后的纯化. 用接种环以无菌操作方式挑取自然发酵泡菜稀释液, 将挑取有样品的接 种环在MRS 固体培养基上做连续划线, 划线完毕后, 盖上培养皿盖, 倒置于温室中培养. 3 耐酸乳酸菌的进一步分离. 分别取第4~ 6 支试管稀释液1 mL, 倾注于pH值为3. 3 的MRS 液体培养 基上, 放置于30 e 恒温培养箱里培养48 h. 4 耐酸乳酸菌的进一步纯化. 耐酸乳酸菌的进一步纯化步骤按1. 2. 2 项下步骤进行. 5 细胞染色及形态鉴定. 在菌落形态方面, 观察分离培养基平板上菌落的形态( 形状、色泽、 大小等) ; 在细胞形态方面, 将所分离的菌株进行革兰氏染色, 在显微 镜下观察菌体形态.